Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuar Tanısı için Saha Rehberi ENDEMİK (İTHAL) MİKOZLAR Vadi Ateşi, Çöl Ateşi, Çöl Romatizması, Koksidial Granülom Akut akciğer koksidioidomikozu Kronik akciğer koksidioidomikozu Deri koksidioidomikozu Koksidioidomikoz menenjiti (G02.1) Yaygın koksidioidomikoz Akut akciğer histoplazmozu (H.capsulatum) Kronik akciğer histoplazmozu (H.capsulatum) Yaygın histoplazmoz (H.capsulatum) Tanımlanmamış Amerika histoplazmozu (H.capsulatum) Afrika histoplazmozu (H.duboisii) Kuzey Amerika Blastomikozu; Gilchrist hastalığı Akut akciğer blastomikozu Kronik akciğer blastomikozu Deri blastomikozu Yaygın blastomikoz Güney Amerika blastomikozu, Parakoksidial Granülom Akciğer parakoksidioidomikozu Yaygın parakoksidioidomikoz Sporotrikoz Penisilloz EPİDEMİYOLOJİSİ ICD-10 B38 ICD-10 B38.0 ICD-10 B38.1 ICD-10 B38.3 ICD-10 B38.4 ICD-10 B38.7 ICD-10 B39.0 ICD-10 B39.1 ICD-10 B39.3 ICD-10 B39.4+ ICD-10 B39.5 ICD-10 B40 ICD-10 B40.0 ICD-10 B40.1 ICD-10 B40.3 ICD-10 B40.7 ICD-10 B41 ICD-10 B41.0 ICD-10 B41.7 ICD-10 B42 ICD-10 B48.4 “Endemik (ithal) mikoz”, belirli coğrafi bölgelerde endemik olarak bulunan Histoplasma capsulatum (Amerikan histoplazmozu), H.duboisii (Afrika histoplazmozu), Blastomyces dermatitidis (Kuzey Amerika blastomikozu), Coccidioides immitis (Kaliforniya koksidioidomikozu), C.posadasii (Kaliforniya dışı koksidioidomikozlar), Paracoccidioides brasiliensis (parakoksidioidomikoz), Penicillium marneffei (penisilloz marneffei) ve Sporothrix schenckii (sporotrikoz) türlerinin neden olduğu tabloların genel adıdır. Endemik (ithal) mikoz etkeni mikroorganizmaların diğer bir ortak özelliği termal dimorfizm göstermeleridir. Genel bulaşma çevresel ve toprak teması sonucu enfeksiyöz konidyaların solunum yoluyla alınması şeklindedir. KLİNİK ÖZELLİKLERİ Solunum yolu ile alınan konidyumlar akciğerlerde primer enfeksiyon oluştururlar. Genellikle bağışıklığı sağlam bireylerde kendiliğinden iyileşen tablolar oluştururken, bağışıklığı baskılanmış kişilerde doku ve organ yayılımları görülür. [ENDEMİK (İTHAL) MİKOZLAR] Sayfa 1 Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi ENDEMİK (İTHAL) MİKOZLARIN TANISI İÇİN LABORATUVAR İNCELEMESİ Laboratuvara ne tür klinik örnekler gönderebilirim? Hastanın bir “endemik (ithal) mikoz” vakası olabileceği akla getirildiğinde, laboratuvara hangi klinik örneklerin gönderileceği hastalığın yerleşimine göre değerlendirilir. Bunlar; Örnek almak için en uygun zaman nedir? Alt solunum yolu örnekleri – balgam, bronkoalveolar lavaj (BAL), endotrakeal aspirat (ETA), akciğer biyopsisi; Biyopsi örnekleri – deri, mukoza, yerleşime göre lenf nodu, ülser, karaciğer, dalak; Apse materyali; Kan, kemik iliği; Beyin omurilik sıvısı (BOS) olabilir. Örnek almak için en uygun zaman antifungal tedavi öncesidir. Kan kültürleri mümkünse hastanın ateşlenmeye başladığı erken bir dönemde alınmalıdır. Eğer antifungal tedavi alıyorsa o günkü doz verilmeden önce örnek alınmalıdır. Balgam mümkünse sabah aç karına alınmalı; mantar