Barbituratlar Mikrolevha EIA Oral Sıvı Uygulaması

Barbituratlar
Mikrolevha EIA
Oral Sıvı Uygulaması
Cozart RapiScan Toplayıcısı
M115R1 (Haziran 2003)
Amaçlanan Kullanım
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Barbituratlar EIA seti
klinik ve adli laboratuarlarda kullanım için Cozart
RapiScan Oral Sıvı toplama sistemiyle birlikte kullanılmak
üzeredir. Bu toplama sistemiyle 20 ng/mL’lik kesme
konsantrasyonunda insan ağzı sıvısındaki Barbituratlar
takibi için niteliksel sonuçlar sağlar. Toplama sistemi
örneğin 1:3’lük seyreltilmesini içerdiğinden, bu
seyreltilmemiş insan ağzı sıvısındaki 60 ng/mL’ye
eşittir.eşittir.
Bu belgenin geri kalanı 20
konsantrasyonundan bahsedecektir.
ng/mL’lik
kesme
Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar.
Test sonuçlarını, özellikle de pozitif bir ön sonuç
alacak şekilde, istismar eden bütün ilaçlar hakkında
klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya
başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde
etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi
kullanılmalıdır.
Gaz
kromatografisi/kütle
spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme
yöntemidir.
Bu ürünün işyeri testi için gerekli kriterleri sağladığını
belirlemek organizasyonların sorumluluğudur.
Testin Prensibi
Oral Sıvı için Cozart Bioscience Barbituratlar EIA seti
insan ağzı sıvısındaki barbituratların tespiti için rekabetçi
bir enzim immunotahlilidir.
Mikrotitre şeritlerinin
çukurları anti-Barbiturat antikorlarıyla kaplıdır.
İlk
kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla (HRP)
etiketlenmiş Barbituratlar, mikrotitre şeritlerindeki antiBarbiturat antikorlarının bağlanma yerleri için hasta
örneğindeki serbest Barbituratlar ile yarışır. TMB substrat
çözeltisinin eklenmesinden önce çukurlar fazla enzim
materyalinin kaldırılması için yıkanır.
Durdurma
çözeltisinin
eklenmesi
tepkimeyi
durdurur
ve
soğurganlıklar spektrofotometresel olarak 450 nm'de
okunur.
1
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme,
bozulmaya işaret eder ve bileşen atılmalıdır.
Reaktif Maddeler
M115R1- 1 tabaklı set
Anti-Barbiturat Kaplı Levha- (1 levha)
Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit. Kuru formdaki
polistiren levha üzerinde sabitlenmiş antiBarbituratlar koyun çok klon antikorları. Serbest
BSE kaynağından elde edilen BSA 0.001% içerir.
Enzim Eşleniği – (15 mL)
Yaban turpu peroksidazıyla <0.1% (v/v) etiketlenmiş
ve protein matriste dengeleyicilerle seyreltilmiş
Barbiturat türevi.
Koruyucular içerir.
Yıkama Tampon Çözeltisi – (50 mL)
30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde.
Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf
suyla seyreltin.
Substrat Çözeltisi—(20 mL)
<0.05% 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir
şişe.
Durdurma Çözeltisi—(20 mL)
1 mol/L sülfürik asit içeren bir şişe. Bu çözeltiyi
aşındırıcı olarak kullanın.
Negatif Kalibratör – (1 mL)
Barbituratlar için negatif oral sıvı matrisi.
Pozitif Kalibratörler – (bütün seviyelerde 1 mL)
5 ng/mL Barbiturat içeren oral sıvı matrisi.
20 ng/mL Barbiturat içeren oral sıvı matrisi.
100 ng/mL Barbiturat içeren oral sıvı matrisi.
Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı
Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8°C sıcaklıkta
saklayınız. Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen
son kullanma tarihlerine kadar kararlıdır.
Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu
mühürlenebilir folyo keseyle yeniden paketlenmelidir.
Saklama koşullarını yerine getirme konusunda başarısızlık
tahlil performansını olumsuz etkileyebilir.
Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir.
Yıkama tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer
edildiğinden emin olun.
Substratın rengi berrak olmalıdır. Herhangi bir mavi
renklenme reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini
gösterir. Substratı ışığa maruz bırakmayınız.
2
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
Örnek Toplanması ve Saklanması
Prosedür
Lütfen Cozart RapiScan Toplayıcısıyla örnek toplama
prosedürünü anlatan talimatlara (CD101) başvurunuz.
Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8°C
sıcaklıkta veya daha uzun süre için -20°C sıcaklıkta
saklayınız. Örneğin kirlenmesinden şüpheleniliyorsa yeni
bir örnek elde ediniz.
Tahlil Prosedürü
Oral sıvı örneğinin toplanmasından önce yiyecek veya
içecek tükettiğinizde 10 dakika bekleyiniz.
Yıkama Tamponunu 1:30 oranında saf suyla
seyrelterek hazırlayınız.
Not:
Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda
sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün
takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler,
kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test
edilebilir.
Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini
düşünerek kullanınız.
1.
Her çukura örneğin, kalibratörün veya kontrolün 10
µL’sini ekleyiniz. (Yukarıdaki not 13’e bakınız.)
