Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi BACILLUS CEREUS ENFEKSİYONU* Gıda kökenli Bacillus cereus zehirlenmesi ICD-10 A05.4 * Ülkemizde akut gastroenterit bildirimi zorunlu bir klinik durumdur. Bacillus cereus da gıda zehirlenmeleri veya akut gastroenterit tablosuna neden olur ve genellikle salgınlarla birliktedir. Bu nedenle vakaların kayıt ve bildirimi için Sağlık Bakanlığının yayınlamış olduğu “Bulaşıcı Hastalıklar Sürveyans ve Kontrol Esasları Yönetmeliği” (RG 30/5/2007-26537) ve bu Yönetmelikte “Değişiklik Yapılmasına Dair Yönetmelik” (RG 02/04/2011–27893) ile “Bulaşıcı Hastalıkların İhbarı ve Bildirim Sistemi, Standart Tanı, Sürveyans ve Laboratuvar Rehberi”ne bakınız. EPİDEMİYOLOJİSİ Sporlu, bir bakteri olan B.cereus doğada yaygındır; toz toprak, su, yeşil ve çürüyen bitkilerde bulunabilir. Tahıllar, kuru gıdalar, sebzeler, et, süt ürünleri ve diğer yiyecekler bakteri sporları ile kontamine olabilir. Pişirme ısısına dayanıklı olan bakteri sporları, yemeklerin uygun koşullarda saklanmaması sonucu vejetatif forma geçer ve toksin salgılarlar. Kontamine yiyeceklerin ağızdan alınması besin zehirlenmesine yol açabilir. B.cereus kaynaklı besin zehirlenmesi en fazla pirinç ile hazırlanan yiyeceklerle ortaya çıkar. Özellikle Uzakdoğu mutfağının pirinçli yemek çeşitleri pek çok salgından sorumlu bulunmuştur. Ayrıca kontamine kırmızı et ve kümes hayvanı ürünleri, sebze yemekleri, makarnalar, pastörize krema, sütlü puding v.b. tatlılarla da bulaş kaydedilmiştir. B.cereus kaynaklı besin zehirlenmesi dünyanın her yerinde ve her mevsimde görülebilir. Görülme sıklığı gıdaların uygun olmayan koşullarda hazırlanıp, saklanmasıyla yakından 6 ilişkilidir. Gramında >10 B.cereus içeren gıdanın tüketimi kliniğin gelişmesi için yeterlidir. KLİNİK ÖZELLİKLERİ B.cereus salgıladığı iki farklı toksin ile iki farklı klinik tablo oluşturur: Kusma ile seyreden tablo - bakterinin salgıladığı düşük molekül ağırlıklı, ısıya dayanıklı ekzotoksinler emetik tipte besin zehirlenmesine neden olur. Kontamine yiyeceklerin tüketilmesinden 1-6 saat sonra bulgular ortaya çıkar; bulantı ve kusma ile seyreder. Bazen karın ağrısı, ishal gözlenebilir. Staphylococcus aureus besin zehirlenmesine benzer belirtiler gösterir. Genelde belirtiler 24 saat içinde sonlanır. İshal ile seyreden tablo - salgılanan yüksek molekül ağırlıklı ısıya duyarlı ekzotoksinler ishal ile seyreden tabloya yol açar. İnkübasyon süresi daha uzundur. Bulgular, kontamine yiyeceklerin tüketilmesinden 10-15 saat sonra ortaya çıkar ve Clostridium perfringens gıda zehirlenmesine benzer belirtiler gösterir. Sulu ishal ve kramp tarzında karın ağrıları mevcuttur. Bulantı ishale eşlik edebilir, fakat kusma nadiren görülür. Birçok olguda belirtiler 24 saat sonunda düzelir. KLİNİK TANI YAKLAŞIMI Hastalığın akla getirilmesinde şu öykü ve bulgular yol gösterici olabilir: kramp şeklinde karın ağrısı ve sulu ishal, (ya da) kusmanın ön planda olduğu klinik tablo, birden fazla bireyin etkilenmiş olması, pirinç, hububat v.b. ile hazırlanmış bir gıdanın tüketimi ile muhtemel ilişki. Kesin tanı dışkı ve şüpheli gıdadan aynı anda yapılan kültürlerde bakterinin enfeksiyon için geçerli kabul edilen miktarlarda ürediğinin gösterilmesi ile konur. BACILLUS CEREUS TANISI İÇİN LABORATUVAR İNCELEMESİ Laboratuvara ne tür klinik örnekler gönderebilirim? Dışkı – ishal tipi zehirlenmelerde, Kusmuk – kusma tipi gıda zehirlenmesinde Şüpheli gıda örneği – etkilenen vakaların tükettiği gıdalardan numuneler. ÖNEMLİ NOT: B.cereus normal bağırsak florasında da bulunabilir. Bu nedenle bakterinin sadece dışkıda aranması yanıltıcı sonuç verir. Gıda kaynaklı salgınlarda B.cereus’un etiyolojik ajan olarak