Nazal mukozadaki T hücre

Nazal Polipli Hastalarda karakteristik IL-25/IL-33 cevaplı
Th2 hücreler ve mukozadaki Th1 hakimiyeti
Giriş
•Nazal polip: mukozada kronik enflamasyon zemininde gelişen
ve klinik olarak nazal obstrüksiyonla seyreden benign patoloj’
•Tedaviye kısmen cevap vermekte ve çoğu zaman astim +
•Endotiplerde coğrafi varyasyonlar;
• Batı ülkelerinde daha çok eozinofilik Th2 ilişkili polipler, Staf
Aureus superantijenleri tarafından tetiklenen Th2 cevabı
• Güney Asya’da nötrofilik infiltrasyon ve lokal Th1/Th17
•Lokal immün mekanizma?
•Sağlıklı nazal mukozadaki T hücre cevabı?
IL-25, IL-33
IL-17reseptör B, ST2 reseptörü
• Son çalışmalarda;
• IL-25 (IL-17E olarak da adlandırılır) IL-17RB reseptörü üzerinden
• IL-33 ST2 reseptörü üzerinden
Hayvanlarda alerjik enflamasyon modellerinde  Th2 cevabı
• IL-17RB: timik stromal lenfopoietin uygulanan dendritik hücrelerle
diferansiye olan Th2 hücrelerde gösterilmiş
• IL-25 astımlı hastaların bronş mukozalarında ve alerjen cilt testleri geç
yanıtta
• ILC2 hücrelerinin hem IL-17RB hem de ST2 reseptörlerini
ko-eksprese ettiği, ve IL-25 ve IL-33 e cevap olarak IL-5 ve IL-13 ürettiği
saptanmış
• ST2 reseptörü farede Th2 cevabı ile ilişkili bulunmuş. Ayrıca nazal polipli
hastalarda ILC2 ve eozinofillerde yüksek bulunmuş
• Tedaviye dirençli nazal polip epitelinde IL-33 mRNA seviyesi tedaviye cevap
verenlere göre anlamlı olarak yüksek
• Nazal mukozadaki T hücre – IL-25 ve IL-33 arasındaki ilişki araştırılmamış
Materyal-Metod
Opere edilen
20 nazal polipli hasta
10 sağlıklı gönüllü
Polip –nazal mukozadokusu ve
periferik kan örneği
•
•
•
•
•
Periferik kan mononükleer hücre kültürü
Th1/Th2 diferansiyasyonu (CD4 Pozitif İzolasyon kiti)
Doku eksplant kültürleri
Nazal polip dokusunda kollagenaz ile disosiyasyon
Flow sitometri analizi
•
•
•
•
Antikorlar
Yüzey boyama
İntrasellüler sitokin boyama
FACSAria II flow sitometri (Fluorescence-activated cell sorting)
• İmmünohistokimyasal analiz
• Gen ekspresyon analizi
• Microarray
• Quantitative real time PCR
• T hücre reseptör variable beta zincir repertuar analizi (TCR Vβ)
• Cytometric bead array
• İstatistiksel analiz
Sonuçlar
Nazal polip T hücreleri efektör-hafıza tip T hücre
Çoğunluğu αβT hücre, minimal γδT hücre
•Polip, nazal mukoza ve kanda CD4+ hücre analizi
•Anti-CD3/CD28 stimülasyonu ve IL-2 eklenerek 7 gün
•Hem polip hem kanda CD45RO  (hafıza hücre)
•Polipte kana göre CD62 ligand ve CCR7 , CD49a (doku hafıza
hücrelerinde olan integrin)
•Buna göre nazal poliplerdeki T hücreler efektör-hafıza fenotipli
Nazal poliplerde Th17 ve Th2 sitokin
profili var
•Polip CD4 hücrelerinin sitokinleri
• IL-17, IL-22
• IL-5, IL-9 ve IL-13
(Aynı donorlerin kan analizlerinde böyle değil)
• IL-17, IL-22, INFγ koekspresyonu
• Polip T hücrelerinde TNF-α kana göre
daha yüksek
• INFγ polip ve kan T hücrelerinde benzer
Th2 sitokin profili nazal poliplere özgü fakat nazal mukoza T
hücrelerinin karakteri değil
•
•
•
•
Hem polipli hem de sağlıklı nazal mukozada Th17 sitokinleri
IL-17 hem sağlıklı hem de polipli mukozada 
Sağlıklı mukozada IL-13 minimal
IL-4 , IL-5 ve IL-13 polipte 
IL-17RB in vitro Th2 polarize olmuş hücrelerde eksprese ediliyor fakat Th1 yönünde
polarize olmuş hücrelerde değil (periferik kan T hücre kültür analizi)
Ayrıca IL-17RB ekspresyonu Th2 hücrelerinde IL-13 ekspresyonu ile korele
Bu bulgular IL-17RB nin güçlü bir Th2 hücresi markerı olabileceğini göstermekte
• IL17RB + hücreler nazal polip CD4 T hücrelerinde 
• Kanda ve sağlıklı nazal mukozada ihmal edilebilir miktarda..