enfeksiyonu şüpheli her durumda kültür için 3 günde arka arkaya alınmış en az üç balgam örneği gönderilmelidir. Örnekle birlikte göndermem gereken özel bir form var mı? Ek-4’de verilen veya benzeri bir “Laboratuvar Bilgi Formu” mutlaka ve eksiksiz olarak doldurulmalı ve örneklerle birlikte laboratuvara gönderilmelidir. Formda ön tanı mutlaka yazılmalı; ayrıca varsa endemik bölgede yaşama veya endemik bölgeye seyahat öyküsü, meslek (toprak ile mesleki temas bulunup bulunmadığı; bahçıvanlık, çiftçilik, odunculuk, kereste işçiliği, madencilik v.b.) ve konağın immün durumu mutlaka not edilmelidir. Örnek almak için gerekli malzemeler nelerdir? Nasıl temin edebilirim?* Klinik örnekleri hastadan nasıl almalıyım? Gerekiyorsa, hangi işlemleri uygulamalıyım? Şehir içi Şehirlerarası (kısa mesafe) (uzun mesafe) taşıma süre-sıcaklık taşıma süre-sıcaklık Kan kültürü şişeleri otomatik kan kültür cihazı için hazır veya laboratuvar tarafından hazırlanmış, konvansiyonel Kan (kültür için): Aseptik koşullarda alınmalıdır. Kültür şişelerinin lastik tıpası %70’lik izopropil alkol veya fenol bileşikleri ile dezenfekte edilir ve 1 dk beklenir. Damara (ven) girilecek deri bölgesi antisepsi uygulamadan önce palpe edilir. Damar bölgesinin antisepsisi için: 1) bölge %70’lik alkolle silinir, 2) iyotlu bileşik merkezden başlayarak çevreye doğru yoğun olarak sürülür, 3) antiseptiğin kurumasına izin verilir, 4) bu bölgedeki ven steril eldivensiz palpe edilmez! 5) kan alınır, 6) kan alımından sonra bölge alkolle silinerek iyot uzaklaştırılır. ≤2 s; OS ≤24 s; OS NOT: Otomatik kan kültürü sistemi kullanıcıları, örnek miktarı ve diğer hususlarda sistemin önerdiği yöntemi izlemelidir! Şişe tıpasının dezenfeksiyonu için: %70’lik izopropil alkol veya fenol bileşikleri On dakika içinde en az 2 farklı venden toplam 24-30 ml kan alınmalı, üç farklı şişeye her birine 8-10 ml olacak şekilde dağıtılmalıdır. Bu şekilde 1 kan kültür seti (üç şişe) hazırlanmış olur. Uygun tek bir ven varsa 20 dk arayla 3 defada toplam 24-30 ml kan alınır ve benzer şekilde dağıtılır. Antisepsi için: %70’lik alkol ve iyotlu bir bileşik ya da klorheksidin <10 yaş çocuklardan 4-10 ml (2 şişeye 2-5 ml olacak şekilde dağıtılır); yeni doğandan 1-1.5 ml (tek şişe) kan alınmalıdır. Kan alınır alınmaz lastik tıpası dezenfekte edilmiş uygun kan kültürü şişesine aktarılır. Klinik duruma göre 24 saat içerisinde 2-3 set kan kültürü alınabilir. İnoküle edilmiş şişeler mümkünse hemen laboratuvara ulaştırılmalıdır. Kan kültürü şişeleri asla buzdolabına konmaz! Kemik iliği için heparinli veya sodyum oksalatlı vakumlu kan alma tüpü veya Kemik iliği biyopsisi (kültür için): Aseptik şartlarda, hekim tarafından alınır. İğnenin gireceği bölge cerrahi kesi yeri gibi hazırlanmalıdır! En az 0.5 ml kemik iliği alınmalıdır. Heparinize kemik iliğinin hasta yanında uygun kültür besiyerine ekilmesi idealdir. Besiyeri yoksa örnek heparinli veya sodyum oksalatlı bir kan tüpüne alınır. lizis-santrifügasyon tüpü (1.5 ml pediatrik isolator veya elle) NOT: Antikoagülan olarak kesinlikle sitrat kullanılmaz! Örnek 30 dk içinde laboratuvara ulaşamayacaksa izolasyon şansını artırmak için lizis-santrifügasyon tüpüne (pediatrik Isolator) alınması tercih edilir. Kemik iliği biyopsisi (mikroskopi için): Heparinli veya sodyum oksalatlı bir tüpe alınır. Sayfa 2 Taşıma esnasında örnekleri 25-35C arasında tutacak bir portatif inkübatör kullanmakŦ ideal olur ≤2 s; OS <24 s; OS Taşıma esnasında örnekleri 25-35C arasında tutacak bir portatif inkübatör kullanmakŦ ideal olur [ENDEMİK (İTHAL) MİKOZLAR] Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi Örnek almak için gerekli malzemeler nelerdir? Nasıl temin edebilirim?* Klinik örnekleri hastadan nasıl almalıyım? Gerekiyorsa, hangi işlemleri uygulamalıyım? Steril, vida kapaklı, geniş ağızlı kap Balgam: Örnek kalitesi önemlidir. Tükürük örnekleri kabul edilmez. Mümkünse sabah aç karına alınmalıdır. Hastanın postnazal akıntı değil alt solunum yollarından gelen bir sekresyon örneği verebilmesi için iyi bir şekilde yönlendirilmesi gerekir; nasıl örnek vereceği hastaya iyi tarif edilmelidir. Örneğin bir hemşire ya da hekim gözetiminde toplanması ideal olur. Mümkünse oral florayı uzaklaştırmak için hasta ağzını çalkalamalı veya gargara yapmalıdır. Derin bir inspirium ve ardından öksürük ile çıkarılmış, en az 3 ml balgam, uygun örnek kabına toplanır. % 3-10’luk hipertonik tuzlu su Balgam provoke edilebilir (indüklenmiş balgam). Önce mümkünse hasta dişetlerini ve dilini fırçalayıp ağzını su ile çalkalamalıdır. Bir nebulizör yardımı ile hastaya % 3-10’luk hipertonik tuzlu su solutulur (25 ml veya 15-20 dk boyunca). Sonra derin inspirium ve öksürük ile balgam örneği uygun örnek kabına en az 1-2 ml toplanır. İndüklenmiş örneğin laboratuvarda tükürük sanılarak reddedilmemesi için üzerine indüklendiğine dair bir not yazılmalıdır! Steril, vida kapaklı (sızdırmaz) tüp veya geniş ağızlı kap, BAL/ETA fırçalama ya da yıkama: Hekim tarafından bronkoskopi/operasyon şartlarında örnek alınır. Steril distile su veya SF kullanılır. Mümkünse 5-10 ml örnek alınmalıdır. Örnek, yıkayarak ya da aspire edilerek, uygun örnek kabına toplanır. Fırça 2-3 ml SF içeren steril bir taşıyıcı tüpe konur. ≤2 s; OS Biyopsi (transbronşiyal veya açık akciğer biyopsisi, doku): Aseptik şartlarda, hekim tarafından alınır. En az 2-3 g doku örneği 2-3 parça halinde alınmalıdır. Alınan örnek, steril, geniş ağızlı, vida kapaklı bir kaba konur. Kurumayı önlemek için kaba 1-2 ml steril SF eklenir. <1 s; OS ≤24 s; OS <1 s; OS ≤24 s; OS ≤2 s; OS <24 s; OS Steril distile su veya SF Steril, vida kapaklı, geniş ağızlı kap, Steril SF $ Şehir içi Şehirlerarası (kısa mesafe) (uzun mesafe) taşıma süre-sıcaklık taşıma süre-sıcaklık ≤2 s; OS <24 s; +4°C >2 s; +4°C ≤24 s; +4°C >2 s; +4°C Dokunun üzerine sürülmekle yetinilmiş bir silgiç asla örnek olarak gönderilmemeli; örnek formalin içermemeli ve asla buzdolabına konulmamalıdır! Steril, vida kapaklı, geniş ağızlı kap, Steril SF Deri biyopsisi: Yaygın deri lezyonlarının veya travma sonrası