HOT START TAQ DNA POLĐMERAZ
advertisement
HOT START TAQ DNA POLĐMERAZ Kat. No. Unite 10X Buffer 1 10X Buffer 2 MgCl2 25 mM SNPHTQ-S 100 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml SNPHTQ-25 250 0,75 ml 0,75 ml 0,75 ml SNPHTQ-5 500 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml SNPHTQ-10 1000 2x 1,5 ml 2x 1,5 ml 2x 1,5 ml SNPHTQ-50 5000 15 ml 15 ml 15 ml GĐRĐŞ Hot Start DNA Polimeraz, Taq DNA Polimeraz’ın geliştirilmiş bir formudur ve Kullanılacak 10X Buffer 1 veya 10X Buffer 2, 25 mM MgCl2, dNTP, ve ısı muamelesi ile aktive edilmektedir. Enzim, aktivite bölgesine eklenen primer kimyasal bir madde ile oda sıcaklığında inaktif hale getirilmiştir. PCR’ın konsantrasyonlarının eşit şekilde dağılması için solüsyonların çözünmesi ve hazırlık ve başlangıç aşamasında henüz aktifleşmeyen enzim, bu solüsyonlarını eritiniz. Belirli bölgelerde yoğunlaşan tuz karıştırılması önem taşımaktadır. aşamalarda meydana gelen yanlış primer bağlanmalarının uzamasında yer Notlar; almayacaktır. Bu şekilde standart DNA polimerazlara göre daha spesifik ve • PCR reaksiyon karışımı, DNA izolasyon ve PCR ürünlerinin analiz bölümünden ayrı bir alanda hazırlanmalıdır. yüksek verimde PCR ürünleri elde edilebilmektedir. º Reaksiyon uygun aktivasyon sıcaklığına ulaştığında; 95 C’de 15 dk’lık • Bazı çalışmalarda, en uygun sonuç için daha fazla miktarda MgCl2’e aktivasyon süresinde, kimyasal parça ayrılarak enzimi aktif hale ihtiyaç duyulmaktadır. Bu nedenle Buffer’lara ek olarak 25 mM MgCl2 getirmektedir. verilmektedir. Zaman ve maddi kazanç sağlayan multipleks PCR çalışmalarında, birden fazla özel hedef bölge aynı anda, tek bir tüp içerisinde çoğaltılmaktadır. Bu ÜNĐTE TANIMI tip gelişmiş çalışmalarda enzimin spesifikliği önem kazanmaktadır. • Bir ünite; standart deneme koşullarında 10 nmol dNTP’yi 72ºC’de 30 10X Reaksiyon Buffer 2; sahip olduğu dengelenmiş Amonyum/Potasyum dk’da asit çöktürülebilir forma dönüştürecek şekilde kullanmayı konsantrasyonu ile multipleks PCR gibi daha karmaşık ve gelişmiş PCR tanımlamaktadır. sistemleri için optimize edilmiş yeni bir buffer sistemidir. ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ SAKLAMA KOŞULLARI • Konsantrasyonu 5000 unite / ml’ dir. Aktivitesi 72 °C’ de 60 Nükleotid / Saniye uzamadır. Tavsiye edilen MgCl2 konsantrasyonu 1,5 mM - 6 mM arasıdır. • Enzim – 20 °C de ve karanlıkta saklanmalıdır. • • Bufferlar ve MgCl2 +4°C de ve/veya –20°C de karanlıkta saklanmalıdır. • • ÖRNEK KULLANIM PROTOKOLÜ inkübasyon sonucunda endonükleaz, ekzonükleaz ve primer aktivitesi Bu protokol PCR çalışmalarının ilk denemelerinde yol gösterici olarak tespit edilmemiştir. kullanılabilir. Fakat inkübasyon süreleri, sıcaklık, kullanılacak DNA miktarı gibi uygun reaksiyon koşulları, çalışılan bölgeye bağlı olarak farklı optimizasyonlar gerektirebilmektedir. Standart bir PCR çalışması için gereken bileşenler, aşağıda belirtilen 1 µg pUC 19 Plazmid DNA ve 0,5 µg EcoR I ile kesilmiş lambda faj DNA, 40 ünite Hot Start DNA Polimeraz varlığında 72ºC’de 3 saat’lik miktarlara uygun olarak 10X Buffer 1 Tris-HCl pH 8.5, (NH4)2SO4, %1 Tween 20®. 10X Buffer 2 Tris-HCl pH:8.7, Dengelenmiş KCl/(NH4)2SO4, 15mM MgCl2, %1 Tween 20®. hazırlanmalıdır. UYARILAR Bileşen 10X Buffer (1 veya 2 dNTP miks MgCl2 * Primer A Primer B HotStart Taq DNA Polimeraz Distile Su DNA Toplam Hacim Hacim/Reaksiyon 5 µl 0.8 µl Son Konsantrasyon 1X 0.2 mM her bir dNTP için 1,5 mM – 6 mM 0.1-1 µM 0.1-1 µM 1-5 ünite • Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır. • Oda sıcaklığında unutulmuş bileşenler kullanılmamalıdır. • Bileşenler eğer dondurulmuşsa, oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı edilerek hafifçe karıştırıldıktan sonra kullanılmalıdır. • Belirtilenden fazla Taq DNA Polimeraz kullanımı sorunlara yol açabilir. • HotStart Taq DNA Polimeraz vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece in vitro laboratuar kullanımı içindir. • 50 µl (*) Kullanılan buffer 10X Buffer B ise, MgCl2 gerekmeyebilir. HotStart Taq DNA Polimerazın raf ömrü etikette belirtilmiştir. Tarihi geçen ürün kullanılmamalıdır. Sorularınız için, lütfen Ar-Ge bölümü ile temasa geçiniz. [email protected] Düzenleme Tarihi: 12.03.2012