• CRTH2 (Th2 ilişkili
Prostoglandin D2 reseptörü)
ile IL-17RB koekspresyonu
• Th17 ilişkili CCR6 ve Th1
ilişkili CXCR3 hücrelerde IL17RB ihmal edilebilir
düzeyde
Nazal poliplerden elde edilen IL-17RB+ CD+ hücreler in vivo diferansiye hafıza
Th2 hücrelerini yansıtıyor
•IL-17RB+CD4+ ve IL17RB- CD4+ hücreler kıyaslandığında Th2 ile ilişkili IL4, IL5, IL9, IL13 ve
GATA3 geni daha  fazla upregüle
•Aynı şekilde daha Th1 ilişkli gen ekspresyonu ; IFNG, LTA, CCL3
•Promelanin concentrating hormon ve prostoglandin endoperoksit senraz 2 IL-17RB+
hücrelerde 
IL-33 reseptörü olan ST2 de aynı zamanda IL-17RB+ hücrelerde eksprese ediliyor
•Nazal poliplerdeki T hücreler IL-33 reseptörü mRNA eskprese ediyor, hem
çözünmüş hem de transmembran formunu
•IL-17RB+ T hücreler IL-33e cevaplı olabilir
•IL-17RB ve ST2 nazal polip hücrelerinde fonksiyonel ve Th2 sitokin üretimini
potansiye ediyor (rekombinant sitokinlerle sitimüle edilerek gösterilmiş)
IL-25 hücresel kaynağı nazal polip epiteli ve eozinofiller
•İmmünohistokimyasal incelemede nazal polip epitelinde var
ama sağlıklı mukozada yok
•Polip submukozasında da önemli miktarda IL-25+ hücre;
eozinofil morfolojisinde
•IL-33 ise hem polipli hem de sağlıklı nazal mukozada baskın
olarak epitelyal ve endotelyal paternde eksprese
IL-17RB+ ve IL-17RB- hücrelerde farklı T hücre reseptörü
özellikleri
IL-17RB+ T hücreleri klonal ekspansiyona uğramış
Buna farklı hastalarda aynı epitoplar sebep olmuş olabilir
•Klonal özelliği incelemek için nazal poliplerde ImmunoSEQ assay
ile T hücre reseptörü değişken β zinciri analizi yapılarak IL17RB+CD4+ ve IL-17RB-CD4 hücreler karşılaştırılmış
•CDR3 bölgelerinin sekanslarında IL-17RB+ hücrelerde az sayıda
klon
•Incelenen 4 hastanın (burada sadece 4 polipli hastadan
alınanlara bakılmış) analizinde IL-17RB+ hücrelerde 2 farklı klon
Vβ5.2 ve Vβ6 ailelerine ait
Normal nazal mukozal immunolojik homeostaide Th17 hücreleri baskın
Nazal poliplerdeki Th17 hücrelerin azalmış IFNγ ekspresyonu
potansiyel kouruyu homeostatik görevini gösteriyor
•Th17 hücreleri IFNγ ve IL-22 koeksprese edebilir
•IL-17/INFγ double pozitif hücreler patojenik proenflamatuar
özellikte
•Polip dokusunda azalmış IL-17/INFγ
Özet..
• Nazal polipli hastalarda ILC2 hücreler ve Th2 hücrelerin varlığı daha
önce çalışmalarla gösterilmiş
• Fakat lokal T hücre cevabı hala netleşmemiş
• Bu çalışmada
• Poliplerde yüksek miktarda IL-17RB eksprese eden Th2 hücresi
(Polip CD4+ IL-5+ IL-13+ hücrelerin %50sinde IL-17RB+)
IL-17RB + hücreler bir Th2 hücre alt grubu mu?
Bu çalışma ilk defa direkt bağlantı kuruyor
• IL-17RB+CD4+ hücrelerde ST2 reseptör mRNA ekspresyonu
• Ve bu hücreler IL-25 ve IL-33 3 cevap vermekte (IL-5 ve IL-13
salgılanmasının uyarılması)
• Normal nazal mukozadaki Th cevabı periferle kıyaslandığında Th17
yönünde bulunmuş . Bunu diğer Th hücre fenotipleri ile
kıyaslamamışlar fakat 5 en fazla eksprese edilen genler yüksek
ölçüde Th17 ilişkili
• IL-17RB ve ST2 reseptörlerinin nazal poliplerdeki belirgin
koekspresyonu ileride teröpetik hedef olarak kullanılabilir…