Proje No: 104 O 327 Batı Akdeniz Bölgesindeki Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. Türlerinin Kültüre Alınması, Süs Bitkileri Sektörüne Kazandırılması ve Moleküler Karakterizasyonu Dr. Özgül KARAGÜZEL Ayşe Serpil KAYA Köksal AYDINŞAKİR Dr. Nedim MUTLU Prof. Dr. İbrahim BAKTIR Prof. Dr. Osman KARAGÜZEL Yrd. Doç. Dr. Ramazan GÖKTÜRK Yrd. Doç .Dr. Soner KAZAZ Şubat 2009 ANTALYA ÖNSÖZ Türkiye, önemli olan çok sayıda bitkinin gen merkezi olmasına karşın, bu bitkilerin korunması ve değerlendirilmesine yönelik yapılmış çalışmalar yetersiz kalmaktadır. Bu çalışmada yurt dışında süs bitkisi olarak farklı amaçlarla kullanım potansiyeli olan doğal Leucojum aestivum ve Ornithogalum türlerinin süs bitkileri sektörümüzde kullanım olanaklarına ilişkin sonuçlar elde edilmeye çalışılmıştır. Projenin gerçekleştirilmesindeki desteklerinden dolayı TÜBİTAK’a ve Batı Akdeniz Tarımsal Araştırma Enstitüsü Müdürlüğüne, projede danışman olarak değerli bilgilerinden yararlandığım Prof. Dr. İbrahim BAKTIR ve Prof. Dr. Osman KARAGÜZEL hocalarıma, projede yardımcı araştırıcı olarak yer alan ve projenin farklı aşamalarında büyük desteklerini gördüğüm değerli araştırmacı arkadaşlarıma, projede yer almamasına karşın in vitro çalışmalarımda bizzat benimle çalışan ve büyük katkısı olan değerli çalışma arkadaşım Dr. Beyza BİNER’e, arazi çalışmalarımda büyük yardımlarını gördüğüm bölüm arkadaşım Dr. Saadet TUĞRUL AY ve bölümümüz teknikeri Bayram KOLAK’a, yine in vitro çalışmalarımdaki yardımlarından dolayı Dr. Banu DAL’a, melezleme çalışmalarındaki yardım ve katkılarından dolayı Zir. Yük. Müh. Rana ERTOK’a , projenin yetiştirme tekniği kısmında bitki besinleri konusunda öneride bulunarak projeye yön veren Dr. Cevdet Fehmi ÖZKAN ve toprak analizlerinin yapılmasındaki katkılarından dolayı enstitümüz toprak bölümündeki diğer araştırıcılara şahsım adına teşekkür ederim. Dr. Özgül KARAGÜZEL II İÇİNDEKİLER Sayfa No ÖNSÖZ.................................................................................................................….II İÇİNDEKİLER.......................................................................................................….III TABLOLAR DİZİNİ ..............................................................................................….VI ŞEKİLLER DİZİNİ ................................................................................................ .VIII ÖZET ....................................................................................................................….XI ABSTRACT..........................................................................................................….XII 1. GİRİŞ................................................................................................................…..1 2. GENEL BİLGİLER ...........................................................................................…..3 2.1.Ornithogalum’ların Bitki Sistematiği, Botanik Sınıflandırması, Taksonomisi ve Palinolojisi ile İlgili Yapılmış Çalışmalar………………………....3 2.2. Ornithogalum’ların Kullanım Alanları ile İlgili Yapılmış Çalışmalar………....4 2.3. Ornithogalum’ların Vegetatif ve Generatif Periyodu ile İlgili Çalışmalar…...5 2.4. Ornithogalumların Çoğaltılması ile İlgili Çalışmalar ……………………..…….7 2.5. Ornithogalumlarda Bitki Büyüme Düzenleyicilerinin Kullanımıyla İlgili Yapılmış Çalışmalar………………………………………………………………...10 2.6. Ornithogalumların Islahı ile İlgili Yapılmış Çalışmalar ………………..