sekonder olarak gelişen küçük lezyonların varlığında deri biyopsisi yararlıdır. Silgiç örneği kesinlikle kabul edilmez (çünkü pamuk ve benzeri hifsi yapılar mikroskopik değerlendirmede karışıklığa neden olur!) Örnek cerrahi olarak ya da “punch biyopsi” tekniği ile alınır. Sağlam deri ile lezyonun kesişme bölgesinden aseptik koşullarda 1-2 parça örnek alınmalı ve kurumayı önlemek için üzerine 1-2 ml steril SF eklenmelidir. Kültür yapılacaksa en az 2 parça alınmalıdır. Örnek formalin içermemelidir! Steril şırınga Steril SF Lenf nodu/apse/yumuşak doku aspirasyon örneği: Deri iyot içeren dezenfektan ile 3 kez silinir, kuruması beklenir. Örnek bir şırınga ile aspire edilerek alınır. Lenf bezinde süpürasyon yoksa, doku içine önce şırınga aracılığıyla 0.5-1 ml steril SF enjekte edilir. Sonra aspirasyon yapılır. Alınan örneğin miktarı 1 ml’den az olmamalıdır. Aspire edilen materyal steril vida kapaklı bir tüpe aktarılır. Steril pamuk uçlu silgiç, Aspirat asla şırınga içinde laboratuvara gönderilmemelidir! Lam, bir kenarı buzlu (önceden temizlenip hazırlanmış) Apse açık ise, aspirasyon yapılır ya da örnekleme için steril bir silgiç ile apsenin içine girilerek lezyon duvarından sürtme yapılır. Kültür ve yayma için ayrı ayrı 2 silgiç kullanılması idealdir. Silgiçlerin biri Stuart veya Amies TM içeren tüpe konur. Diğeri temiz lam üzerine 1-2 cm çapında sürülerek yayılır. Lam havada ~10 dk kurutulur ve üzerine saf metanol damlatılarak yayma fikse edilir. Uygun bir lam kutusuna konarak tüplerle birlikte laboratuvara gönderilir. Steril, vida kapaklı, geniş ağızlı kap veya Steril vida kapaklı tüp, Saf metanol Stuart veya Amies Transport Medium (TM) Aspirat örnekleri asla buzdolabına konmamalıdır! [ENDEMİK (İTHAL) MİKOZLAR] Sayfa 3 Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi Örnek almak için gerekli malzemeler nelerdir? Nasıl temin edebilirim?* Klinik örnekleri hastadan nasıl almalıyım? Gerekiyorsa, hangi işlemleri uygulamalıyım? Steril, vida kapaklı (sızdırmaz) tüp BOS: Aseptik koşullarda LP yapılarak hekim tarafından alınır. Önce iyotlu bir preparat ile bölgeye antisepsi uygulanır. Ponksiyon iğnesi ile L3-L4, L4-L5 ya da L5-S1 arasından girilir. Subaraknoid bölgeye ulaşılır. Ponksiyon iğnesinin mili çıkarılır ve her birine 1-2 ml sıvı olacak şekilde ‡ 3 ayrı tüpe örnek toplanır. Mikolojik inceleme için alınan BOS örneği asla buzdolabına konmaz, asla dondurulmaz! (DİKKAT: ağzı pamuk tıkaçlı veya flasterli bir tüp, asla kullanılmaz!) # Şehir içi Şehirlerarası (kısa mesafe) (uzun mesafe) taşıma süre-sıcaklık taşıma süre-sıcaklık ≤15 dk; oOS veya 30 C ≤24 s; OS Kısaltmalar - s: saat; dk: dakika; OS: oda sıcaklığı; LP: lomber ponksiyon; SF: serum fizyolojik * Tabloda önerilen örnekleme malzemesini -ayrıca belirtilmedikçe- hastanenizin laboratuvarından temin edebilirsiniz. Ŧ Taşıma esnasında örneklerin aşırı sıcaklık değerlerine (<18C veya >37C) maruz kalmasına kesinlikle izin verilmemelidir. $ Hastalardan alınan iyi bir örnek X10 büyütmede bir alanda ≤10 skuamöz epitel