« M146H1 - 1 tabaklı set Kannabinoidler Mikrolevha EIA Saç Uygulaması M146H1 (Ağustos 2005) Edisyon: 001 Amaçlanan Kullanım Kannabinoidler Mikrolevha EIA, saçtaki Kannabinoidlerin niteliksel ve yarı-nicel tespitinde kullanılması amacıyla tasarlanmıştır. Bu setin başka versiyonları serum, bütün kan, idrar ve salya matrisleri için bulunmaktadır. Kannabinoidler Mikrolevha EIA bir ön analitik test sonucu sağlar. Daha kesin bir analitik sonuç elde etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi kullanılmalıdır. Gaz kromatografisi/kütle spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme yöntemidir. İstismar edilen ilaçlara ait test sonuçları hakkında, özellikle de sonuçlar pozitifse, klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya başvurulmalıdır. Set kalibratör içermemektedir ama uygun kalibratörlerin hazırlanması için bir kalibratör matrisi içermektedir. Ekteki tahlil tarifnamesinde bir örnek gösterilmiştir. Reaktif Maddeler Anti-Kannabinoidler Kaplı Levha- (1 levha) 12 x 8 çukur şeridi. Kuru formdaki polistiren levha üzerinde sabitlenmiş antikor. Enzim Eşleniği – (200 mL) Yaban turpu peroksidazıyla etiketlenmiş ve protein matriste dengeleyicilerle seyreltilmiş kannabinoid türevi. Çalışan seyreltmelerle ilgili veri sayfası ektedir. Enzim Seyreltici – (20 mL) Dengeleyici ve protein matris içeren tampon çözelti. Kullanıma hazır. 2-8°C sıcaklıkta saklayınız. Kalibratör Matrisi – (20 mL) Δ9 THC Kalibratörlerinin hazırlanmasında kullanılacak protein matrisi ve dengeleyicileri içeren tampon çözelti. 2 - 8˚C sıcaklıkta saklayınız. Yıkama Tampon Konsantresi – (50 mL) 30 x konsantre. Saklama halinde kristaller oluşabilir. Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf suyla seyreltin. Örnek Tampon Çözeltisi– (50 mL) Kurumuş saç özütünü yeniden oluşturmada kullanılacak protein matrisi ve dengeleyicileri içeren tampon çözelti. Kullanıma hazır. 2-8°C sıcaklıkta saklayınız. Substrat Çözeltisi– (20 mL) 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir şişe. Durdurucu Çözelti– (20 mL) 1 M sülfürik asit içeren bir şişe. Bu çözeltiyi aşındırıcı olarak kullanın. 1 Cannabinoids (Hair) Cozart plc. 5. Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız. 6. Her çukura 100 µL Durdurma Çözeltisi ekleyiniz. Uyarılar ve Önlemler 1. Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin bulundurulması tavsiye edilmez. 2. Bütün reaktiflerin düzgün kullanılması önemle tavsiye edilir. Substrat Çözeltinin kirlenmesini önlemek için tek kullanımlık materyallerin kullanılması önerilir. Belirgin mavi rengin ortaya çıkması durumunda substrat çözeltisini atın. 3. Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız. Bütün örnekleri ve reaktifleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini düşünerek kullanınız. 4. Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz. 5. Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz. 6. Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra kullanmayınız. 7. Farklı setlerden veya üreticilerden reaktifleri karıştırmayınız. 8. Reaktifleri dondurmayınız. 9. Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan günışığından uzak tutulması tavsiye edilir. 10. Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız. 11. Örnek eklenmesi 30 dakikadan fazla sürmemelidir. 7. 450 nm’de 30 dakikadaki soğurganlığı ölçün. eaktifin Hazırlanması 1. Yıkama Tamponunu 1:30 oranında saf suyla seyrelterek hazırlayınız. 2. İstenilen konsantrasyonlarda taze Δ9THC kalibratörlerini Kalibratör Matrisi’ni kullanarak hazırlayınız. Silvanize kehribar cam şişelerin kullanımı tavsiye edilir. 3. Ekteki veri sayfasında belirtildiği gibi çalışma kuvvetinde Enzim Eşleniği’ni hazırlayınız. Tahlil Prosedürü Not: Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler, kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test edilebilir. 1. Her çukura örneğin, kalibratörün veya kontrolün 50 µL’sini ekleyiniz. (Yukarıdaki not 11’ye bakınız.) 2. Her test çukuruna 100 µL çalışma kuvvetinde Enzim Eşleniği ekleyiniz. 3. 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız. 4. Levhayı levha yıkayıcısını kullanarak 350 µL Yıkama Tampon Çözeltisiyle dört kere yıkayınız. 2 Cannabinoids (Hair) Cozart plc. OX14 4RY, UK Telefon: 01235 861483 Faks: 01235 835607 www.cozart.biz Saklama/Kararlılık 2-8°C sıcaklıkta saklayınız. LSD Mikrolevha EIA setinin kararlılığı 2-8°C’de saklandığı takdirde üretim tarihinden itibaren 6 aydır. Son kullanma tarihi bütün parçalar üzerinde bulunmaktadır. Δ 9-THC’nın Örnek Kalibrasyon Eğrisi Absorbance @ 450nm 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 0 20 40 Drug Concentration [ng/ml] Değerlendirme Pozitif sonuç: Seçilen Kesme Kalibratörü’nden küçük veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif olarak değerlendirilir. Negatif sonuç: Seçilen Kesme Kalibratörü’nden büyük soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak değerlendirilir. Yarı-Nicel Sonuç: Göreceli ilaç konsantrasyonlarına dair tahminler istendiği halde, dört veya daha fazla bilinmeyen maddenin soğurganlık değerleri kalibratör konsantrasyonlarına karşı işaretlenerek bir kalibrasyon eğrisi elde edilebilir. Ara kalibratörler uygun seyreltmeyle elde edilebilir. Not: Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere sahip olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki talimatları takip etme konusundaki diğer başarısızlıklar, performans karakteristiklerini ve etikette belirtilen veya ima edilen iddialarını etkileyebilir. Daha fazla bilgi için: COZART plc 92 Milton Park, Abingdon, Oxfordshire, 3 Cannabinoids (Hair) Cozart plc.