[Pt(bpy)(dicnq)]+2 Kompleksinin Sentezi ve DNA Etkileşimlerinin Belirlenmesi Ufuk Yıldız, Burak Çoban, Abdurrahman Şengül Bülent Ecevit Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, Zonguldak. Yarışmalı Floresans Çalışması: GİRİŞ Son yıllarda küçük moleküllerin DNA’ya bağlanmalarının incelenmesi çok ilgi çeken bir çalışma alanı olmuştur. Spesifik DNA hedefli ilaçların sentezi için bu moleküllerin DNA’ya bağlanma türünü belirlenmesi son derece önemlidir. Moleküller DNA’ya interkalatör, kovalent, boşluk bağlayıcı ve elektrostatik olarak bağlanabilirler. Cis-platinin DNA etkinliğinin keşfedilmesinden sonra birçok platin kompleksi sentezlenmiş ve DNA etkileşimleri çalışılmıştır. DICNQ ligandının Floresans spektroskopisi moleküllerin DNA etkileşimlerinin belirlenmesinde kullanılan diğer bir önemli metottur. DNA’ya interkalasyon yaptığı kesin olarak bilinen Etidyum bromür (EB) molekülünün DNA baz çitlerinin arasından itilmesi takip edilerek molekülün DNA’ya interkalasyon yapıp yapmadığı belirlenebilir. kobalt, nikel, mangan ve rutenyum kompleksleri yoğun bir şekilde çalışılmış ancak platin kompleksleri çalışılmamıştır [1, 2, 3]. DNA’ya interkalasyon yoluyla bağlanan moleküller genelde katyonik bir merkeze ihtiyaç duyarlar. Bu katyonik merkez [Pt(bpy)(dicnq)]2+ (1) kompleksinde platin metali ve bunun yanında kuaternize aminerle (2) de sağlanabilir. Her iki madde de tamamen düzlemseldir. Bu sayede her iki kompleksin de DNA baz çiftleri arasına interkalasyon yapması beklenmektedir. Ligantda bulunan geniş p sistemi, DNA baz çiftlerinin sahip olduğu p sistemi ile örtüşerek bağlanmayı sağlayacaktır. Şekil 3. 20 mM EtBr ve 100 mM sığır DNA’ sı içeren çözeltinin artan 1 ve 2 derişimiyle elde edilen floresans spektrumu MADDELERİN SENTEZİ +2 H2O N Pt N N C N N H2O N N C N N C N 2NO3- Pt + N N N C N N Eklenen kompleks miktarı arttıkça interkalasyon yapmış EB molekülünün miktarının azaldığı yani her iki kompleksinde EB moleküllerini DNA baz çiftleri arasından iterek kendisinin yerleştiği anlaşılmaktadır. Bu yöntemle anlık bağlanma sabitleri 1 için (Kapp) 8,78 x 104 2 için (Kapp) 3,76 x N 105 olarak hesaplanmıştır. ([Pt(bpy)(dicnq)]+2 Agaroz Jel Elektroforez: N N C N Br BrN N C Br Br- N N C N Plazmid DNA’lar ile elektrofez uygulandığında en hızlı göç edecek olan bozulmamış form olan + N N C N N Form I, daha geride lineer form Form III ve en geride ise bozulmuş sarmal yapıdaki Form II görülecektir[4]. q-dicnq Şekil 1. [Pt(bpy)(dicnq)]+2 ve q-dicnq Sentezi DNA ETKİLEŞİMLERİNİN BELİRLENMESİ Şekil 4. a) hat 1 yalnız pBR322, hat 2-7 pBR322 + sırasıyla 20, 40, 60, 80, 100, 200 mM [Pt(bpy)(dicnq)]+2 b) hat 1 yalnız pBR322, hat 2-7 pBR322 + sırasıyla 20, 40, 60, 80, 100, 200 mM q-dicnq UV Titrasyon: Elektronik absorpsiyon spektroskopisi metal komplekslerinin DNA ile olan etkileşimlerinin Şekil 4a ve 4b incelendiğinde platin kompleksinin 20 mM derişimden itibaren plazmid DNA’yı niteliğini öğrenmek için geçerli bir metottur. Eğer etkileşim bir interkalasyon ise, yani metal bozmaya başladığı görülmektedir. Buna karşın bağlanma sabiti platin kompleksine yakın olan kompleksinin düzlemsel aromatik halkaya ait olan kısmının komşu iki DNA baz çiftinin arasına quarternize türevin 200 mM derişimde dahi plazmid DNA’da belirgin bir bozulmaya yol açmadığı girmesi ve DNA’nın yapısını bozması durumunda ligandın p orbitali ile DNA baz çiftlerine ait p görülmektedir. Buna platinin doğrudan DNA ile bağ yapmasının sebep olduğu düşünülmektedir. orbitali girişimde bulunarak hem dalga boyunda hem de absorpsiyon yoğunluğunda değişimler Böylelikle plazmid DNA’da form II ve form III görülmeden doğrudan küçük parçalara meydana gelecektir.4 ayrılmaktadır. SONUÇ UV titrasyon ve yarışmalı floresans çalışmaları sonucunda her iki maddenin de DNA ile baz çiftleri arasına interkalasyon yaparak etkileştiği anlaşılmıştır. Hesaplanan bağlanma sabiti değerleri karşılaştırıldığında kuarternize yapının (2) DNA’ya platin kompleksinden (1) daha kuvvetli bağlandığını göstermektedir. Buna karşın elektroforez çalışmasında görüldüğü gibi 1 yapısındaki Platin(II) iyonu sayesinde plazmid DNA’yı çok düşük derişimlerinde bile parçalamıştır. Maddelerin bağlanma sabitlerindeki fark floresans çalışmasında daha yüksek çıkmıştır. Bunun sebebi metal Şekil 2. 1 ve 2’nin 0,5-40 mM DNA ile titrasyonundan elde edilen UV absorbsiyon spektrumu kompleksinin (1) DNA’ya bağlanırken bu bağlanmaya elektrostatik etkileşimin katkısının diğer bileşiğe göre daha yüksek olmasıyla açıklanabilir. Şekil 2’de kompleksin DNA’ya bağlanma sabiti hesaplamasında eşitlik 1 kullanılarak çizilmiş grafik görülmektedir. Grafiklerin eğiminden bağlanma sabiti değeri 1 için (Kb) 6,21 x 105 2 için (Kb) 8,02 x 105 olarak hesaplanmıştır. Yapılan çalışmada tuz derişiminin 1’in bağlanma sabiti değerine etkisinin daha yüksek olduğu dolayısıyla 1’in DNA’ya bağlanma kuvvetine elektrostatik etkileşimin katkısının daha fazla olduğu görülmüştür. Kaynaklar: [1]. Barton J K and Raphael A L (1984), Journal of the American Chemical Society 106 (8) 2466-2468. [2]. Sastri C V, Eswaramoorthy D, Giribabu L and Maiya B G (2003), Journal of Inorganic Biochemistry 94 (1-2) 138-145. [3]. Wu B-Y, Gao L-H, Duan Z-M and Wang K-Z (2005), Journal of Inorganic Biochemistry 99 (8) 1685-1691. [DNA] / (eA - ef) = [DNA] / (eB - ef) + 1 / Kb (eB - ef) Eşitlik 1. [4]. Xu Z-D, Liu H, Wang M, Xiao S-L, Yang M and Bu X-H (2002), Journal of Inorganic Biochemistry 92 (3–4) 149-155.