lorne laboratorıes ltd

Anti-A, Anti-B, Anti-A+ B MONOKLONAL
0843
Tüp, Slayt, Diamed-ID ve Microplak testler
Kan gruplama
İnsan kırmızı kan hücrelerinde A ve/veya B antijenlerinin
belirlenmesi kalitatif test
1. Serum, plazma veya PBS de %35-45 süspansiyon test kırmızı hücre hazırlayın.
IVD
2. Etiketli bir testi slayt üzerine 1 hacim Anti- ABO reaktifi ve 1 hacim test kırmızı hücre süspansiyonu
yerleştirin.
2-8ºC de sakla
3. Temiz bir aplikatör çubuğu kullanın ve yaklaşık 20 x 40 mm lik bir alan üzerinde reaktif ve
PRENSİP
Reaktifler, ilgili ABO antijeni taşıyan test kırmızı hücrelerin direkt aglütinasyonuna (pıhtılaşma)
neden olacaktır. Aglütinasyon olmaması genellikle ABO antijeninin yokluğunu gösterir
(Sınırlamalara bkz).
KLİNİK ÖNEM
1900 yılında, Landsteiner bazı insanların serumunun başkalarının kırmızı hücrelerini aglütine ettiğini
keşfetti. Günümüzde dört ortak fenotip bilinir: O, A, B ve AB. A ve B nin altgrupları tespit edilmiştir.
İleri Grup
Ters Grup
ABO
Kafkasyalılar
Fenotip
%
A
B
A,B
A1
A2
B
O
+
0
+
0
0
+
0
A
42
0
+
+
+
+
0
0
B
10
0
0
0
+
+
+
0
O
44
+
+
+
0
0
0
0
AB
4
REAKTİFLER
Spinreact monoklonal IgM ABO kan gruplama reaktifleri sığır albumin, EDTA ve sodyum klorür
içeren bir fosfat tamponda seyreltilmiş fare monoklonal antikoru içerir. Her reaktif daha fazla
dilüsyon veya eklemeye gerek olmadan aşağıda belirtilen tüm öneri teknikleriyle optimum
dilüsyonda verilmiştir. Lot referans numarası ve son kullanım tarihi için Şişe Etiketine bakın.
Ürün
Hücre hattı/Klon
Renk
Kullanılan boya
Anti-A
9113D10
Mavi
Patent Mavi
Anti-B
9621A8
Sarı
Tartrazin
Anti-A,B
152D12 + 9113D10
Renksiz
Yok
ÖNLEMLER
1. Reaktifler sadece in vitro diagnostik kullanım için tasarlanmıştır.
2. Eğer bir reaktif şişesinde kırık veya sızıntı varsa, hemen içeriğini atın.
3. Son kullanım tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayın (Şişe etiketlerine bakın).
4. Eğer çökelti mevcutsa, reaktifleri kullanmayın.
5. Reaktiflerle çalışılırken tek kullanımlık eldiven ve laboratuar önlüğü gibi koruyucu giysileri
giyinmelidir.
6. Reaktifler bir 0,2 mikron kapsül ile biyo-yükünü azaltmak için filtre edilmiştir. Bir şişe bir kez
açıldığında içeriği eğer belirgin bozulma ve bulanıklık göstermediği sürece son kullanım tarihine
kadar kalabilir.
7. Reaktifler %< 0.1 sodyum azid içerir. Eğer patlayıcı metal azit formu ile bakır ve kurşun borular
reaksiyona girerse veya yutulursa, sodyum azit toksik olabilir. Çok miktarda su ile yıkayarak
uzaklaştırın.
8. Bilinen hiçbir test insan ve hayvan kaynaklı ürünlerin enfeksiyon etkeni taşımadığını garanti
edemez. Kullanım sırasında ve her şişenin ve içeriklerinin imhasında dikkatli olunmalıdır.
9. Dökülen reaktiflerin ve dekontaminasyonunun atılması ile ilgili bilgi için mevcut olan Malzeme
Güvenlik Veri Sayfalar’ına bakın.
