FAST-BRCA® Sequencing Kit BRCA 1/2 DNA Analiz Paneli

FAST-BRCA® Sequencing Kit
BRCA 1/2 DNA Analiz Paneli
Dizi Analizi Amaçlı Kullanım İçin
KULLANIM KILAVUZU
İÇİNDEKİLER
1
GİRİŞ .................................................................................................. 3
2
KİT İÇERİĞİ ......................................................................................... 3
3
SAKLAMA ............................................................................................. 3
4
GEREKLİ MATERYAL VE CİHAZLAR .......................................................... 3
5
ÖNEMLİ NOTLAR VE GÜVENLİKLE İLGİLİ UYARILAR .................................. 4
6
YÖNTEM .............................................................................................. 5
6.1
REAKSİYON MİX HAZIRLANMASI ....................................................... 5
6.2
PCR AŞAMASI ................................................................................. 6
7
KULLANIM KISITLAMALARI .................................................................... 6
8
OLUMSUZ ETKILI MADDELER ................................................................. 6
SEMBOLLER ............................................................................................... 7
1
GİRİŞ
BRCA1 ve BRCA2 tümör baskılayıcı proteinleri üreten genlerdir. Bu proteinler
DNA hasarlarının onarımına yardımcı olurlar ve aynı zamanda hücrenin genetik
materyalinin istikrarının sağlanmasında rol oynarlar. BRCA1 ve BRCA2 genlerindeki
belirli kalıtsal mutasyonlar kadınlarda meme ve yumurtalık kanserlerinin ve çeşitli
başka kanser türlerinin riskini arttırabilir. BRCA1 ve BRCA2 gen mutasyonları
kalıtsal göğüs kanserlerinin yaklaşık yüzde 20-25'inde ve tüm meme kanserlerinin
ise yaklaşık yüzde 5-10'unda görülmektedir.
FAST-BRCA
Sequencing
Kit,
kan
veya
dokudan
izole
edilen
DNA
moleküllerinden BRCA 1 ve BRCA 2 genleri üzerinde meydana gelen mutasyonları
araştırmak için oluşturulmuş Yeni Nesil Dizileme (Next-Generation Sequencing NGS) sistemleri ile son derece uyumlu olarak çalışan bir kittir.
2
KİT İÇERİĞİ
FAST-BRCA Sequencing Kit PCR Paneli (50 Reaksiyon)
3
FAST-BRCA PCR Mix
1.9 ml
FAST-BRCA Primer Mix I
125 µl
FAST-BRCA Primer Mix II
125 µl
FAST-BRCA Primer Mix III
125 µl
FAST-CFTR Primer Mix IV
125 µl
FAST-CFTR Primer Mix V
125 µl
FAST-CFTR Primer Mix VI
125 µl
SAKLAMA
Tüm bileşenler -20°C’de saklanmalıdır. Bileşenler PCR hazırlanırken oda
sıcaklığında 10-15 dakikadan fazla bırakılmamalıdır.
Bileşenler uygun koşullarda saklanmaları halinde, etiketlerin üzerindeki son
kullanma tarihlerine dek stabilitelerini korurlar.
4
GEREKLİ MATERYAL VE CİHAZLAR

Agarose jel görüntüleme sistemi
5

DNA izolasyon Kiti

ABI Dizileme Cihazı ve aksesuarları

Sequencing Buffer

Spektrofotometre

0.2 ml ince çeperli PCR tüpleri ya da stripler

Derin dondurucu (-20°C)

Vortex karıştırıcı

PCR Cihazı

2 ml. Mikrosantrifüj tüpleri için rotoru bulunan tezgah üstü santrifüj

Ayarlanabilir mikropipetler

Steril, filtreli mikropipet uçları

Steril 1.5 veya 2 ml. mikrosantrifüj tüpleri

Atılabilir eldiven
ÖNEMLİ NOTLAR VE GÜVENLİKLE İLGİLİ UYARILAR
Dikkat!:

Ürün soğuk zincir altında teslim edilmelidir. Teslim alırken ambalajın soğuk
zincir kurallarına uygun olup olmadığını kontrol ediniz ve size bu şekilde
ulaştırılmayan ürünleri kullanmayınız.

Ürünü teslim alırken kutu etiketlerinin üzerindeki son kullanma tarihlerini
kontrol
ediniz.
Son
kullanma
tarihi
geçmiş
ürün
veya
bileşenleri
kullanmayınız.
Ürünün kullanımı esnasında aşağıda belirtilen noktalara dikkat edilmelidir:

Steril, filtreli mikropipet uçları ve steril mikrosantrifüj tüpleri kullanılmalıdır.

