preparat hazırlama

PREPARAT HAZIRLANMASI
Mikroskopta gözlem yapabilmek için objelerin mikroskopta incelenebilecek hale getirilmesi
gerekir. Preparasyon objenin mikroskopta incelenebilecek hale getirilmesi işlemlerini kapsar.
Eğer numune sıvı ise; yuvarlak öze ile 1-2 öze dolusu lam üzerine konur, film halinde yayılır.
Eğer numune katı ise iğne öze ile alınır. Lam üzerine 1 damla fizyolojik tuzlu su (F.T.S.)
konur. İğne öze ile alınan numune F.T.S. içinde ezilerek lama paralel olarak film halinde
yayılır.
Bazen lamel kapatıldığında ortam sıvısı su taşarak üzerine çıkar. Bu durumda sıvı fazlası,
kurutma kağıdı ile yanlardan alınabilir bazı durumlarda ise yeni bir preparat hazırlamak daha
iyi sonuç verebilir. Bazen de lamelin altında hava kabarcıkları oluşur. Oluşan bu hava
kabarcıkları mikrsokopta büyük parlak mavi küreler olarak görülür. Hava kabarcığı olan bir
preparat hatalı olarak kabul edilir. Hava kabarcıklarını nedeni, ortam sıvısının yetersiz
kullanılması veya lamelin lam üzerine yavaşça yerleştirilmesi yerine hızla ve yukarıdan
kapatılmasından olur. Lamın kenarında büyük bir hava boşluğu varsa lamın kenarından küçük
bir damla ortam sıvısı ekleyiniz ve boşluğu kapatmaya çalışınız veya yeni bir preparat
hazırlayınız.
Fizyolojik Tuzlu Suyun Hazırlanışı:
NaCl
8,75 g.
Distile su
1000 cc.
Tuz distile suya karıştırılarak eritilir ve otoklavda sterilize edilir.
Preparatın Kurutulması
Preparat amaca ve usulüne göre hazırlandıktan sonra yapılacak ikinci işlem, bunların
kurutulmasıdır. Preparatlar genellikle, havagazı alevinin üstünde ve döndürülerek (dairesel ve
yatay) çabuk kurumaları sağlanır. Lam alevin üstünde ve yanmayacak bir yükseklikte pensle
veya parmakla tutularak kurutulur. Kurutma işlemi, ayrıca preparatlar oda veya inkübatör
(etüv) ısısında bırakılmak suretiyle yapılabilir. Kurutma işlemi sırasında, lam üzerinde
bulunan mikroplar hafifçe lama yapışırlar. Ancak su ile yıkandıklarında düşebilirler.
Preparatın Tespiti (Fiksasyon)
Preparatlar kurutulduktan sonra tespit edilir. Hücrelerin ve mikroorganizmaların iç ve dış
yapılarının korunmasına ve sabit pozisyonda tutulmasına "Fiksasyon" denir. Fiksasyon işlemi
hücre morfolojisini bozabilecek enzimleri inaktive eder ve hücre yapısını güçlendirir. Bu
şekilde hücreler boyama ve gözlem esnasında değişmezler. Fiksasyon esnasında
mikroorganizmalar genellikle öldürülür ve lama yapışırlar.
Tesbit başlıca iki şekilde yapılır:
1) Fiziksel tesbit: Kurutulan preparat, bir ucundan pensle tutularak alevin içinden 3 defa
geçirilerek tespit edilir. Tespit sırasında preparatın yanmamasına dikkat edilir. Yanmış
preparatlarda mikroorganizmalar dağılmış, şişmiş ve deforme olmuş bir şekilde görülürler. Isı
ile fıksasyonda genellikle mikroorganizmaların morfolojileri korunur fakat hücre içi yapıları
korunmaz.
2) Kimyasal tesbit: Hücre içi yapılar korunmak isteniyorsa, kimyasal fiksasyon
kullanılmalıdır. Kimyasal fıksatifier hücreye girer ve hücre bileşenleri (genellikle protein ve
lipidler) ile etkileşirler. Bu reaksiyon sonucu hücre bileşenleri aktivitesini kaybeder,
çözünemez hale gelir ve hareketini kaybeder. Ethanol, asetik asit, civa klorür ve formaldehit
genel olarak kullanılan fiksatifler arasındadır.