M235B1/5

M235B1/5
June 2005
Edition:001
Türkçe
Cozart® EIA Morfin Adli Seti
Sadece tüpte teşhis kullanımı içindir.
Amaçlanan Kullanım
Serum veya bütün kan için Cozart Morfin EIA seti klinik ve adli laboratuarlarda
kullanım içindir. İnsan serumundaki morfin için 10ng/mL’lik kesme
konsantrasyonunda niteliksel sonuçlar sağlar.
Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar. Test sonuçlarını,
özellikle de pozitif bir ön sonuç alacak şekilde, istismar eden bütün
ilaçlar hakkında klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya
başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde etmek için daha
özel
bir
kimyasal
metot
alternatifi
kullanılmalıdır.
Gaz
kromatografisi/kütle
spektrometrisi
(GC-MS)
tercih
edilen
kesinleştirme yöntemidir.
Adli kan örneklerinin rutin analizi için örneklerin saf suyla 5'te 1 oranında
sayreltilmesi tavsiye edilir. Örneğin, 200µL su eklenmiş 50µL kan. Daha fazla
yardım için lütfen teknik destek ile temasa geçin.
Testin Prensibi
Cozart® EIA Morfin Adli Seti, insan serumu ve bütün kanında morfinin tespiti için
rekabetçi bir enzim immunotahlilidir. Mikrotitre şeritlerinin çukurları anti-morfin
antikorlarıyla kaplıdır.İlk kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla (HRP)
etiketlenmiş Morfin, mikrotitre şeritlerindeki anti-Morfin antikorlarının bağlanma
yerleri için hasta örneğindeki serbest Morfin ile yarışır.
TMB substrat çözeltisinin eklenmesinden önce çukurlar fazla enzim materyalinin
kaldırılması için yıkanır. Durdurma çözeltisinin eklenmesi tepkimeyi durdurur ve
soğurganlıklar spektrofotometresel olarak 450 nm'de okunur.
1
Reaktif Maddeler
M235B1- 1 tabaklı set
(M235B5- 5 tabaklı set)
Anti-Morfin Kaplı Levha- 1 levha (5 levha)
Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit.Kuru formdaki polistiren levha üzerinde
sabitlenmiş anti-Morfin çok klon antikorlar. 0.001% BSA içerir.
Enzim eşleniği – 1 şişe (1 şişe)
Yaban turpu peroxidazıyla etiketlenmiş Morfin türevi. Yüksek vakum altında
dondurarak kurutulmuş (lyofilize) pudra olarak sunulur. 1 mL Enzim Sulandırma
Tampon Çözeltisi ile sulandırınız. Çalışan seyreltmelerle ilgili veri sayfası ektedir.
Enzim, yeniden oluşturma gününde ayrılmalı ve dondurulmalıdır.
Enzim ayırma şişeleri (boş) – 5 şişe (5 şişe)
Enzim saklamak için şişeler.Enzim eşleniğini ayırınız ve -20°C’de saklayınız.
Enzim Seyreltici – 20 mL (2x30mL)
Dengeleyici ve protein matris içeren tampon çözelti.
2-8°C sıcaklıkta saklayınız.
Enzim sulandırıcı tampon çözelti – 3mL (3mL)
Yıkama tampon çözeltisi – 50ml (50ml)
30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde.Saklama halinde kristaller
oluşabilir.Kullanımdan önce her şişeyi 1500 mL’ye kadar saf suyla seyreltin.
Substrat Çözeltisi– 20 mL (55mL)
<0.05% 3,3’, 5,5’- tetramethylbenzidine içeren bir şişe.
Durdurucu çözelti– 20 mL (55mL)
1M Sülfürik asit içeren bir şişe.Bu çözeltiyi aşındırıcı olarak kullanın.
Negatif Kalibratör - 1mL (4mL)
Morfin için negatif kan matrisi.
Pozitif Kalibratörler – bütün seviyelerde 1 mL (bütün seviyelerde 4 mL)
1ng/mL morfin içeren kan matrisi
5ng/mL morfin içeren kan matrisi
10ng/mL morfin içeren kan matrisi
25ng/mL morfin içeren kan matrisi
50ng/mL morfin içeren kan matrisi
100ng/mL morfin içeren kan matrisi
Bunlar, bilinmeyen örneklerde de olduğu gibi 5’te 1 veya 10’da 1 oranında
seyreltilmelidir.
Uyarılar ve Önlemler
1.
2.
3.
Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin bulundurulması
tavsiye edilmez.
Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun şekilde
korunmalıdır.