………11 2.7. Ornithogalumların Kültürel İşlemleriyle İlgili Çalışmalar……………………..13 2.8. Leucojum aestivum’un Bitki Sistematiği ve Botaniği İle İlgili Yapılmış Çalışmalar……………………………………………………………………....13 2.9.Leucojum aestivum’un Kullanım Alanları İle İlgili Çalışmalar………………..14 2.10. Leucojum aestivum’un Vegetatif ve Generatif Periyodu İle İlgili Yapılmış Çalışmalar………………………………………………………………….…...15 2.11. Leucojum aestivum’un Çoğaltılması İle İlgili Yapılmış Çalışmalar……......15 2.12. Leucojum aestivum’da Bitki Büyüme Düzenleyicilerinin Kullanımı İle İlgili Yapılmış Çalışmalar………………………………………………………………...17 2.13. Leucojum aestivum’un Kültürel İşlemleri İle İlgili Yapılmış Çalışmalar …17 3. GEREÇ ve YÖNTEM .......................................................................................…18 3.1. Gereç ............................................................................................................…18 III 3.1.1.Deneme Yeri...............................................................................................…18 3.1.2. Deneme Alanının İklim Özellikleri............................................................…18 3.1.3. Türlerin Doğal Populasyonlarının ve Deneme Alanının Toprak Özellikleri …………………………………………………………………………………..21 3.1.4. Bitkisel Materyal ............................................................................................23 3.2. Yöntem ..............................................................................................................23 3.2.1. Bitki Sistematiğine Yönelik Çalışmalar…………………………………….….23 3.2.2. Lokasyon, Tür ve Doğal Populasyonların Tespiti ile Kullanım Amaçlarına Göre Seleksiyonu………………………………………………………….23 3.2.3.Seçilen Türlerde Kültüre Alma Çalışmaları…………………………………...24 3.2.3.1. Çoğaltım Çalışmaları………………………………………………….………..24 3.2.3.1.1. Arazi Şartlarında Çoğaltım………………………………………………….24 3.2.3.1.1.1. Generatif Çoğaltım………………………………………………………....24 3.2.3.1.1.2.Vegetatif Çoğaltım…………………………………………………………..24 3.2.3.1.2. İn Vitro Çoğaltım………………….…………………………………………..25 3.2.3.2. Yetiştirme Tekniğine Yönelik Çalışmalar……………………………….…..27 3.2.3.1. Cam Serada Topraksız Ortamda Değişik Nem Düzeylerinde Yetiştirilen Türlerde Erken Dikim Geç Hasat ve Gübrelemenin İhracat Boyutundaki Soğan Gelişimine Etkileri İleİlgili Çalışmalar……….…….27 3.2.4. Varyasyon Oluşturma Çalışmaları………………………………………..…...30 3.2.4.1.Kolhisin İle Muamele………………….………………………………….….....30 3.2.4.2. Melezleme Çalışmaları………………………………………………………...31 3.2.5. Moleküler Markırlarla Genetik Uzaklıkların Belirlenmesi……………..…..32 3.2.5.1. DNA izolasyonu………………………………………………………………..32 3.2.5.2. DNA Amplifikasyonu………………………………………………………….33 3.2.5.3. Veri Analizleri………………………………………………………………..…35 4. BULGULAR .......................................................................................................35 4.1. Bitki Sistematiği ile İlgili Bulgular……………………………………………….35 4.2. Lokasyon,Tür ve Doğal Populasyonların Tespiti ile Kullanım Amaçlarına Göre Seleksiyonu ile İlgili Bulgular…..…….…………………………35 4.3. Seçilen Türlerde Kültüre Alma Çalışmaları İle İlgili Bulgular 4.3.1. Çoğaltım Çalışmaları İle İlgili Bulgular …………………………………...…42 4.3.1.1. Arazi Şartlarında Çoğaltım İle İlgili Bulgular ………………..