NOTLAR
1. Bir pozitif kontrol ve negatif kontrolun testlerin her bir lotuyla paralel test edilmesi önerilir. Eğer
kontrol beklenen sonuçlar göstermiyorsa, testler geçersiz olarak kabul edilmelidir.
2. Hastanın kırmızı hücrelerini tiplendirirken reaktifin negatif kontrol içermesi önemlidir. Çünkü IgG
kaplı hücrelerle makromoleküler etkileşimciler yanlış pozitif reaksiyonlara neden olur.
3.Zayıf A veya B altgrupların kan örnekleri (Ax gibi) slaytlar, mikrotiter plakalar veya jel kartlar
kullanılarak test edildiğinde yanlış negatif veya zayıf reaksiyona neden olabilir. Tüp tekniği
kullanılarak zayıf alt grup tekrar test edilmelidir.
4. Bireyler altı aydan büyükse ABO kan-grubu sonuçları ABO kan grubu onaylanmadan önce
bilinen grup A1 ve B hücreleri karşı plazma veya serumlarıyla test edilerek onaylanabilir.
5.Şişe damlalık kullanıldığında bir hacim yaklaşık 40μl olarak alınır.
6.Reaktiflerin kullanımı ve sonuçların yorumlanması reaktifler kullanımdaysa o ülkenin şartlarına
göre eğitimli ve kalifiye personel tarafından yapılmalıdır.
7.Kullanıcı diğer teknikleri kullanmak için reaktiflerin uygunluğunu belirlemelidir.
SAKLAMA
Dondurmayın. Reaktif şişeleri 2 -8ºC ‘de saklanmalıdır. Bu aralığın dışındaki sıcaklıklarda uzun
süreli saklanmada reaktifin reaktivitesinin kaybına neden olabilir.
GEREKLİ REAKTİFLER VE MATERYALLER
1.
Cam test tüpler (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).
2.
Test tüp santrifüjü.
3.
Volumetrik pipetler.
4.
Cam mikroskop slaytları
5.
Aplikatör çubukları.
6.
Fosfat Tampon tuzu (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC..
7.
Pozitif (ideal grup A2B) ve negatif (grupO) kontrol kırmızı hücreler
8.
DiaMed ID-Kardlar (Nötr).
9.
DiaMed ID-Sentrifüj.
10.
DiaMed ID-Diluent: e.g. ID-CellStab.
11.
Plaka çalkalayıcısı.
12.
Otomatik plaka okuyucu.
13.
Onaylı "U" kuyu mikroplakaları
14.
Mikroplaka Santrifüjü
NUMUNE
Antikoagülanlı veya antikoagülansız olarak elde edilen kan örnekleri antijen tiplendirmesi için
kullanılabilir. Eğer test gecikirse örnekler 2-8 ° C'de saklanır. EDTA ve sitratlı numuneleri 48 saat
içinde tiplendirilmelidir. ACD, CPD veya CPDA-1 içinde toplanan numuneler çekildiği tarihten 35
güne kadar test edilebilir. Tüm kan numuneleri test edilmeden en az iki kez PBS ile yıkanmalıdır.
Hemoliz görüntüsüne sahip kan numuneleri güvenilmez sonuç verebilir.
PROSEDÜR
A. Tüp Tekniği
1. PBS içinde % 2-3 süspansiyon yıkanmış test kırmızı hücreleri hazırlayın..
2. Etiketli bir test tüpüne 1 hacim Anti- ABO reaktifi ve 1 hacim test kırmızı hücre
süspansiyonu koyun.
3. İyice karıştırın ve 1 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin.
4. Bütün tüpleri 1000 rcf de 10 dakika boyunca veya uygun bir alternatif zaman ve devirde
santrifüjleyin.
5. Kırmızı hücre çökeltisini hafifçe sallayın ve aglütinasyonu makroskopik olarak okuyun.
6. Negatif veya şüpheli bir sonuç gösteren tüpler oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edilmelidir.
7.İnkübasyon boyunca 3 ve 4’üncü adımları tekrar edin.
