Tripan Blue Boyamasıyla Hücre Sayısının Ve Canlılığının Belirlenmesi
advertisement
Trypan Blue Boyamasıyla Hücre Canlılığının Belirlenmesi Amaç Hücreler ile çalışma yaparken hücrelerin canlılığını belirlemek çok önemlidir. Bu amaçla ‘Trypan Blue’ adı verilen bir boya kullanılmaktadır. Bu boya negatif yüklüdür. Eğer hücre membranı zarar görmemiş ve canlı bir hücre ise, boya hücre içine girmez. Ancak canlı olmayan hücreler boyayı absorbe eder ve mikroskop altında mavi görünürler. Trypan blue ile çalışırken dikkat edilmesi gereken nokta, hücreler trypan blue boyasında belirtilen süreden daha uzun kalırsa canlı hücreler de maviye boyanır. Materyaller HBSS içinde hazırlanan %0.4 (w/v) trypan blue solüsyonu Thoma lamı ve lamel %70 (v/v) etanol Uygulama Basamakları 1. Hücre sayısı 1-2 x 105 hücre/mL olan hücre süspansiyonundan ependorf tüpüne 500 µL hücre süspansiyonu koyulur. 2. Hücre süspansiyonu üzerine 100 µL %0.4’lük trypan blue solüsyonu eklenir. 3. 5 dakika beklenir. 4. Örnek Thoma lamına yerleştirilir. 5. Bütün hücreler ve canlı (boya almamış) hücreler sayılır. Canlı hücreler yüzdesi aşağıdaki gibi hesaplanır: Canlı hücre oranı (%) = Boya almamış hücrelerin sayısı/ Toplam hücre sayısı x 100 Kaynaklar 1. Freshney, RI, 2000. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 3rd edition; Wiley-Liss, New York.