……….......42 IV 4.3.1.1.1. Generatif Çoğaltım İle İlgili Bulgular …………………………………....42 4.3.1.1.2. Vegetatif Çoğaltım İle İlgili Bulgular…………………………………….46 4.3.1.1.3. İn Vitro Çoğaltım İle İlgili Bulgular………………………………………52 4.4 Yetiştirme Tekniğine Yönelik Çalışmalar ile İlgili Bulgular………………...63 4.4.1. Cam Serada Topraksız Ortamda Değişik Nem Düzeylerinde Yetiştirilen Türlerde Erken Dikim Geç Hasat ve Gübrelemenin İhracat Boyutundaki Soğan Gelişimine Etkileri İle İlgili Çalışmalar ile İlgili Bulgular…………………………………………………………………….….63 4.5. Varyasyon Oluşturma Çalışmaları ile İlgili Bulgular…………………….…70 4.5.1. Kolhisin İle Muamele Bulguları……………………………………………...70 4.5.2. Melezleme Çalışmaları ile İlgili Bulgular…………………………………..72 4.6. Moleküler Markırlarla Genetik Uzaklıkların Belirlenmesi ile İlgili Bulgular………………………………………………………………………………...77 5. TARTIŞMA VE SONUÇ……………………………………………………………82 6. REFERANSLAR……………………………………………………………………86 V TABLOLAR DİZİNİ Sayfa No Tablo 3.1. Türlerin doğal ortamlarındaki toprakların bazı özellikleri ve besin elementi düzeyleri…………………………………………………………………22 Tablo 3.2. Türlerin yetiştirme alanındaki yetiştirme ortamının (torf:perlit) bazı özellikleri ve besin elementi düzeyleri…………………………………………...22 Tablo 3.3. Murashige ve Skoog (1962) temel ortamın mineral madde içerikleri…..26 Tablo 3.4. Yetiştirme alanları denemesinde uygulanmış gübreler ve miktarları…..29 Tablo 3.5. DNA’larına bakılan türler …………………………………………………...32 Tablo 3.6. Değişik markır sistemleri için kullanılan PCR master mix içerikleri, volumetrik ve konsantrasyon olarak miktarları…………………………...33 Tablo 3.7. Markır sistemleri SRAP, RAPD, ISSR, ve RGA için haritalamada kullanılan PCR koşulları………………………………………………………………..34 Tablo 4.8. Ornithogalum cinsi ve Leucojum aestivum türlerinde yapılan arazi çalışmaları……………………………………………………………………………….35 Tablo 4.9.Türlerin doğal populasyondaki özellikleri…………………………………36 Tablo 4.10. Çalışılan türlerin tohumlarının çimlenme özellikleri............................42 Tablo 4.11. Leucojum aestivum türünde 1. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri………………………………...47 Tablo 4.12. Leucojum aestivum türünde 2. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri……………………………….48 Tablo 4.13. Ornithogalum montanum türünde 1. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri………………………………..49 Tablo 4.14. Ornithogalum umbellatum türünde 2. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri……………………..50 Tablo 4.15. Farklı Ornithogalum türlerinin 4 pul eksplantından in vitro çoğaltım ile elde edilen ortalama soğan sayıları (adet)……………………………………….61 Tablo 4.16. Cam serada topraksız ortamda yetiştirilen türlerin yaprak oluşum tarihleri…………………………………………………………………………..….…..64 Tablo 4.17. Cam serada topraksız ortamda yetiştirilen türlerin çiçeklenme özellikleri …………………………………………………………………………………64 Tablo 4.18. Türlerin ortalama çiçek sapı uzunlukları ve bitki başına çiçekçik sayıları……………………………………………………………………………………65 VI Sayfa No Tablo 4.19. Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının türlerin soğan çaplarına etkileri (cm)…………………………………………………………..…..….66 Tablo 4.20. Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının türlerin soğan ağırlıklarına etkileri (g)…………………………………………………………67 Tablo 4.21. Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının hasat edilen soğan sayısına etkileri (adet/parsel)……………………………………………….…68 Tablo 4.22 . Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının yavru soğan sayısına (adet) ve yavru soğan ağırlığına etkileri (g)………………………………69 Tablo 4.23. Kolhisin uygulamasının türlerin yaprak çapına (cm) etkileri …….