teyidi için, hasta kusmuğu veya dışkısı ile kontaminasyon şüphesi bulunan gıda aynı zamanda işleme alınmalıdır. [BACILLUS CEREUS ENFEKSİYONU] Sayfa 1 Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi Örnek almak için en uygun zaman nedir? Hastalık bulguları görülür görülmez örnek alınır. Örnekle birlikte göndermem gereken özel bir form var mı? Ek-4’de verilen veya benzeri bir “Laboratuvar Bilgi Formu” mutlaka ve eksiksiz olarak doldurulmalı ve örneklerle birlikte laboratuvara gönderilmelidir. Formda ön tanı mutlaka yazılmalı; ayrıca varsa şüpheli gıda tüketimi ve benzer başka vaka olup olmadığı bilgileri mutlaka not edilmelidir. B.cereus araştırması için; semptomlar başladıktan sonraki 24 saat içinde örnek alınmamış ise, daha sonra alınan dışkı örnekleri gönderilmemelidir. Laboratuvarın rutin dışkı inceleme paketi içinde B.cereus incelemesi yer almaz. Bu nedenle klinik olarak kuşkulanıldığında laboratuvar ile iletişim kurulmalı, laboratuvarın analize gereken hazırlığı yapabilmesi için haber verilmelidir! Örnek almak için gerekli malzemeler nelerdir? Nasıl temin edebilirim?* Klinik örnekleri hastadan nasıl almalıyım? Gerekiyorsa, hangi işlemleri uygulamalıyım? Steril, geniş ağızlı, vida kapaklı kap (steril naylon idrar kabı kullanılabilir) Dışkı: Hastaya tarif edilerek örnek vermesi sağlanır. Dışkı idrar ile kontamine edilmemelidir. Hasta bu hususta uyarılır. Yatalak hastalarda steril sürgü kullanılır. 25-50 g dışkı örneği alınmalıdır. ‡ Şehir içi Şehirlerarası (kısa mesafe) (uzun mesafe) taşıma süre-sıcaklık taşıma süre-sıcaklık ≤1 s; OS ≤48 s; +4C >1 s; +4C >48 s; kuru buz içinde (-70C) ≤1 s; OS ≤48 s; +4C >1 s; +4C >48 s; kuru buz içinde (-70C) ≤1 s; OS ≤48 s; +4C >1 s; +4C >48 s; kuru buz içinde (-70C) Örnek steril, geniş ağızlı vida kapaklı bir kaba konmalı ve kabın ağzı sıkıca kapatılıp laboratuvara gönderilmelidir. ‡ Steril, geniş ağızlı, vida kapaklı kap (steril naylon idrar kabı kullanılabilir) Kusmuk: Hastaya steril (geniş ağızlı, vida kapaklı, sızdırmaz) bir kap verilerek hastanın kusmuğunu bu kaba çıkarması istenir. 25-50 gr kusmuk örneği alınmalıdır. Kabın ağzı sıkıca kapatılır ve laboratuvara gönderilir. Steril, geniş ağızlı, vida kapaklı kap (steril naylon idrar kabı kullanılabilir) Şüpheli gıda örneği: Vakaların etkilendiği düşünülen şüpheli gıda örneği de klinik örneklerle birlikte gönderilir. ‡ İncelenecek örnek fazla büyükse -kontaminasyon düzensiz dağılmış olabileceğinden dolayı- gıdanın farklı kısımlarından her biri 50 g kadar ve yiyeceği iyi temsil edecek şekilde § örnekler alınır ve soğuk zincirde laboratuvara gönderilir. Kuru gıdalar laboratuvara oda sıcaklığında gönderilebilir. Kısaltmalar - s: saat; OS: oda sıcaklığı * Tabloda önerilen örnekleme malzemesini -ayrıca belirtilmedikçe- hastanenizin laboratuvarından temin edebilirsiniz. ‡ Testin çalışılacağı laboratuvara örneğin alınması ve gönderilmesi ile ilgili özel bir uyarılarının olup olmadığını sormanız önerilir. § Eğer laboratuvarda örnekler 4 gün içinde incelenemeyecekse, örnekler laboratuvara ulaşır ulaşmaz dondurulmalı ve inceleneceği güne kadar -20C’nin altında saklanmalıdır (Kaynak no. 5). Güvenlik önlemleri nelerdir? Kendimi nasıl koruyabilirim? Her türlü klinik örnek “enfeksiyöz” kabul edilmeli ve bu örneklerle çalışılırken standart güvenlik önlemleri alınmalı, kişisel koruyucu ekipman giyilmelidir. Örnekleri hangi laboratuvara gönderebilirim? B.cereus kültürü laboratuvarların rutin dışkı inceleme paketi içinde yer almadığından; klinik olarak B.cereus’a bağlı gıda zehirlenmesi şüphesi varsa, örneklerin (gıda örnekleri dahil) size en yakın Üniversite Hastanesi veya Eğitim Araştırma Hastanesi Laboratuvarına gönderilmesi