PCR karışımınızı pipetle çekip bıra

NCL-PCR Protokolü
1. (150’)
Bu deneyde kullanılan DNA örnekleri genellikle adsorpsiyon sütun kromatografisi kullanılarak
farklı dokulardan çıkarılıp saflaştırılarak elde edilecektir.
Zaman kısıtlamasından dolayı DNA’yı özütleyip saflaştırarak saf DNA elde ediyoruz.
Deneyimiz için bir aileden alınmış altı hazır DNA örneği kullanıyoruz:
Baba(F), anne(M), 4 çocuk(C1-C4). DNA iyice saflaştırılmış ve PCR’da kullanılmaya hazır
haldedir.
2 çalışma grubu (a=çift ve b=çift değil(?)) bir ailenin DNA örneklerinin test edileceği grubu
oluşturuyor.
Çift olmayan grup(?): baba ve C1,C2
Çift grup: anne ve C3,C4
2. PCR tüplerinin hazırlanışı (30’)
2.1- 6 PCR tüpünü boya(?) adaptör tüplerine koyup aşağıdaki gibi etiketleyin:
F, M, C1, C2, C3, C4
PCR’ı içinde bulunduran adaptör tüpleri soğutmak için buz üstüne koyun.
2.3- 1-6 numaralı DNA çözeltisi örneklerin her birinden 20 µl alarak birer soğutulmuş PCR
tüpüne koyun ve PCR karışımlarını aşağıdaki şemaa göre tamamlayın.
2.4- PCR karışımınızı pipetle çekip bırakarak veya tüpleri elinizle hafifçe sallayarak
karıştırın.
Nr
1
2
3
4
5
6
Sample
F
M
C1
C2
C3
C4
DNA
20 µl
20 µl
20 µl
20 µl
20 µl
20 µl
Mastermix
25 µl
25 µl
25 µl
25 µl
25 µl
25 µl
Primer
5 µl
5 µl
5 µl
5 µl
5 µl
5 µl
2.5- Çoğaltma için PCR’a başlayana kadar PCR karışımınızı buzun üstünde soğutun
(en fazla 20’)
3. PCR prosedürü(3 sa)
PCR’ı ısı döngüleyicinin sıcaklık programını tapip ederek uygulayın.
Karışıklıktan kaçınmak için ısı döngüleyicinin içindeki örneklerinizin konumlarına
dikkat edin!
Tüplerinizin doğru bir şekilde kapatıldığından emin olun!
4. Agaroz- jel electroforez ile PCR ürünlerinin kanıtı (2 sa)
4.1- Agaroz- jel electroforez işlemini gerçekleştirerek PCR ürünlerine kanıt gösterin.
4.2-Jellerinizi boyayın ve analiz edin.