…..71 Tablo 4.24. Kolhisin uygulanan. türlere ait çiçek sapı uzunlukları (cm)…………..71 Tablo 4.25. Colchicine uygulanan. türlere ait çiçeklenme tarihleri (gün)…………71 Tablo 4.26. Elde edilen bant sayıları………………………………………………...77 VII ŞEKİLLER DİZİNİ Sayfa No Şekil 3.1. Araştırma yerindeki sıcaklık ve nem değerlerinin alındığı hobo veri cihazının görünümü…………………. ………………………………………..18 Şekil 3. 2. Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen sera içi ortalama sıcaklık değerleri……………………………………………………………………………19 Şekil 3.3 . Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen sera içi ortalama nem değerleri……………………………………………………………………………………..20 Şekil 3.4. Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen açık alan ortalama sıcaklık değerleri……………………………………………………………………….......20 Şekil 3.5. Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen açık alan ortalama nem değerleri………………………………………………………………………….........21 Şekil3. 6 . Doğal ortamlardan söküldükten sonra cam serada topraksız ortamda kültüre alınan Leucojum aestivum ve Ornithogalum türleri…………………………...28 Şekil3. 7. (a)Su ile topraklarından arındırılan soğanlar (b) Dikim öncesi koruyucu ilaçlama yapılan soğanlar……………………………………………………………….…29 Şekil 4.8. Ornithogalum türlerinin çiçeklenme dönemindeki durumları…………….…39 Şekil 4.9. O. pyrenaicum türü ve O.sümbülianum türünde çimlenmiş tohumlar……43 Şekil 4.10. O. nutans türü ve O.armeniacum türünde çimlenmiş tohumlar……….43 Şekil 4. 11. O. montanum türünde çimlenmiş tohumlar………………………..………44 Şekil 4.12. O. pyrenaicum türünün tohumlarından 1. yıl sonunda oluşan soğancıkların görünümü…………………………………………………………………...44 Şekil 4.13 . O.sümbülianum türünün tohumlarından oluşan soğancıkların görünümü ……………………………………………………………………………...…..45 Şekil 4.14. O.lanceolatum türünün tohumlarından oluşan soğancıkların görünümü Şekil 4.15. Bölme Yöntemleri………………………………………………………..…...46 Şekil 4.16. (a) Ornithogalum umbellatum ve (b) Ornithogalum montanum….......46 Şekil 4.17. Leucojum aestivum türünde yapılan çoğaltım yöntemleri………….........47 Şekil 4.18.a,b,c,d,e,f. Leucojum aestivum türüne uygulanan çoğaltım yöntemlerinden elde edilen yavru soğanların görünümleri…………………………….49 Şekil 4.19. Ornithogalum montanum türüne uygulanan tüm çoğaltım yöntemlerinden elde edilen yavru soğanların görünümleri……………………..…….50 VIII Sayfa No Şekil 4.20 a,b,c. Ornithogalum umbellatum türüne uygulanan çoğaltım yöntemlerinden elde edilen yavru soğanların görünümleri……………………...........51 Şekil 4.21. Sterilizasyonu başarılan kültür ortamındaki eksplantlar………………...52 Şekil 4.22. 4 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAA ortamında O. lanceolatum türünün tohumundan gelişen soğanlar…………………………………………………………...52 Şekil 4.23. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O.umbellatum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………….53 Şekil 4.24. 4 mg/l BAP+0.5 mg/lNAA ortamında O.umbellatum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………....53 Şekil 4.25. 1 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAA ortamında O. oligophyllum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar………………………………………………….......54 Şekil 4.26. 4 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAA ortamında O. oligophyllum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………...54 Şekil 4.27. 1 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAA ortamında O. oligophyllum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………..55 Şekil 4.28. 1 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAAA ortamında O. sigmoideum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar………………………………………………….