Benzodiazepinler Mikrolevha EIA Oral Sıvı Uygulaması

COZART
Benzodiazepinler
Mikrolevha EIA
Oral Sıvı Uygulaması
Reaktif Maddeler
«
M120R1 - 1 tabaklı set
Cozart RapiScan Toplayıcısı
M120R1 (Mayıs 2003)
Amaçlanan Kullanım
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Benzodiazepinler EIA seti
klinik ve adli laboratuarlarda kullanım için Cozart
RapiScan Oral Sıvı toplama sistemiyle birlikte kullanılmak
üzeredir. Bu toplama sistemiyle 10 ng/mL’lik kesme
konsantrasyonunda insan ağzı sıvısındaki benzodiazepinler
takibi için niteliksel sonuçlar sağlar. Toplama sistemi
örneğin 1:3’lük seyreltilmesini içerdiğinden, bu
seyreltilmemiş insan ağzı sıvısındaki 30 ng/mL’ye eşittir.
Bu belgenin geri kalanı 10 ng/mL’lik kesme
konsantrasyonundan bahsedecektir.
Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar.
Test sonuçlarını, özellikle de pozitif bir ön sonuç
alacak şekilde, istismar eden bütün ilaçlar hakkında
klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya
başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde
etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi
kullanılmalıdır. Gaz kromatografisi/kütle
spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme
yöntemidir.
Bu ürünün işyeri testi için gerekli kriterleri sağladığını
belirlemek organizasyonların sorumluluğudur.
Testin Prensibi
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Benzodiazepinler EIA seti
insan ağzı sıvısındaki Benzodiazepinler tespiti için
rekabetçi bir enzim immunotahlilidir. Mikrotitre
şeritlerinin çukurları anti-Benzodiazepinler antikorlarıyla
kaplıdır. İlk kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla
(HRP) etiketlenmiş Benzodiazepinler, mikrotitre
şeritlerindeki anti- Benzodiazepinler antikorlarının
bağlanma yerleri için hasta örneğindeki serbest
Benzodiazepinler ile yarışır. TMB substrat çözeltisinin
eklenmesinden önce çukurlar fazla enzim materyalinin
kaldırılması için yıkanır. Durdurma çözeltisinin eklenmesi
tepkimeyi durdurur ve soğurganlıklar spektrofotometresel
olarak 450 nm'de okunur.
Anti-Benzodiazepinler Kaplı Levha- (1 levha)
Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit. Kuru formdaki
polistiren levha üzerinde sabitlenmiş antiBenzodiazepinler koyun çok klon antikorları. Serbest
BSE kaynağından elde edilen BSA 0.001% içerir.
Enzim Eşleniği – (15 mL)
Yaban turpu peroksidazıyla <0.1% (v/v) etiketlenmiş
ve protein matriste dengeleyicilerle seyreltilmiş
Benzodiazepin türevi.
Koruyucular içerir.
Yıkama Tampon Çözeltisi – (50 mL)
30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde.
Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf
suyla seyreltin.
Substrat Çözeltisi—(20 mL)
<0.05% 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir
şişe.
Durdurma Çözeltisi—(20 mL)
1 mol/L sülfürik asit içeren bir şişe. Bu çözeltiyi
aşındırıcı olarak kullanın.
Negatif Kalibratör – (1 mL)
Temazepam için negatif oral sıvı matrisi.
Pozitif Kalibratörler – (bütün seviyelerde 1 mL)
1 ng/mL Temazepam içeren oral sıvı matrisi.
10 ng/mL Temazepam içeren oral sıvı matrisi.
100 ng/mL Temazepam içeren oral sıvı matrisi.
Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı
Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8°C sıcaklıkta
saklayınız. Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen
son kullanma tarihlerine kadar kararlıdır.
Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu
mühürlenebilir folyo keseyle yeniden paketlenmelidir.
Saklama koşullarını yerine getirme konusunda başarısızlık
tahlil performansını olumsuz etkileyebilir.
Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir.
Yıkama tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer
edildiğinden emin olun.
1
Benzodiazepines (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Substratın rengi berrak olmalıdır. Herhangi bir mavi
renklenme reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini
gösterir. Substratı ışığa maruz bırakmayınız.
Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme,
bozulmaya işaret eder ve bileşen atılmalıdır.
takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler,
kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test
edilebilir.
1.
Her çukura örneğin, kalibratörün veya kontrolün 25
µL’sini ekleyiniz. (Yukarıdaki not 13’e bakınız.)
2.
Her test çukuruna 100 µL Enzim Eşleniği ekleyiniz.
3.
30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
4.
Levhayı levha yıkayıcısını kullanarak 350 µL
Yıkama Tampon Çözeltisiyle dört kere yıkayınız.
5.
Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve
30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
6.
Her çukura 100 µL Durdurma Çözeltisi ekleyiniz.
7.
450 nm’de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün.
Örnek Toplanması ve Saklanması
Lütfen Cozart RapiScan Toplayıcısıyla örnek toplama
prosedürünü anlatan talimatlara (CD101) başvurunuz.
Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8°C
sıcaklıkta veya daha uzun süre için -20°C sıcaklıkta
saklayınız. Örneğin kirlenmesinden şüpheleniliyorsa yeni
bir örnek elde ediniz.
Oral sıvı örneğinin toplanmasından önce yiyecek veya
içecek tükettiğinizde 10 dakika bekleyiniz.
Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini
düşünerek kullanınız.
Uyarılar ve Önlemler
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin
bulundurulması tavsiye edilmez.
Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun
şekilde korunmalıdır.
Kalibratörler sentetik oral sıvı kullanılarak
hazırlanmıştır. Ancak, kalibratörler ve bütün oral sıvı
örnekleri potansiyel olarak enfekte oldukları
düşünülerek kullanılmalıdır.
Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru
tesisatlarıyla reaksiyona girerek potansiyel olarak
patlayıcı metal azidleri oluşturabilecek olan sodyum
azid içerir. Bu reaktifleri elden çıkarırken azid
birikmesini önlemek için her zaman büyük miktarda
suyla yıkayınız.
Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız.
Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz.
Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları
kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz.
Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra
kullanmayınız.
Farklı setlerden, üreticilerden veya parti
numaralarından reaktifleri karıştırmayınız.
Reaktifleri dondurmayınız.
Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan
günışığından uzak tutulması tavsiye edilir.
Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız.
Örnek eklenmesi 30 dakikadan fazla sürmemelidir.
Prosedür
Tahlil Prosedürü
Yıkama Tamponunu 1:30 oranında saf suyla
seyrelterek hazırlayınız.
Not:
Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda
sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün
2
Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Pozitif ve negatif kontroller.
450nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu.
Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi
önlemek için her reaktif için temiz uçlar kullanınız.
Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel
mikrotitre levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama
tamponu çözeltisini dağıtmak için 350μL sekiz kanallı
pipet.
30 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer.
Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için
temiz ölçme silindiri.
Saf veya iyonsuzlaştırılmış su.
Kalite Kontrol
Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş
tahlil 15 dakika içinde okunmalıdır.
Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış
kalite kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara
uymalıdırlar. Negatif kontrol, 10ng/mL kalibratörden daha
yüksek bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif kontrol,
10ng/mL kalibratörden daha düşük bir soğurganlığa sahip
olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla 10ng/mL
kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip
değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir. Tahlil tekrar
edilmelidir, kontrol sonuçları hala yukarıda belirtilen
limitlerin dışındaysa Cozart Bioscience Ltd.’in Teknik
Servis’i ile temasa geçiniz.
Sonuçların Değerlendirilmesi
Benzodiazepines (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Pozitif Sonuç – 10ng/mL Kesme Kalibratörü’nden küçük
veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif
olarak değerlendirilir.
Negatif Sonuç – 10ng/mL Kesme Kalibratörü’nden büyük
soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak
değerlendirilir.
Not: Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere
sahip olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki
talimatları takip etme konusundaki diğer başarısızlıklar,
performans karakteristiklerini ve etikette belirtilen veya
ima edilen iddialarını etkileyebilir.
Clobazam
1
10
100
1000
10000
2.5
24
250
>500
>500
250
240
250
-----
Clonazepam
10
100
1000
10000
1.5
8
16
180
15
8
2
2
Diazepam
1
10
100
1000
11
210
>500
>500
1100
2100
>500
>500
Flurazepam
100
1000
10000
1.5
9.5
90
1.5
1.0
0.9
Flunitrazepam
10
100
1000
10000
4
24
250
2000
40
24
25
20
Lorazepam
10
100
1000
10000
0.9
6
75
650
9
6
8
7
Medazepam
10
100
1000
10000
10
45
550
>500
100
45
55
---
Yetersizlikler
Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka
bir genel olarak kabul gören bağışıklık harici metotla
kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan oral sıvısıyla
kullanılmak üzere tasarlanmıştır.
Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin
testle etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi
yanlış sonuçlar ortaya çıkarma ihtimali vardır.
Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma
sırasında zarar görmesi durumunda lütfen Cozart
Bioscience Ltd.’ın Teknik Servis’i ile temasa geçiniz.
Özgüllük
Çok sayıda ilişkisiz ilaç 10,000 ng/mL'de test edilmiştir.
Hiçbir çapraz tepkirlik gözlenmemiştir. Bu bileşiklerin tam
listesi için lütfen teknik destekle bağlantıya geçiniz.
Aşağıdaki Benzodiazepinler test edilmiş ve Temazepam ile
karşılaştırılmıştır:
Benzodiazepin
ng/mL
Test
edilen
Görünür
Temazepa
m
Çapraz
Tepkirlik
Alprazolam
1
10
100
28
350
>500
2800
3500
>500
Bromazepam
10
100
1000
10000
1.2
27
200
>500
12
27
20
---
Chlordiazepoxid
e
1
1.8
180
10
100
1000
10000
11
33
310
>500
110
33
31
---
3
Benzodiazepines (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Benzodiazepin
ng/mL
Test
edilen
Görünür
Temazep
am
Çapraz
Tepkirlik
Nitrazepam
1
10
100
1000
10000
1
20
60
320
>500
100
200
60
32
---
Nordiazepam
1
10
100
1000
17
170
550
>500
1700
1700
550
---
Prazepam
100
1000
10000
3
80
>500
3
8
---
Temazepam
1
10
100
1000
10000
17
210
2000
>500
>500
1700
2100
2000
-----
Triazolam
10
100
1000
10000
3.5
29
320
>500
35
29
32
---
Bibliografi
Shoshana Zevin, Peyton Jacob III, Pierangelo Geppetti,
Neal L Benowitz, Drug and Alcohol Dependence 60 1318 (2000)
Daha fazla bilgi için:
COZART Bioscience Ltd,
45 Milton Park,
Abingdon,Oxfordshire,
OX14 4RU, UK.
Telefon: 01235 861483
Faks: 01235 835607
www.cozart.co.uk
4
Benzodiazepines (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.