Sığır Sütünden Saflaştırılan Laktoperoksidaz Enzimi Üzerine Bazı

24. Ulusal Kimya Kongresi, Zonguldak Karaelmas Üniversitesi, 29 Haziran-2 Temmuz 2010, Zonguldak
L-Adrenalin ve L-Noradrenalin Hormonlarının Laktoperoksidaz
Enzim Aktivitesi Üzerine Etkilerinin İncelenmesi
Melda Şişecioğlu1,Murat Çankaya2, İlhami Gülçin1,3, Hasan Özdemir1
1
Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, 25240-Erzurum
Erzincan Üniversitesi, Fen Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Bölümü, 24100-Erzincan
3
İbrahim Çeçen Üniversitesi, Sağlık Yüksekokulu,04100 Ağrı
[email protected]
2
Laktoperoksidaz enzimi (LPO) (Hidrojen peroksit Oksidoredüktaz E.C. 1.11.1.7) patojen
mikroorganizmalara karşı, süt bezleri ve yeni doğan sindirim sisteminden salgılanan,
koruyucu role sahip prostetik grup olarak hem grubu içeren bir glikoproteindir [1,2].
Adrenalin ve noradrenalin, adrenal medulla ve sinir sistemi tarafından sentezlenen
nörotransmitter katekolaminlerdir. Adrenalin, canlı organizmalarda kan basıncının
düzenlenmesi, kalp fonksiyonlarının artması, düz kaslar üzerinde gevşeme, kan glukoz
seviyesinin yükselmesi gibi fizyolojik proseslerin düzenlemesinde önemli bir rol
oynamaktadır. Ayrıca vücudun fiziksel bütünlüğünü tehdit eden şartlarda fizyolojik bir tepki
olan kısa dönemli stres durumunda merkezi bir rol oynar [3].
Bu çalışmada L-Adrenalin ve L-Noradrenalin’in sığır laktoperoksidaz (LPO) enzimi üzerine
inhibisyonu etkileri in vitro olarak incelendi. LPO enzimi Amberlite CG-50 H+ reçinesi, CMSephadex C-50 iyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-100 jel filtrasyon
kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı [1]. Saflaştırma basamakları sonucunda LPO, %42
verim ve 30,33 EU/mg protein spesifik aktivitesine sahip olan enzim 20,78 kat saflaştırıldı.
Bu enzim için yapılan SDS-PAGE çalışmaları sonucunda molekül ağırlığının 80 KDa olduğu
bulundu. Enzim aktivite ölçümü pH 6.0’da 2,2'-azino-bis(3-etilbenztiazolin-6-sulfonik asit)
(ABTS) kromojenik substratı kullanılarak belirlendi ve bu metod bütün kinetik çalışmalarda
başarıyla uygulandı [4]. Saflaştırılan LPO’nun yapılan kinetik çalışmaları kapsamında 20oC,
pH 6.0’da K m ve V max değerleri sırasıyla 0.411 mM ve 13.6 μmol/min.ml olarak bulundu. LAdrenalin ve L-Noradrenalin için elde edilen IC 50 değerleri sırasıyla 34,5 ve 67,2 µM olarak
bulundu. Aynı hormonlar için K i değerleri ise sırasıyla 2,26 µM ve 0,062 mM olarak
belirlendi. L-Adrenalin ve L-Noradrenalinin enzim üzerinde inhibisyon türünün ise
yarışmasız olduğu belirlendi.
KAYNAKLAR
1. Şişecioğlu, M., Çankaya M., Gülçin, İ., Özdemir, M., Protein Peptide Lett., (2005), 16,
46-49.
2. Uguz, M.T., Özdemir, H., Appl. Biochem. Microbiol. 41, 349-353,
3. Gülçin, İ., Chem. Biol. Interact. (2009), 179, 71-80.
4. Shindler, J.S., Bardsley, W.G., (1975). Biochem. Biophys. Res. Comm., 67, 1307-1312.