önerilir. B.cereus kaynaklı gıda zehirlenmesi bir salgın ile ilişkili olabilir. Kısa süre içinde birden fazla vaka ile karşılaşmanız halinde mutlaka İl Halk Sağlığı Müdürlüğü ile bağlantı kurunuz! Salgın-ilişkili olay örnekleri (klinik örnekler ve gıda örnekleri) Müdürlük kanalıyla gönderilir! Gerekiyorsa örnekler Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Ulusal Enterik Patojenler Referans Laboratuvarına ve Gıda Mikrobiyolojisi Laboratuvarına gönderilmelidir (adres ve iletişim bilgileri için bkz. Ek-3 ve Ek-5). Sayfa 2 [BACILLUS CEREUS ENFEKSİYONU] Bulaşıcı Hastalıkların Laboratuvar Tanısı için Saha Rehberi Hangi durumlarda örnekler laboratuvara kabul edilmez? Testin çalışılacağı laboratuvar ile işbirliği içinde örnek gönderilmesi önerilir. Şu örnekler laboratuvara kabul edilmez: Hangi laboratuvar incelemelerini isteyebilirim? Sonuçları ne kadar zamanda alabilirim? Sonuçları nasıl yorumlamalıyım? Kültür (dışkı/kusmuk ve gıdadan spesifik bakteriyel etken için kültür; kantitatif) En erken 3 gün* Dışkı veya kusmuk örneklerinden B.cereus için kantitatif kültür 5 yapılmalı; ≥10 /g bakteri tespit edilmiş olmalıdır. Moleküler analiz 1 gün* Moleküler analiz ile enterotoksin kodlayan gen varlığı gösterilirse gıdanın kontamine olduğu söylenebilir. B.cereus’a bağlı bir salgının doğrulanması için kriter 3-7 gün* Kontrol bireylerden (asemptomatik) izole edilmezken, iki veya daha fazla semptomlu bireyin dışkısından B.cereus’un izole edilmiş olması gereklidir; veya şekilli, katı dışkı örnekleri; tuvalet kağıdı ile alınmış dışkı örnekleri; idrar veya baryumla karışık dışkı örnekleri; alındıktan sonra 1 saat geçtiği halde soğuk ortama konmadan gönderilmiş örnekler; örneği içeren tüp/kap üzerinde hasta bilgileri yazılı olmayan örnekler; örnek üzerindeki isim/protokol no ile hasta bilgileri birbirini tutmayan örnekler; hastaya ait uygun bir istek formu düzenlenmemiş örnekler. 5 Aynı zamanda şüpheli gıdanın kantitatif kültüründen de ≥10 /gr B.cereus izole edilmiş olmalıdır. Salgının kaynağı olduğundan şüphelenilen gıdanın incelenmesinde 5 10 B.cereus organizmasının ürediğinin gösterilmesi gereklidir. * Sonucun çıkış süresi için laboratuvar ile bağlantı kurunuz! Daha fazla bilgi için önerilen kaynaklar: 1. The anaerobic bacteria. In: Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn WC, eds. Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 6th Ed., JB Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2005; s. 651-708 2. Specimen collection and anaerobic culture techniques. In: Jausimies-Somer HR, Summanen P, Citron DM, Baron th EJ, Wexler HM, Finegold SM, Wadsworth KTL, eds. Anaerobic Bacteriology Manual, 6 ed., Belmont CA: Star Publishing, 2002. 3. Rajkowski KT, Smith JL. Update: Food poisoning and other diseases induced by Bacillus cereus. In: Hui YH, Pierson nd MD, Gorham JR, eds. Foodborne Disease Handbook, Revised and expanded 2 Ed., Volume 1: Bacterial Pathogens. Marcel Dekker, Inc., NY. ISBN: 0-8247-0337-5, 2001; s. 61-76 4. Morse DL, Birkhead GS, Guzewich JJ. Investigating Foodborne Disease. In: Hui YH, Pierson MD, Gorham JR, eds. nd Foodborne Disease Handbook, Revised and expanded 2 Ed., Volume 1: Bacterial Pathogens. Marcel Dekker, Inc., NY. ISBN: 0-8247-0337-5, 2001; s. 587-643 5. Rhodehamel EJ, Harmon SM. Bacillus cereus. Bacteriological Analytical Manual. Chapter 14. http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/BacteriologicalAnalyticalManualBAM/ucm0708 75.htm January 2001. 6. Ombui JN, Gitahi JN, Gicheru MM. Direct detection of Bacillus cereus enterotoxin gene in food by multiplex polymerase chain reaction. Intern J Integrat Biol, 2008; 2: 172-181 [BACILLUS CEREUS ENFEKSİYONU] Sayfa 3