….55 Şekil 4.29. 2 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAAA ortamında O. sigmoideum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar…………………………………………………..…56 Şekil 4.30. 1 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAAA ortamında O. sigmoideum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar…………………………………………………..…56 Şekil 4.31. 2 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. narborense türünün eksplantlarından oluşan soğanlar………………………………………………….…57 Şekil 4. 32. 4 mg/l BAP+0.25 mg/l NAA ortamında O. narborense türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………57 Şekil 4.33. 1 mg/l BAP+0. 5 mg/l NAA ortamında O. narborense türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………58 Şekil 4. 34. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. sümbülianum türünün 4 pul yapraklı eksplantlarından oluşan soğanlar………………………………….58 Şekil 4.35. 1 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAA ortamında O. pyrenaicum türünün 4 pul yapraklı eksplantlarından oluşan soğanlar…………………………………..59 IX Şekil 4.36. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. lanceolatum türünün 4 pul yapraklı eksplantlarından oluşan soğanlar………………………………..……59 Şekil 4.37. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. montanum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar………………………………………………….….60 Şekil 4.38. 1 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. lanceolatum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar……………………………………………………...61 Şekil 4.39. 1 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O.isauricum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar…………………………………………………….62 Şekil 4.40. a, b,c,d.. Steril soğanların steril yetiştirme ortamına aktarılması.….....62 Şekil 4.41.Cam serada topraksız ortamda farklı sulama düzeylerinde yetiştirilen türlerin görünümleri…………………………………………………...…..63 Şekil 4.42 .Türlerin çiçeklenme durumları……………………………………………65 Şekil 4.43. Kolhisin uygulaması yapılan bitkilerden genel görünüm………...…...70 Şekil 4. 44. O. montanum’da emaskulasyon işlemi…………………………………73 Şekil 4.45. O. pyrenaicum’da türler arası melezleme işlemi……………..…….….74 Şekil 4. 46. O. pyrenaicum’da melezleme sonrası izolasyon işlemi…………..…74 Şekil 4. 47. Leucojum aestivum türünde emaskülasyon işlemi………………..…..74 Şekil 4.48. Leucojum aestivum’da türler arası melezleme işlemi………..……....75 Şekil. 4.49. Leucojum aestivum’da melezleme sonrası izolasyon işlemi…….….75 Şekil 4.50. O. umbellatum X O. nutans ve O. umbellatum X O. lanceolatum melezlemeleri…………………………………………………………………………..76 Şekil 4.51. O. umbellatum’da emaskulasyon işlemi……………………………....76 Şekil 4.52. O. narborense X O. pyrenaicum melezlemesinden elde edilen tohumlar………………………………………………………………………………..77 Şekil 4.53 DNA bantlarının görünümü……………………………………………78 Şekil 4.54. Ornithogalum genotiplerine ait dendogram………………………...79 Şekil 4. 55. Ornithogalum türleri arasındaki temel bileşenler analizinden (PCA) elde edilen genotiplerin iki boyutlu düzlem üzerinde dağılımı……………80 Şekil 4. 