B. Slayt Tekniği
GSIS01
Ed.2009
hücreleri karıştırın.
4. Oda sıcaklığında slaytı hafiçe eğerek arkaya ve yana doğru 30 saniye kadar çalkalayın bu
işlemi 2 dakika süreci içinde arada bir tekrarlayın.
5. Diffüz bir ışık üzerinde 2 dakika sonra makroskopik olarak okuyun ve fibrin ipliklerini
aglütinasyon olarak değerlendirip hata yapmayın.
6. Zayıf gerçekleşen reaksiyonlar tüp tekniği ile tekrarlanmalıdır.
C. DiaMed-ID Mikro Tipleme Tekniği
1. Bir ID-Dilüent ile % 0.8 süspansiyon yıkanmış test kırmızı hücreleri hazırlayın.
2. Gerektiği kadar mikrotüpleri alüminyum folyodan çıkarın.
3. Uygun mikrotüp içine 50μl test kırmızı hücre süspansiyonu ve 25μl Anti- ABO reaktif
yerleştirin.
4. ID Kartları 90 rcf de 10 dakika boyunca ya da uygun alternatif bir zaman ve güçle sentrifüjleyin.
5. Aglütinasyon için makroskopik olarak okuyun.
D. Mikroplaka Teknik, “U” kuyularında kullanılan
1.PBS içinde %2-3 süspansiyon yıkanmış test kırmızı hücrelerini hazırlayın.
2. Uygun kuyular içine : 1 hacim Anti- ABO reaktif ve 1 hacim test kırmızı hücre süspansiyonu koyun.
3. Tercihen mikroplaka çalkalayıcı kullanarak uygun şekilde çalkalayın, kuyudan kuyuya bulaşma
olmamasına dikkat edin .
4.15 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin (zaman kullanıcıya bağlı).
5.140 rcf de 1 dakika boyunca veya uygun alternatif bir zaman ve güçle mikroplakaları sentrifüjleyin.
6. Mikroplaka çalkalayıcısında çalkalanmayı kontrol ederek hücre çökeltisini dikkatlice tekrar
süspansiyon hale getirin.
7.Makroskobik olarak veya doğrulanmış otomatik bir okuyucu ile okuyun.
8.Zayıf reaksiyonlar tüp tekniği ile tekrarlanmalıdır.
TEST SONUÇLARININ YORUMLANMASI
1. Pozitif: Kabul edilebilir test koşullarında test kırmızı hücrelerinin aglütünasyon ile pozitif sonuç
vermesi test hücrelerinde yeterli miktarda ABO antijeni olduğunu gösterir.
2. Negatif: : Kabul edilebilir test koşullarında test kırmızı hücrelerinin aglütünasyon ile negatif
sonuç vermesi test hücrelerinde ABO antijeni olmadığını gösterir.
3. Tutarsızlıklar : Eğer alt grup ile elde edilen sonuçlar ileri grup ile ilişkili değil ise, daha fazla
araştırma gereklidir.
4. Negatif kontrol kullanarak aglütinasyon edilen hücrelerin test sonuçları hariç tutulmalıdır. Duyarlı
hücreler üzerinde reaktif içindeki makromoleküler etkileşimlerin etkisi ile aglütinasyonun
oluşabileceği gibi.
Reaksiyonların stabilitesi
1. Santrifüjlemeden sonra tüm tüpleri ve mikroplaka testleri okuyun.
2. Özgünlüğü sağlamak ve reaktifin kuruması sebebiyle negatif sonucun yanlışlıkla
değerlendirilmesi olanağından kaçınmak için slayt testler iki dakika içinde değerlendirilmelidir.
3. Belirtilerden başka sıcaklıklarda yapılan testlerin sonuçlarının yorumlanmasına dikkat
edilmelidir.
pozitif
SINIRLAMALAR
1. ABO antijenleri tamamen doğumda gelişmez ve bu nedenle daha zayıf reaksiyonlar kordon
veya neonatal örnekleri ile oluşabilir.
