Simple Stains

Diferansiyel (Ayırtedici)
Boyama

Bakterilerin gruplarını ayırtetmek için
kullanılır.
Gram Boyama
 Asit-Fast Boyama

GRAM BOYAMA
En önemli ve en sık kullanılan ayırdedici bir
boyama tekniğidir.
 Bakterileri hücre duvarlarının kimyasal ve fiziksel
özelliklerine göre iki büyük gruba ayırmak için
kullanılan bir yöntemdir.Bakteri örneğinin
tanılanmasında ilk aşama olan Gr(+)/ Gr (-)
ayırımının yapılmasında kullanılır.
 Bu metodu bulan kişi Danimarkalı bilim adamı
Hans Christian Gram’dır.


Bakteriler Gr(+) ve Gr (-) olarak iki ana
gruba ayrılırlar. Bu farklılık gram boyama
reaksiyonundan kaynaklanır. Gram
reaksiyonu ise bakterilerin hücre çeperi
farklılıklarından temellenir.
Cell walls of bacteria(1)
Gram -
Gram +
-Hücre çeperi hücreyi dış etkilerden korur ve hücreye şakil verir.
-Bakterilere dayanıklılığı veren esas yapı çeperde bulunan peptidoglikandır.
- Peptidoglikan esas olarak 2 şeker türevinden ve bir grup amino asitten oluşur.
- Peptidoglikanda bulunan şekerler:
- N-acetylglucosamine (NAG).
- N-acetylmuramic acid (NAM).
-Peptidoglikan tabakada bulunan amino
asitler:
-L-alanin
-D-alanin
-D-Glutamik asit
-Lisin (Gr +) veya DAP (Gr -)
Peptidogikan yapısı
• Gram Pozitif:
- Peptidoglikan tabakası kalın.
- Teikoik asit oldukça büyük miktarda
bulunur.
• Gram Negatif:
- Gram (+)’lerden daha kompleksdir..
- Kalın dış membran; lipidleri,
lipopolisakkaridleri ve lipoproteinleri
içerir.
- peptidoglycan tabaka incedir.
The Gram-negative outer membrane(1)
Gram-Negatif ve
Gram-Positif Bakteriler Arasındaki Farklılıklar
Gram-Negatif Bakteri
Gram-Pozitif Bakteri
Hücre çepri kompleks. Kalınlığı
10nm
Basit hücre çeperi. Kalınlığı
20-80nm
Hücre duvarında 2 tabaka var
Hücre duvarındaki tabaka sayısı 1
Peptidoglikan ince.
Oldukça kalın.
Teikoik asid yok
Teikoik asid var
Lipid ve lipoprotein içeriği %58
%0-3
Lipopolisakkarid %13
%0
Protein içeriği %9
%0
Penicilin’e duyarlı değil
Duyarlı
Kırmızı pembe görünür
Mor renkte görünür.
Gram Boyama Prosedürü
a small drop of water
3 times to heat-fix
a small amount of the
bacteri
spread the bacteria/water
completely air dry
mixture
crystal violet for one minute
gram's iodine solution for one wash with %95 etanol for 10
minute and wash with water. seconds and wash with water
wash with water
safranin for one minutes
and wash with water
Gram Boyama
ilk
boya
mordant
dekolorizasyon
karşıt boya
pozitif
negatif
Gram Boyama
Gram +
hücreler
Gram –
hücreler
İlk boya
Crystal violet
Mor
Mor
Mordant:
Iodine
Mor
Mor
Dekolorize ajan:
Alkol
Mor
Renksiz
Karşıt boya:
Safranin
Mor
Pembe/kırmızı
Gram Boyama
Proteus vulgaris G-basil
Streptococcus pneumoniae
G+ kok
Staphylococcus epidermidis
G+ kok
Gram boyama – karışık kültür
Mikrometrik lam (her aralık
10 µm= 0,01mm)
Mikrometrik oküler

Örnek: Mikrometrik okülerde bir streptobasilin boyu
5, eni 1 aralıktır. Mikrometrik okülerin 10 aralığı
mikrometrik lamın 1 aralığına eşit ise basilin eni ve
boyu kaç µm’dir?
mikrometrik okülerin 10 aralığı
mikrometrik okülerin 1 aralığı
1 lam aralığı ise?
?