ppt

TIBBİ BİYOLOJİ ANABİLİM DALI
DÖNEM I ÖĞRENCİ LABORATUVARI / 2
KANDAN DNA İZOLASYONU,
ELEKTROFOREZİ,
KESİMİ,HARİTALANMASI VE
BLOTLANMASI
Lökositler
Restriksiyon Enzimlerine Örnekler
Restriksiyon Enzimlerin Kesimleri
Primer nedir nasıl yapılır ne işe yarar ?
15 ile 20 baz çifti arasında değişen sentetik kısa DNA parçaları.
Genellikle PCR ve DNA dizilemesi amacı ile
kullanılırlar.
1.
2.
3.
4.
Hairpin oluşturulmamasına dikkat edilmelidir.
Dimer oluşturmamasına dikkat edilmelidir.
3’-OH ucu açık olmalıdır.
Erime sıcaklığı belli bir değerin üstünde ve altında
olmamalıdır.
PCR
PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu)
Agaroz
• Sınıf:Polisakkarid
• Sistematik Adı: (14)-3,6-anhydro-α-Lgalactopyranosyl-(13)-β-D-galactopyranan
Akrilamid ve Poliakrilamid
Poliakrilamid
PCR ürünlerinin %0.8’lik agaroz jeldeki
görüntüleri
Apo E’nin PCR ürünü ve Hin6I enzimi
kesimi sonucu oluşan tüm genotipleri
M
PCR 2/2 2/3 2/4 3/3 3/4 4/4 M
Analizde kullanılan Hin6I enzimi ile
kesilmiş bir Apo E jel görüntüsü
PCR Ürününün Restriksiyon
Enzim Kesimi ve Jel Görüntüsü
SSCP Analizi
Agaroz Jel Yapımı
Agaroz Jelin Görüntülenmesi
Poliakrilamid Jel Elektorforez
(PAGE) Sistemi
Jelin Yüklenmesi
Pulsed Field Electrophoresis for
Separation of Large DNA
SOUTHERN BLOT