184 BP-168 - KimyaKongreleri.org

184 BP-168
Gökkua Alabalk Karacierinden Glukoz 6-Fosfat Dehidrogenaz
Enziminin Saflatrlmas ve Karakterizasyonu
Veysel Çomakl, Ebru Akkemik, Ö.rfan Küfreviolu, Mehmet Çiftci
Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, 25240, Erzurum, Türkiye
[email protected]
Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz (D-glukoz 6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz EC 1.1.1.49; G6PD)
pentoz fosfat yolunun ilk ve kilit enzimidir. Pentoz fosfat yolunda glukoz 6-fosfat, riboz 5-fosfata
dönüürken NADPH üretilir. Bu be karbonlu eker ve onun türevleri, ATP, CoA, NAD+, FAD, RNA
ve DNA gibi hayati öneme sahip biyomoleküllerin bileenleridir. Pentoz fosfat yolu birçok doku ve
hücrede oldukça önemli bir yere sahiptir [1]. Karacierde, ksenobiyotiklerin detoksifikasyonunda
NADPH’a ihtiyaç vardr. NADPH’larn büyük bir çounluu Pentoz Fosfat yolundan salanr [2].
Bu çalmada G6PD enziminin gökkua alabalk karacierinden saflatrlmas ve
karakterizasyonu amaçlanmtr.
Bu amaçla G6PD enzimi, gökkua alabalk karacierinden saflatrld. Saflatrma ilemi
homojenatn hazrlanmas, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2',5'-ADP Sepharose-4B afinite
kromatografisi olmak üzere üç basamakta gerçekletirildi. Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre 340
nm’de spektrofotometrik olarak belirlendi [3]. Enzim saflnn kontrolü için SDS-PAGE yapld.
Ayrca jel filtrasyon kromatografisi ile tabi molekül kütlesi bulundu. Saflatrlan enzimin optimum
pH s 7,5, optimum iyonik iddeti 0,12 mM (K-Fosfat), optimum scakl 50ºC olarak belirlendi.
NADP+ ve G6P substratlar için KM ve Vmax deerleri, turnover says ve kcat/KM deeri hesapland.
KAYNAKLAR
[1] Akkemik, E, “Baz laçlarn nsan Eritrositlerinden Saflatrlan Glukoz 6-Fosfat Dehidrogenaz
Ve 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzim Aktiviteleri Üzerine Etkilerinin ncelenmesi”.Atatürk
Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 1-142, 2009
[2] Keha E, Küfreviolu Ö.. Biyokimya, Aktif yaynevi, Erzurum 2010
[3] Beutler, E. In: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps TJ, eds. Williams Hematology 5th edn.
Mc Graw-Hill Company, New York, 564-581. 1995,