Çalışmaya başlanmadan önce tüm bileşenler oda sıcaklığına getirilmelidir.
Kullanılmadan önce içeriklerinin homojen hale gelmesini sağlamak için, tüm
bileşenler çözdürüldükten sonra karıştırılmalı ve kısaca santrifüjlenmelidir.

Kit bileşenleri reaksiyon hazırlanana dek buz ya da soğutucu blok üzerinde
tutulmalı, ve kullanımın ardından hemen -20ºC’ye kaldırılmalıdır.

PCR ve nükleik asit izolasyonu farklı kompartmanlarda/yerlerde/bölümlerde
yapılmalıdır. Örnekler, kit bileşenleriyle temas etmemeleri için ayrı bir yerde
muhafaza edilmelidir.
Herhangi bir risk durumu oluşturmaması içinaşağıda belirtilen güvenlik
talimatlarına uyulmalıdır:

Klinik örneklerle çalışılırken çok dikkatli olunmalıdır: Örneklerle fiziksel
temastan kaçınılmalıdır; laboratuvar önlüğü ve eldiven giyilmeli, çalışma
alanında yeme ve içmeye izin verilmemeli, görevli olmayan kimselerin
çalışma alanına girişi engellenmelidir.

Nükleik asit izolasyonu aşamasında oluşan atıklar, tıbbi atığa atılmalı ve
güvenli bir biçimde uzaklaştırılmalıdır.

Daha detaylı bilgi için www.multigen.com.tr adresindeki güvenlik bilgi
formuna bakabilirsiniz.
6
YÖNTEM
6.1 REAKSİYON MİX HAZIRLANMASI
Aşağıdaki
tabloda
verilen
hacimlerde
PCR
bileşenleri
her
35
µl
PCR
reaksiyonunda 5µl DNA örneği olacak şekilde hesaplanmıştır. Pipetleme hatalarına
karşı hazırlanan PCR mix bir ya da iki reaksiyon fazladan hazırlanabilir. Bütün
bileşenler kullanılmadan önce vortekslenmelidir.
Tablo 6.1 Reaksiyon Mix İçeriği
Bileşen
Miktar
FAST-BRCA PCR Mix
25 µl
FAST-BRCA Primer Mix
5 µl
DNA Örneği
5 µl
Reaksiyon Mix Toplamı
35 µl
6.2 PCR AŞAMASI
Tablo 6.2 PCR Termal Profili.
Sıcaklık Süre
98 ˚C
10 dk
95 ˚C
45 sn
60 ˚C
45 sn
68 ˚C
120 sn
72 ˚C
10 sn
4 ˚C
∞
Başlangıç
denatürasyonu
32 döngü
Ramp: 1,3°C/sn
7
KULLANIM KISITLAMALARI



8
Tüm bileşenler vücut dışında tanı amaçlı olarak kullanılabilir.
Bu ürün, bu kullanım kılavuzu uyarınca kullanılmalıdır.
Bu ürün özel olarak vücut dışında tanı amaçlı prosedürleri uygulama
konusunda eğitim almış personel tarafından kullanılmalıdır .
OLUMSUZ ETKILI MADDELER

Heparin ya da EDTA gibi antikoagülanlar içeren tüplere toplanmış
örnekler,

Hemolitik örnekler,

Heparinize olmuş hasta örnekleri,

Yüksek düzeyde safra tuzları, bilirubin ya da kan yağları içeren hastaların
örnekleri
kullanılmamalıdır.
9
SEMBOLLER
SEMBOL
AÇIKLAMA
Son Kullanma Tarihi
Lot Numarası
Katalog Numarası
Sıcaklık Sınırlaması
Üretici
Üretim Yılı
Vücut Dışında Kullanılan
Tıbbi Tanı Cihazı
Avrupaya Uygunluk
Test Sayısı
MULTİGEN Sağlık Hizmetleri Ltd. Şti.
ideEGE Teknoloji Geliştirme Bölgesi TGB-2 Alanı, Mercan Konteyner Park,
No:172/70 D (Ofis No: 7) Erzene Mahallesi, Ankara Caddesi, Ege Üniversitesi
Kampüsü, 35100, Bornova / İZMİR
Tel: +90 232 373 73 38
Web: www.multigen.com.tr