Bütün reaktiflerin düzgün kullanılması önemle tavsiye edilir. Substrat
Çözeltinin kirlenmesini önlemek için tek kullanımlık materyallerin
kullanılması önerilir.Belirgin mavi rengin ortaya çıkması durumunda
substrat çözeltisini atın.
Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru tesisatlarıyla
reaksiyona girerek potansiyel olarak patlayıcı metal azidleri
oluşturabilecek olan sodyum azid içerir.Bu reaktifleri elden
çıkarırken azid birikmesini önlemek için her
zaman büyük
miktarda suyla yıkayınız.
5.
Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız.
6.
Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz.
7.
Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları kullanılmadıkları
zaman kapalı tutunuz.
8.
Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra kullanmayınız.
9.
Farklı setlerden, üreticilerden veya parti numaralarından reaktifleri
karıştırmayınız.
10. Reaktifleri dondurmayınız.
11. Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan günışığından uzak
tutulması tavsiye edilir.
12. Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız.
4.
Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller
1.
2.
3.
4.
Pozitif ve negatif kontroller.
450nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu.
Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi önlemek
için her reaktif için temiz uçlar kullanınız.
Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel mikrotitre
levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama tamponu çözeltisini
dağıtmak için 350μL sekiz kanallı pipet.
5.
30 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer.
6.
Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için temiz ölçme silindiri.
7.
Saf veya iyonsuzlaştırılmış su.
Örnek Toplanması ve Saklanması
Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8°C sıcaklıkta veya daha uzun
süre için -20°C sıcaklıkta saklayın.
Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini düşünerek
kullanınız.
Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı
Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8°C sıcaklıkta saklayınız.
Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen son kullanma tarihlerine
kadar kararlıdır.
Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu mühürlenebilir folyo
keseyle yeniden paketlenmelidir. Saklama koşullarını yerine getirme
konusunda başarısızlık tahlil performansını olumsuz etkileyebilir.
Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir. Yıkama
tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer edildiğinden emin
olun.
Substratın rengi berrak olmalıdır.
Herhangi bir mavi renklenme
reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini gösterir.Substratı ışığa
maruz bırakmayınız.
Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme, bozulmaya
işaret eder ve bileşen atılmalıdır.
Prosedür
Reaktifin Hazırlanması
1.
Derecelendirilmiş pipet kullanarak enzim eşleniğine 1mL sulandırıcı
tampon çözelti ekleyin. Şişeyi 10 dakika boyunca yavaşça karıştırın.
2.
Talimatlarda belirtildiği gibi enzim seyrelticisi ekleyerek çalışan enzim
eşleniğini hazırlayın.
3.
Yeniden oluşturduğunuz enzim eşleniğini sağlanan şişelere ayırın. -20oC’de
saklayınız.
4.
Kullanılmayan çalışan enzim eşleniğini atın.
Tahlil Prosedürü
Tahlil Prosedürü
Not: Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda
sıcaklığına (20-27°C ) getiriniz. Operatörün
takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler,
kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test
edilebilir.
1.
Her çukura
kontrolün 10
ekleyiniz.
örneğin, kalibratörün veya
µL’sini 25 dakika içinde
2. Her test çukuruna 100 µL Enzim Eşleniği ekleyiniz
3. 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız.
4. Levhayı 350µL yıkama tampon çözeltisiyle
levha yıkayıcısıyla dört kere yıkayınız.
ve
5. Her çukura 100 µL Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve 30 dakikalığına
kuluçkaya yatırınız.
6. Her çukura 100 µL Durdurucu Çözelti ekleyiniz.
7. 450 nm’de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün.
Kalite Kontrol
Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş tahlil 15 dakika
içinde okunmalıdır.
Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış kalite
kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara uymalıdırlar.Negatif
kontrol, 10ng/mL kalibratörden daha yüksek bir soğurganlığa sahip
olmalıdır. Pozitif kontrol, 10ng/mL kalibratörden daha düşük bir
soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla
10ng/mL kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip
değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir. Tahlil tekrar edilmelidir, kontrol
sonuçları hala yukarıda belirtilen limitlerin dışındaysa Cozart
Bioscience Ltd.’in Teknik Servis’i ile temasa geçiniz.
Sonuçların Değerlendirilmesi
Pozitif Sonuç – 10ng/mL Kesme Kalibratörü’nden küçük veya ona eşit
soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif olarak değerlendirilir. Pozitif bir
sonuç, zehirlenme (entoksikasyon) derecesi veya uyuşturucu miktarı
hakkında bir bilgi sağlamaz; sadece niteliksel olarak örneğin kesme
seviyesinin üzerinde uyuşturucu bulundurabileceğine işaret eder.