hücresi bulundurur. # Testin çalışılacağı laboratuvara örneğin alınması ve gönderilmesi ile ilgili özel bir uyarılarının olup olmadığını sormanız önerilir. ‡ BOS örneğinin laboratuvara gönderilmesi ile ilgili karar, tüp sayısına göre verilir. Genellikle BOS örneği 3 tüpe alınır: biyokimyasal, mikrobiyolojik ve sitolojik incelemeler için. Eğer yalnızca 1 tüp örnek alınabilmiş ise bu tüp mikrobiyolojiye gönderilmelidir. Güvenlik önlemleri nelerdir? Kendimi nasıl koruyabilirim? En ciddi risk kan alma işlemi esnasında personele kan-kaynaklı patojenlerin (özellikle HIV ve hepatit etkenleri) bulaşma riskidir. Kan alma, serum ayırma gibi işlemler yapılırken kesinlikle eldiven giyilmeli, standart güvenlik önlemleri uygulanmalıdır. Ayrıca her türlü klinik örnek “enfeksiyöz” kabul edilmeli ve örnekleri alırken, dokunurken, çalışırken standart güvenlik önlemleri alınmalı, uygun kişisel koruyucu ekipman giyilmelidir. Örnekleri hangi laboratuvara gönderebilirim? Bir endemik ithal mikozdan şüphelendiğinizde, örnekleri size en yakın Mikoloji Birimi olan Üniversite veya Eğitim Araştırma Hastanesi laboratuvarına ya da Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Mikoloji Laboratuvarına gönderiniz (adres ve iletişim bilgileri için bkz. Ek-5). Hangi durumlarda örnekler laboratuvara kabul edilmez? Şu örnekler laboratuvara kabul edilmez: Hangi laboratuvar incelemelerini isteyebilirim? Sonuçları ne kadar zamanda alabilirim? Sonuçları nasıl yorumlamalıyım? Boyalı mikroskopik inceleme ½-1 gün Mikroskopi raporunda mantar elemanlarının görüldüğünün belirtiliyor olması tanıyı büyük oranda destekler. Kesin tanı kültür ile doğrulanmalıdır! Mantar kültürü 3-4 hafta (etkene göre değişebilir)* Mantar kültüründe “endemik (ithal) mikoz” etkenlerinden birine ait “üreme” gözlenmesi kesin tanı koydurucudur. Kan kültürü [AerobAnaerob] otomatik sistem En az 10 gün* Bir kan kültür setinde birden fazla şişede üreme olması oldukça anlamlıdır. Tek şişede üreme olması kontaminasyon olarak değerlendirilmemeli, klinik önemi tartışılmalıdır. taşıma kabı hasar gördüğü için sterilitesi bozulmuş veya kabın dışına sızmış örnekler; önerilen süre içerisinde ve uygun sıcaklıkta gönderilmemiş örnekler; formalin içine alınmış veya kurumuş biyopsi örnekleri; dokunun üzerine sürülmüş silgiç örneği; şişe, tüp veya örnek kabı üzerinde hasta bilgileri yazılı olmayan örnekler; hastaya ait uygun bir istek formu düzenlenmemiş örnekler. * Sonucun çıkış süresi için laboratuvar ile bağlantı kurunuz! Daha fazla bilgi için önerilen kaynaklar: 1. Tıbbi Mikrobiyoloji. Çeviri eds. Başustaoğlu A, Yıldıran ŞT, Tanyüksel M, Yapar M. 6. baskı, Atlas Kitapçılık, Ankara, 2010. 2. Klinik Mikrobiyoloji (Manual of Clinical Microbiology. Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Landry ML, Pfaller MA eds) 9. Baskı. Çeviri ed. Başustaoğlu A, Atlas Kitapçılık, Ankara, ISBN 978-975-7175-84-1, 2009. 3. Clinical Mycology. Anaissie EJ, McGinnis MR, Pfaller MA, eds. Churchill Livingstone, 2009. Sayfa 4 [ENDEMİK (İTHAL) MİKOZLAR]