2. Monoklonal Anti-A,B kullanıldığında, zayıf A veya B alt gruplarının (Ax gibi)kan örnekleri slaytlar,
mikrotitre plakalar veya jel kartları test edildiğinde yanlış negatif veya zayıf reaksiyona neden olur.
Tüp tekniği kullanılarak zayıf alt grupların tekrar test edilmesi önerilir.
3. Spinreact monoklonal Anti-A ve monoklonal Anti-B sırasıyla Ax ve A3 veya Bx ve B3
antijenlerini tespit etmek için onaylanmamıştır ve bu nedenle bu zayıf A ve B alt gruplara karşı
monoklonal Anti-A veya anti-B reaktifliğini iddia etmiyoruz.
4. Depolanan kan, taze kandan daha zayıf reaksiyonlar verebilir.
5. Yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuçlar:
Test malzemelerinin kirliğine,
Saklama, hücre konsantrasyonu, inkübasyon süresi veya sıcaklığın uygunsuzluğuna,
Uygunsuz veya aşırı santrifüjleme,
Önerilen tekniklerden sapmaya,
Kordon numunelerinin Wharton's jeli ile kontamine olmasına sebep olabilir.
6.Kullanıcı burada belirtilen dışında method uygularsa reaktiflerin performansından sorumludur.
7. Önerilen tekniklerden kaynaklanan sapmalar kullanım öncesi doğrulanmış olmalıdır.
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
1. Reaktifler, burada belirtilen tüm prosedürler ile karakterize edilmiştir.
2. Serbest kalmadan önce, Spinreact Monoklonal Anti-A, Anti-B ve Anti-A,B’in her bir lotu uygun
reaktivite sağlamak için antijen-pozitif kırmızı hücrelerinin bir paneline karşı önerilen teknikler ile test
edildi.
3. Monoklonal antikor kaynağının özgünlüğü antijen-negatif hücrelerinin bir panelini kullanarak
gösterilmiştir.
4. Spinreact Anti-B “Edinsel -B” kırmızı hücreler ile reaksiyona girmez.
5. Spinreact Monoklonal ABO reaktifler T, Tn veya Cad gibi kript antijenleri tespit edemez.
6. Reaktiflerin gücü Biyolojik Standartlar ve Kontrollerin Ulusal enstitüsüden elde edilen aşağıdaki
minimum güc referans standartlarına karşı test edilmiştir:
• Anti-A referans standard 88/722 ve / veya
• Anti-B referans standard 88/724
7. Reaktifin kalite kontrolü kırmızı hücreler kullanılarak yapıldı ve bu hücreler kullanımdan önce
PBS ile iki kez yıkandı.
8. Reaktifler İngiltere Kan Transfüzyon Hizmetleri Rehberinin son sayısında yer alan önerilere
uymalıdır
BIBLIYOGRAFYA
1. Kholer G, Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature
1975; 256, 495-497
2. Messeter L et al. Mouse monoclonal antibodies with Anti-A, Anti-B and Anti-A,B specificities, some
superior to human polyclonal ABO reagents. Vox Sang 1984; 46, 185-194
3. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition. Blackwell Scientific, Oxford 1975; Chapter 2.
4. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8th Edition, Blackwell Scientific, Oxford 1987; Chapter
rd
5. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3 Edition. Montgomery Scientific, Miami 1985; Chapter 6
6. BSCH Blood Transfusion Task Force. Guidelines for microplate techniques in liquid -phase blood grouping
and antibody screening, Clinical Laboratory Haematology 1990; 12, 437-460.
7. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
8. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and cross
matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
AMBALAJ
Monoclona l Anti-A
Monoclona l Anti-B
Ref: 1700002
Ref: 1700004
10 ml
10 ml
Monoclona l Anti-A+ B
Ref: 1700006
10 ml
SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]