KimyaKongreleri.org

7. Ulusal Afinite Teknikleri Kongresi, Ege Üniversitesi, 13-15 Eylül 2013, Çesme / Izmir
S-21
İmmobilize Metal Afinite Kriyojelleri Kullanılarak Maya Alkol
Dehidrogenaz Enziminin Saflaştırılması
Begüm Akdumana, Murat Uygunb, Deniz Aktaş Uyguna, Sinan Akgölc, Adil Denizlid
a
Adnan Menderes Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, Aydın
b
Adnan Menderes Üniversitesi, Koçarlı Meslek Yüksekokulu, Aydın
c
Ege Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyokimya Bölümü, İzmir
d
Hacettepe Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, Ankara
[email protected]
Özet: Alkol dehidrogenaz, mikroorganizmalarda ve hayvanların karaciğerinde bol miktarda
bulunan bir enzimdir. Alkol metabolizmasını içeren çeşitli fizyolojik olaylarda önemli bir role sahiptir.
Alkol dehidrogenaz enzimleri alkollerin yükseltgenmesini, aldehit ve ketonlar gibi bileşiklerin
indirgenmesini katalizler [1]. Porath 1975 yılında “immobilize metal afinite kromatografisi” (IMAK)
terimini ortaya koymuş ve bir protein molekülünün metal afinite etkileşimleri ile metal iyonlarına
bağlanarak saflaştırılabileceğini gözlemiştir. Porath katı bir destek üzerine metal iyonunu immobilize
etmek için şelatlayıcı bir ajanın kullanımının protein-metal etkileşimlerinin serbestlik derecesini
azaltacağını ve bu kısıtlama ile hem proteinlerin saflaştırılmasının sağlanacağı hem de denatürasyonun
azalabileceğini ve enzimin aktivitesini koruyabileceğini rapor etmiştir [2]. IMAK’te çeşitli destek
materyalleri kullanılmaktadır. Bunların en dikkat çekicilerinden olan kriyojeller enzim ve hücrelerin
immobilizasyonunda ve hedef molekülün saflaştırılmasında yaygın kullanım alanı bulmuştur [3].
Bu çalışmada 2-hidroksietil metakrilat (HEMA) ve glisidilmetakrilat (GMA) monomerleri
kullanılarak poli(HEMA-GMA) monolitikkriyojeli sentezlenmiş ve bu kriyojellere iminodiasetik asit
(IDA) şelatlayıcı ajanı bağlanarak Zn2+ iyonları ile şelatlaştırılmıştır. Zn2+ ile şelatlaştırılmış
kriyojellere maya alkol dehidrogenaz enziminin adsorpsiyonu sürekli sistemde gerçekleştirilmiştir.
Ardından pH 8.0 fosfat tamponunda hazırlanmış 1.0 M NaCl çözeltisi kullanılarak desorpsiyon işlemi
gerçekleştirilmiş ve 1 saatlik desorpsiyon süresi sonunda adsorplanan alkol dehidrogenaz enzimin %
93.5 oranında desorpsiyonu sağlanmıştır. Adsorpsiyon ve desorpsiyon işlemlerinin optimizasyonu
sağlandıktan sonra sentezlenen IMAK desteği kullanılarak mayadan alkol dehidrogenaz enziminin
saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. Yapılan saflaştırma işlemleri sonunda ham maya homojenatından
alkol dehidrogenaz enzimi % 62.7 aktivite verimi ile 71.2 kat saf olarak elde edilmiştir. Elde edilen
enzimin saflığı gümüş ile boyanmış SDS-PAGE ile belirlenmiştir.
Anahtar kelimeler: Alkol dehidrogenaz, IMAK, kriyojel.
Kaynaklar
[1]. Leskovac, V., Trivic, S., Pericin, D., FEMS Yeast Research, 2002, 2, 481-494.
[2]. Porath, J.,Carlsson, J., Olsson, I., Belfrage, G., Nature, 1975, 258, 598-599.
[3]. Plieva, F.M.,Galaev, I.Y., Mattiasson, B., Journal of Separation Science, 2007, 30, 1657-1671.
34
KimyaKongreleri.org