Uyarılar ve Önlemler
2.
Her test çukuruna 100 µL Enzim Eşleniği ekleyiniz.
3.
30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
4.
Levhayı levha yıkayıcısını kullanarak 350 µL
Yıkama Tampon Çözeltisiyle dört kere yıkayınız.
5.
Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve
30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
6.
Her çukura 100 µL Durdurma Çözeltisi ekleyiniz.
7.
450 nm’de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin
bulundurulması tavsiye edilmez.
Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun
şekilde korunmalıdır.
Kalibratörler
sentetik
oral
sıvı
kullanılarak
hazırlanmıştır. Ancak, kalibratörler ve bütün oral sıvı
örnekleri potansiyel olarak enfekte oldukları
düşünülerek kullanılmalıdır.
Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru
tesisatlarıyla reaksiyona girerek potansiyel olarak
patlayıcı metal azidleri oluşturabilecek olan sodyum
azid içerir. Bu reaktifleri elden çıkarırken azid
birikmesini önlemek için her zaman büyük miktarda
suyla yıkayınız.
Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız.
Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz.
Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları
kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz.
Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra
kullanmayınız.
Farklı
setlerden,
üreticilerden
veya
parti
numaralarından reaktifleri karıştırmayınız.
Reaktifleri dondurmayınız.
Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan
günışığından uzak tutulması tavsiye edilir.
Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız.
Örnek eklenmesi 30 dakikadan fazla sürmemelidir.
Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Pozitif ve negatif kontroller.
450nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu.
Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi
önlemek için her reaktif için temiz uçlar kullanınız.
Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel
mikrotitre levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama
tamponu çözeltisini dağıtmak için 350μL sekiz kanallı
pipet.
30 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer.
Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için
temiz ölçme silindiri.
Saf veya iyonsuzlaştırılmış su.
Kalite Kontrol
Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş
tahlil 15 dakika içinde okunmalıdır.
Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış
kalite kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara
uymalıdırlar. Negatif kontrol, 20ng/mL kalibratörden daha
yüksek bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif kontrol,
20ng/mL kalibratörden daha düşük bir soğurganlığa sahip
3
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla 20ng/mL
kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip
değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir.
Tahlil tekrar
edilmelidir, kontrol sonuçları hala yukarıda belirtilen
limitlerin dışındaysa Cozart Bioscience Ltd.’in Teknik
Servis’i ile temasa geçiniz.
Sonuçların Değerlendirilmesi
Pozitif Sonuç – 20ng/mL Kesme Kalibratörü’nden küçük
veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif
olarak değerlendirilir.
Negatif Sonuç – 20ng/mL Kesme Kalibratörü’nden büyük
soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak
değerlendirilir.
Not:
Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli
yeterliklere sahip olmayan enstrümanların
kullanılması veya etiketteki talimatları takip
etme
konusundaki
diğer
başarısızlıklar,
performans karakteristiklerini ve etikette
belirtilen
veya
ima
edilen
iddialarını
etkileyebilir.
Yetersizlikler
Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka
bir genel olarak kabul gören bağışıklık harici metotla
kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan oral sıvısıyla
kullanılmak üzere tasarlanmıştır.
Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin
testle etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi
yanlış sonuçlar ortaya çıkarma ihtimali vardır.
Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma
sırasında zarar görmesi durumunda lütfen Cozart
Bioscience Ltd.’ın Teknik Servis’i ile temasa geçiniz.
Özgüllük
Çok sayıda ilişkisiz ilaç 10,000 ng/mL'de test edilmiştir.
Hiçbir çapraz tepkirlik gözlenmemiştir. Bu bileşiklerin tam
listesi için lütfen teknik destekle bağlantıya geçiniz.
Tahlilden önce maddeler negatif oral sıvı örneği içinde
hazırlanmıştır.
Her bir örneğin konsantrasyonunu tahmin etmek için dört
kalibratör kullanılarak bir kalibrasyon eğrisi çizilmiştir.
Bileşik
Butalbital
Pentobarbital
4
ng/mL
Test
edilen
Görünür
Barbitur
at
ng/mL
%
Çapraz
Tepkirlik
10
0.3
3.2
100
21
21
1000
10
100
208
0.04
7.9
21
0.4
7.9
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.
1000
130
13
Bibliografi
1.
2.
3.
Urine Testing for Drug of Abuse. National Institute
on Drug Abuse (NIDA) Research Monograph 73,
1986.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug
Testing Programs. National Institute on Drug Abuse.
Federal Register Vol. 53, No 69 pp 11970 (1988).
D.Simpson et al.
Screening for drugs of abuse (II): cannabinoids,
lysergic
acid
diethylamide,
buprenorphine,
barbiturates, benzodiazepines and other drugs. Ann
Clin Biochem (1997); 34 : 460-510.
Daha fazla bilgi için:
COZART Bioscience Ltd
45 Milton Park,
Abingdon,
Oxfordshire,
OX14 4RU, UK.
Telephone: +44 (0) 1235 861483
Fax: +44 (0) 1235 835607
www.cozart.co.uk
5
Barbiturates (Oral Fluid)
Cozart Bioscience Ltd.