BUĞDAY GLÜTENİN PROTEİNLERİNİN İZOELEKTRİK ODAKLAMA

XIII. Ulusal Kimya Kongresi, Samsun, 1999
P-0322
BUĞDAY GLÜTENİN PROTEİNLERİNİN İZOELEKTRİK ODAKLAMA (EEF)
YÖNTEMİ İLE KARŞILAŞTIRILMASI
Ebru BEYOĞLU Ayten SAĞIROĞLU Hülya YAĞAR
Trakya Üniversitesi, Fen-Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü 22030 EDİRNE
Bu çalışmada, İzoelektrik Odaklama (EEF) tekniği kullanılarak buğdaylarda
bulunan glütenin proteinlerini izoelektrik noktasına (pl) göre ayırmak amaçlandı.
Trakya Bölgesi7nde ekimi yapılan beş çeşit ekmeklik buğday (Tr. Vulgare);
Atilla-12, Bezostaya-l, Kate A-l, Pehlivan ve Prostor unlan örnek materyal olarak
kullanıldı. İzoelektrik noktalan bilinen standart proteinler olarak Sığır Serum Albumini
(BSA), p-Laktoglobuiin, Lipaz ve Tripsinojen kullanıldı.
Buğday unları n-bütanol ile muamele edilerek polar lipidler uzaklaştırıldı.
Unların içerdiği glüten proteinleri, unların bidestile su ile hamurlaştırılıp bu hamurun
yıkanması sonucu elastik, yapışkan ve çözünmeyen hamur formunda elde edildi, % 50
1-Propanol ve 6 M üre ile bu hamurdan ekstrakte edilen glütenin proteinleri 2Merkaptoetanol ile indirgendi. 6 M üre içeren ekstraktlann 1.5 mî’si Sephadex G-200
destek maddesi kullanılarak 1x30 cm ebatındaki kolona uygulandı ve glütenin
proteinleri 3 M üre içeren 10 mM Tris.HCl tamponu (pH 8.0) ile elüe edildi.
Saflandınlan glütenin proteinleri dializ tüplerinde silikajel yardımıyla konsantre edildi.
Örneklerin glütenin proteini miktarlan Lowry metoduna göre bulundu.
Bütün örnekler izoelektrik odaklanmaya hazırlandı. pH 3-10 aralığında
amfolit içeren poliakrilamid jellere örnekler uygulanmadan önce 15 dak. ön yürütme
yapıldı. Bütün örnekler ve standart proteinler jele uygulanarak SE-600 Dikey Dilim Jel
Elektroforez Ünitesi’nde 400 VoltMa 4 saatte elektroforetİk ayırım gerçekleştirildi.
IEF ile ayrılan protein bandları Coomassie Brillant Blue R-250 boyası ile
boyandı ve boya çıkarma çözeltisi ile görünür hale getirildi.
Bilgisayar bağlantılı scanning dansitometre kullanılarak protein bandları
analiz edildi. Dansitometre programı İle her bir protein bandının % alan, Rf ve alan
değerleri bulundu. Örnek proteinlerin p l değerleri standart proteinlerin Rf değerleri ile
p l değerleri arasında çizilen standart protein grafiği yardımıyla hesaplandı,
Türkiye’de ekilen buğdaylarda glütenin proteinlerinin ayrımında ilk kez bu
method uygulanandı. Beş buğday çeşitinin hepsinde 2-merkaptoetanol varlığında
indirgenip, 6 M üre ile ekstrakte edilen örneklerde gluteninlerin çok iyi çözünürleştiği
anlaşıldı. Kolon kromatoğrafısi ile saflaştırılan beş örnekte tatmin edici bir saflaştırma
sağlanamadı. Beş buğday çeşitinin glütenin proteinleri arasında belirgin protein
farklılıklarına rastlanmadı. Bütün örneklerdeki glütenin protein bandlarmın izoelektrik
noktalan standartlara göre 4-8 arasında tespit edildi.