MEME KANSERİ KÖK HÜCRELERİNİN GEN EKSPRESYON PROFİLİ

MEME KANSERİ KÖK
HÜCRELERİNİN GEN EKSPRESYON
PROFİLİ
Sait Murat Doğan, A. Pınar Erçetin, Zekiye Altun,
Duygu Dursun, Safiye Aktaş
Dokuz Eylül Üniversitesi
Onkoloji Enstitüsü, İzmir
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 1 / 14
Meme Kanseri
Kadınlarda en sık görülen kanser tipi
Kanser ölümlerinde 2.sırada
Tedavisi;
Tümörün büyüklüğü, evresi, büyüme hızına ve moleküler
karakteristiklerine göre değişmekte
Karsinogenezinde başlıca;
– p53, c-myc, BRCA1, BRCA2, HER2, bcl genleri sorumlu
– karmaşık moleküler karakteristiği nedeniyle sıklıkla
araştırma konusu
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 2 / 14
Kanser Kök Hücresi
Normal kök hücrelerle benzer özelliklere sahip
Kendini yenileme
Birçok hücreye farklılaşma
Tümör oluşturma yeteneği
Belli bir kanser içinde bulunan her tür
hücreye dönüşebilme
Tümör içinde bir alt populasyon
İlaç direnci , Relaps, Metastaz !!!
Heterojen tümör populasyonundan izole etmek için
özelleşmiş hücre yüzey belirteçleri kullanılmaktadır
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 3 / 14
Çalışmanın Amacı
Farklı
moleküler
ve
biyolojik
karakteristikteki
meme
kanseri
hücrelerinin kök hücrelerindeki gen
ekspresyon profilindeki farklanmaları
ortaya çıkararak yeni moleküler hedefler
bulunması amaçlanmıştır.
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 4 / 14
Materyal ve Metod
Materyal:
CD44+ CD24- manyetik işaretli izolasyon kiti (MagCellect)
Meme kanseri hücre hatları ve ortamları
–
–
–
–
MDA-MB-231
MCF-7
HTB-133
HTB-20
RNA izolasyon kiti (QIAGEN)
cDNA sentez kiti (QIAGEN)
PAHS-131Z (meme kanseri ilişki 84 genlik array) (QIAGEN)
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 5 / 14
Materyal ve Metod
Metod:
Hücre hatlarının kültüre edilmesi
Manyetik yolla CD44+CD24- meme kanseri kök hücre izolasyonu
Kök ve kontrol hücrelerinden total RNA izolasyonu
RNA saflığı ve miktarının spektrofotometrik ölçümü
cDNA sentezi
RT-PCR ile PAHS-131Z gen array
SA Bioscience’ın data analysis expression sayfasında
(http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php) heat
map ve clustergram ekspresyon
analizlerinin yapılması
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 6 / 14
Materyal ve Metod
Hücre Hatları:
Hücre Adı
ER
PR
HER2
Alt Tipi
Tümör Tipi
Kaynak
MDA-MB-231
(HTB-26)
-
-
-
Bazal B
Metastatik
Adenokarsinom
Pleural
Efüzyon
MCF-7 (HTB-22)
+
+
-
Luminal
Metastatik
Adenokarsinom
Pleural
Efüzyon
BT474 (HTB-20)
+
+
+
Luminal
İnvaziv Duktal
Karsinom
Primer
Tümör
T47D (HTB-133)
+
+
-
Luminal
İnvaziv Duktal
Karsinom
Pleural
Efüzyon
MDA-MB-231
(HTB-26)
MCF-7
(HTB-22)
Erçetin P, UKK 2013
BT474
(HTB-20)
T47D
(HTB-133)
Slayt 7 / 14
Materyal ve Metod
CD44+CD24- Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Manyetik
İzolasyonu :
NEGATİF SELEKSİYON (CD24-)
CD44 moAb
Erçetin P, UKK 2013
POZİTİF SELEKSİYON (CD44+)
CD44+ CD24- meme kanseri kök hücre eldesi
CD24 moAb
Slayt 8 / 14
Bulgular
MCF-7 (ER+ PR+ HER2- metastatik
adenokarsinom) kök hücrelerinde taşıyıcı
protein ailesinden SLC39A6 (160 kat) TFF3 (11
kat), transkripsiyon faktörü XBP1 (14 kat),
RB1 (11 kat), MAPK3 (50 kat) gen
ekspresyonları
artarken;
hücre-matriks
ilişkisinde etkili ADAM23 (60 kat), migrasyon
ve proliferasyon ilişkili PLAU (37 kat),
antioksidan enzim kodlayan GSTP1 (41 kat),
steroid hormon reseptörü AR (35 kat), antiapoptotik BCL2 (20 kat), invazyon ve
metastaz ilişkili MMP2, MMP9 (10 kat) ve
DNA hasarı tamirinde görevli MGMT (7
kat)gen ekspresyonları belirgin azalmıştır.
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 9 / 14
Bulgular
BT474 (HTB-20, ER+ PR+ HER2+
invaziv duktal karsinom)
kök
hücrelerinde
epiteliyalden
mezenkimale
dönüşümde
etkili
CTNBB1, DNA hasarı ve apoptoz
ilişkili CDKN1A ve transkripsiyon
faktörü JUN genlerinin ekspresyonları
belirgin artarken (≥10 kat);
Nükleer steroid hormon reseptörü
PGR, TFF3, hücre proliferasyonu
ilişkili MKI67 ve nükleer steroid
hormon
reseptörü
ESR1
gen
ekspresyonları azalmıştır (≥20 kat).
Erçetin P, UKK 2013
≥10 kat
Slayt 10 / 14
Bulgular
T47D (HTB-133, ER+ PR+ HER2invaziv duktal karsinom) kök
hücrelerinde anjiyogenez ilişki
VEGFA gen ekspresyonu artarken
(60 kat), epiteliyal hücrelerin
mobilitesinde etkili TFF3 gen
ekspresyonu
belirgin
olarak
azalmıştır (21 kat).
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 11 / 14
Bulgular
MDA-MB-231 (ER- PR- HER2metastatik adenokarsinom)
meme kanseri hücre hattının
kök hücrelerinde MMP9 (79
kat) ve MKI67 (24 kat) gen
ekspresyonları
belirgin
azalırken ABCB1 ve SLC39A6
gen ekspresyonları artmıştır
(3 kat).
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 12 / 14
Tartışma
Farklı meme kanseri kök hücrelerinin normal meme kanseri
hücrelerine
kıyasla
meme
kanseri
ilişkili
gen
ekspresyonlarında belirgin artış ve azalışlar saptanmıştır.
Bu değişikliklerin başlıca hücre-hücre ilişkisi, anjiyogenez,
tümör migrasyonu ve proliferasyonu ve DNA hasar tamiri
ilişkili genlerde olduğu saptanmıştır.
Yeni tedavi hedeflerinin bu değişiklikleri de hedef alacak
şekilde planlanması uygun olacaktır.
Ayrıca doğada tek tip meme kanseri kök hücresi bulunmamakta olup
farklı fenotipte meme kanserlerinin kök hücrelerinin farklı ekspresyon
göstermesi, kanser başlatıcı hücre deyimi kullanılmasının daha mı
kullanışlı olacağı sorusunu gündeme getirmektedir.
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 13 / 14
Erçetin P, UKK 2013
Slayt 14 / 14