Negatif Sonuç – 10ng/mL Kesme Kalibratörü’nden büyük soğurganlığa sahip
bütün örnekler negatif olarak değerlendirilir. Negatif bir sonuç kesin olarak
örnekte uyuşturucu madde bulunmadığına işaret etmez; sadece örneğin
niteliksel olarak kesme seviyesi üzerinde uyuşturucu bulundurmadığına
işaret eder.
Not: Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere sahip
olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki talimatları takip
etme konusundaki diğer başarısızlıklar, performans karakteristiklerini
ve etikette belirtilen veya ima edilen iddialarını etkileyebilir.
Yetersizlikler
Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka bir genel olarak kabul
gören bağışıklık harici metotla kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan serumu ve
bütün kanıyla kullanılmak üzere tasarlanmıştır.
Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin testle
etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi yanlış sonuçlar
ortaya çıkarma ihtimali vardır.
Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma sırasında zarar
görmesi durumunda lütfen Cozart Bioscience Ltd.’ın Teknik Servis’i ile temasa
geçiniz.
Özgüllük
100,000 ng/mL’de çapraz tepkimeyenler, kesme konsantrasyonuna
göre
7-Aminoflunitrazepam
Alprazolam
Amitriptyline
Amobarbital
Amphetamine
Anhydroecgonine
Anhydroecgonine methyl ester
Ascorbic Acid
Aspirin
Benzoylecgonine
Buprenorphine
Butalbarbital
Caffeine
Cannabidiol
Chlordiazepoxide
Chloroquine
Chlorpheniramine
Clonazepam
Cocaethylene
Cocaine
Cotinine
Δ9-THC
Desalkylflurazepam
Desmethylflunitrazepam
Dextromethorphan
Diazepam
Dothiepin
Ecgonine methyl ester
EDDP
EMDP
(-) Ephedrine
(+) Ephedrine
Fenfluramine
Fentanyl
Flunitrazepam
Fluoxetine
Flurazepam
Hexobarbital
3-Hydroxyflunitrazepam
11-HydroxyΔ9-THC
Ibuprofen
Ketamine
LAAM
Lidocaine
Lorazepam
LSD
MBDB
MDA
MDEA
MDMA
Meperidine
Methadone
Methamphetamine
Midazolam
Nicotine
11-nor-9-Carboxy-Δ9-THC
Nitrazepam
Norbuprenorphine
Nordiazepam
Norfluoxetine
Nor-LSD
Oxazepam
Oxycodone
Paracetamol
Pentobarbital
Phencyclidine
Pheniramine
Phenobarbital
βPhenylethylamine
Phentermine
Phenylpropanolamine
Prazepam
Propoxyphene
Propranolol
(-) Pseudoephedrine
(+) Pseudoephedrine
Ranitidine
Salicylate
Secobarbital
Temazepam
Triazolam
Tyramine
Warfarin
Çapraz-Tepkiyenler
Bileşikler
Çapraz-Tepkiyenler
6-Acetyl Morphine
Codeine
Dihydrocodeine
Heroin
Hydrocodone
Hydromorphone
Morphine-3-Glucuronide
Nalorphine
Naloxone
Norcodeine
Bileşikler
Çapraz-Tepkiyenler
Normorphine
ng/mL
10,000
1,000
100
10
100,000
10,000
1,000
100,000
10,000
1,000
10,000
1,000
100
50
25
10
100,000
10,000
100,000
10,000
1,000
100
100,000
10,000
1,000
100
50
5
1
100,000
10,000
1,000
100
100,000
10,000
1,000
ng/mL
1,000
100
Görülen Morfin
ng/mL
% Tepkirlik
> 100
58.0
12.0
<1
6.1
3.3
<1
5.8
1.4
<1
> 100
55.9
12.7
7.4
4.8
3.3
1.9
<1
97.6
26.3
5.1
<1
> 100
21.5
6.1
<1
> 100
10.9
2.8
40.6
14.5
6.1
<1
55.2
13.9
<1
--5.8%
12.0%
----0.03%
----0.01%
----5.6%
12.7%
14.9%
19.3%
32.6%
----0.10%
0.26%
0.51%
----0.22%
0.61%
----217%
276%
0.04%
0.15%
0.61%
--0.06%
0.14%
---
Görülen Morfin
ng/mL
% Tepkirlik
> 100
94.3
--94.3%
Oxymorphone
Tramadol
10
100,000
10,000
100,000
10,000
25.3
44.5
4.9
16.9
1.1
Daha fazla yardım/teknik destek için:
COZART plc
92 Milton Park
Abingdon
Oxfordshire
OX14 4RY, UK
Telephone: +44 (0) 1235 861483
Fax: +44 (0) 1235 835607
[email protected]
[email protected]
www.cozart.biz
253%
0.04%
0.05%
0.02%
0.01%