Kitosan Kaplı Manyetik Nanoparçacıklara Kovalent Bağlanma

advertisement
3. Ulusal Polimer Bilim ve Teknolojisi Kongresi ve Sergisi,
12 – 14 Mayıs 2010, Kocaeli Üniversitesi – Kocaeli
SS 2
Kitosan Kaplı Manyetik Nanoparçacıklara Kovalent Bağlanma Yöntemi
ile Lakkaz Enziminin İmmobilizasyonu
Nüzhet Ayça Kalkana, Serpil Aksoya, Nesrin Hasırcıb
a
b
Gazi Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, 06500, Teknikokullar, ANKARA
Ortadoğu Teknik Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, 06531, ANKARA
[email protected]
Manyetik nanoparçacıklar, son yıllarda özellikle biyomedikal ve biyoteknolojik
uygulamalarda kullanılmalarına yönelik araştırmaların üzerinde yoğunlaştığı nano yapılı
malzemeler arasında önemli bir yer edinmiştir. Manyetit (Fe3O4) gibi manyetik nanoparçacıkların
çeşitli doğal ya da sentetik polimerlerle işlevsel hale getirilmesi yoluyla hazırlanabilen fonksiyonel
manyetik nanoparçacıklar; manyetik rezonans görüntülemede, ilaç taşıma sistemlerinde, doku
onarımında, tümörlerin ısı ile bozundurulmasında (hipertermi uygulamalarında), hücrelerin, RNA
ve DNA gibi biyomoleküllerin biyolojik ortamlardan manyetik ayırma yöntemi ile ayrılmasında ve
enzimlerin ve proteinlerin immobilizasyonunda destek materyal olarak kullanılmaktadırlar [1].
Manyetik destekler, immobilize enzimin tepkime ortamından santrifüjleme, süzme gibi işlemlere
gerek kalmadan, bir mıknatıs yardımıyla kolaylıkla uzaklaştırılabilmesini sağlarlar. Böylelikle,
immobilize enzimle gerçekleştirilen uygulamaların daha pratik ve ekonomik hale gelmesine imkan
verirler. Lakkaz, oksijenin suya indirgenmesini ve aynı zamanda substratının yükseltgenmesini
katalizleyen ve endüstride pamuğun ağartılması, kağıt hamurundan ligninin uzaklaştırılması, tekstil
endüstrisi atık sularındaki bazı boyarmaddelerin renginin giderilmesi uygulamalarında yaygın
olarak kullanılan bir enzimdir [2].
Bu çalışmada, manyetik Fe3O4 nanoparçacıkları ters-faz süspansiyon metodu ile doğal bir
polimer olan kitosanla kaplanarak fonksiyonel hale getirilmiş ve Trametes versicolor’ dan elde
edilen lakkaz enzimi, manyetik Fe3O4-kitosan nanoparçacıklarının aktifleştirilmesinin ardından, bu
nanoparçacıklara kovalent bağlanma ile immobilize edilmiştir.
Manyetik Fe3O4-kitosan nanoparçacıklarının geçirimli elektron mikroskobu (TEM) ile
alınan görüntüleri, bu nanoparçacıkların 1,0-4,8 nm kalınlığında kitosanla kaplandığını; titreşimli
örnek manyetometrisi (VSM) sonuçları bu nanoparçacıkların doyum mıknatıslanmasının 25,2
emu/g olduğunu ve hemen hemen süperparamanyetik özellik sergilediklerini göstermiştir. Lakkaz
enziminin manyetik Fe3O4-kitosan nanoparçacıklarına immobilizasyonu, nanoparçacıkların
yüzeyindeki hidroksil gruplarının karbodiimit ve siyanür klorür ile aktifleştirilmesi ve enzimin
kovalent bağlanması ile gerçekleştirilmiş ve immobilize sistemlerde enzimin varlığı enerji dispersif
x-ışını analizörlü taramalı elektron mikroskobu (SEM/EDS) ile belirlenmiştir. Serbest ve
immobilize lakkazların aktifliğine pH, sıcaklık ve ABTS (2,2’-azino-bis(3-etilbenziltiazolin-6sülfonik asit)) substratı derişiminin etkisi incelenmiş; optimum pH, sıcaklık, Km ve Vmak değerleri
belirlenmiştir. İmmobilize lakkazlar 1 gün içerisinde 30 kez kullanıldıklarında aktifliklerini % 71% 81 arasında korumuşlardır. Lakkaz immobilize edilmiş manyetik Fe3O4-kitosan
nanoparçacıkları, tepkime ortamında kolayca dağıtılabilmiş ve mıknatıs yardımıyla ortamdan
hızlıca toplanabilmiştir.
Kaynaklar:
[1] Gupta, A. K.; Gupta M. Biomaterials, 26, 3995-4021, 2005.
[2] Kunamneni, A.; Plou, J.; Alcalde, M. Recent Patents on Biotechnology, 2, 10-24, 2008.
10
Download