f XVI. Ulusal Kimya Kongresi, Konya, 2002 BK-S35 . . . . LAHANA BİTKİSİNDEN GLİKOZ 6-FOSFAT DEHİDROGENAZ ENZİMİNİN KISMİ SAFLAŞTIRILMASI, KARAKTERİZASYONU VE BU ENZİM ÜZERİNE BAZI ANTİBİYOTİKLERİN İNHİBİSYON VE AKTİVASYON ETKİLERİNİN İNCELENMESİ Abdülkadir ÇOBAN3, Mehmet ÇİFTÇİ2, Ö.İrfan KÜFREVİOĞLU1 1 Atatürk Üniversitesi, Fen-Edebiyat Fakültesi Kimya Bölümü-Erzurum 2 Atatürk Üniversitesi, Biyoteknoloji Uygulama ve Araştırma Merkezi-Erzurum 3 Atatürk Üniversitesi Erzincan Eğitim Fakültesi-Erzincan Giriş Glikoz 6-Fosat Dehidrogenaz enzimi (D-Glukoz 6-Fosfat : NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49, G6PD) pentoz fosfat yolunun ilk ve allosetrik enzimidir. Pentoz fosfat yolunun hedefi indirgeyici olaylar için gerekli NADPH üretmek ve ATP, NAD+, FAD, DNA, RNA gibi bileşikler için ön bileşik olan riboz 5-fosfat sentezlemektir (1) GöPD'nin ıspanaktan iki izoenzimi saflaştırılmış, bunlardan bir tanesi kloroplastlarda, diğeri ise sitoplazmada bulunmuştur (2). Bezelye kloropalstlanndan kısmi olarak saflaştırılan GöPD'nin üzerinde ışık ve diğer modülatörlerin etkileri incelenmiştir (3). Ispanak kloroplastlanndan elde edilen GöPD'nin enzim aktivitesi üzerine; NADPH/NADP+ oranı, pH ve Mg+2 konsantrasyonu değişikliğinin etkileri araştırılmıştır (4). Yöntem Bu çalışmada GöPD enzimi, amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz teknikleri ile saflaştırıldı. Tüm bu işlemler boyunca sıcaklık +2 C'de kontrol altında tutuldu. Enzimin molekül ağırlığı jel filtrasyon kromatografisi ile tayin edildi. Enzimin stabil olduğu pH, optimum pH, 25 C ve optimum pH'da Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla glikoz ö-fosfat ve NADP+ için Km ve Vmax değerleri bulundu. Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre 340 nm'de spektrofotometrik olarak belirlendi. Bütün kinetik çalışmalar için bu metot uygulandı (5). Sonuç Enzimin homojenat hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz basamaklarından sonra %35.1 oranında 1.275 kat saflaştığı belirlenmiştir. Enzimin stabil olduğu pH ö.O ve optimum pH'sı 8.0 olarak bulunmuştur. Kaynaklar 1. E.E. Keha, Ö.İ. Küfrevioğlu, Biyokimya, 2000, Aktif Yayınları, s. 338. 2. C. Schnarrenberger, A. Oeser, N. Tolbert, Archieves of Biocfıemistry and biophysics 1973, 154,438-448. 3. L.E. Anderson and J.X. Duggan, Plant Physiol., 1976, 58, 135-139. 4. K. Z. Lendzian, Plant Physiol., 1978, 141-105-110. 5. Eb Beutler, Red Celi Metabolism 1971, 68-70. 403