56. Ornithogalum türleri arasındaki temel bileşenler analizinden (PCA) elde edilen üç boyutlu düzlem üzerinde genotiplerin dağılımı…………....81 Şekil 5.57. Koleksiyon bahçesine aktarılan Leucojum aestivum ve Ornithogalum türleri…………………………………………………………………...85 X Batı Akdeniz Bölgesindeki Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. Türlerinin Kültüre Alınması, Süs Bitkileri Sektörüne Kazandırılması ve Moleküler Karakterizasyonu ÖZET Bu çalışmada, doğadan sökülerek ihraç edilen, ancak üretimlerindeki yetersizlik nedeniyle kontenjan uygulanan doğal çiçek soğanlarından Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. türlerinin doğadaki mevcut durumlarının tespiti ve veri tabanının oluşturulması, üretim ve yetiştirme tekniklerinin geliştirilmesi, aynı zamanda çeşitli varyasyon oluşturma ve moleküler karakterizasyon çalışmalarıyla gelecekte bu konuda yapılacak diğer ıslah çalışmalarına temel teşkil etmesi ve gen havuzu oluşturulması hedeflenmiştir. Araştırmada, seçilen türlerin lokasyonları, doğal populasyonların tespiti, tür teşhisleri ve kullanım amaçlarına göre seleksiyonları yapıldıktan sonra kültüre alınmalarına yönelik olarak adaptasyon, çoğaltma ve soğan büyütmeye yönelik çalışmalar yürütülmüştür. Türler arasındaki varyasyonu tespit etmeye yönelik olarak moleküler karakterizasyonları ve farklı varyasyonlar oluşturmaya yönelik olarak kolhisin uygulamaları ve melezleme çalışmaları yapılmıştır. Araştırma sonucunda Batı Akdeniz Bölgesindeki Leucojum aestivum türü ile 15 Ornithogalum türünün doğal populasyondaki mevcut durumları ve özellikleri belirlendikten sonra kültürel koşullarda yetiştirildiklerinde ortama iyi uyum sağladıkları, generatif çoğaltımda özellikle Ornithogalum pyrenaicum türünün, in vitro çoğaltım ve vegetatif çoğaltımda ise Ornithogalum umbellatum türünün yüksek çoğaltım kapasitesine sahip olduğu belirlenmiştir. Uygulanan bölme yöntemlerinin yavru soğan oluşturma yönünden önemli etkilere sahip olduğu belirlenmiştir. İn vitro çoğaltımda 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA ve 4 mg/l BAP+ 0,5 mg/l NAA ortamlarından en başarılı sonuçlar elde edilmiştir. Elde edilen soğanlar dış koşullara aktarılmışlardır. Soğan irileştirmeye yönelik yürütülen yetiştirme tekniği çalışmasında tek gübre dozu ve 2 farklı sulama uygulaması (1lt/bitki ve 2 lt/bitki) nın incelenen tüm özellikler açısından önemli bir etkiye sahip olduğu görülmüştür. Türlerde varyasyon oluşturmaya yönelik uygulanan %0.2’lik kolhisin çözeltisinin yaprak özellikleri bakımından önemli etkiler yarattığı, çiçeklenme özellikleri bakımından ise kontrol bitkilerinin ön planda olduğu görülmüştür. Moleküler karakterizasyon çalışmasında ise, O. nutans ve O. alpigenum türlerinin birbirine en yakın türler olduğu, O. pyrenaicum türünün ise diğer türlerden farklı genetik özellik gösterdiği saptanmıştır. Çalışılan türler enstitü bünyesinde kurulan koleksiyon bahçesinde muhafaza altına alınmışlardır. Anahtar Sözcükler: Ornithogalum, Leucojum, Kültüre Alma, Moleküler Karakterizasyon XI Cultivation of wild Leucojum aestivum and Ornithogalum spp. species grown in Western Mediterranean region of Turkey, introduction them to floriculture industry and their molecular characterization ABSTRACT In this study, it has been aimed to determination of present situation and forming database, improvement of cultivation techniques, concurently, forming various variation and molecular characterization to form base for further breeding studies and forming gen pool of Leucojum aestivum and Ornithogalum spp. species having been exported by demounting from natural habitats, due to production insufficiency neverthless, and natural flower bulbs on which quota applied. Studies were conducted to determine location of selected species, natural population, species identification and adaptation after selection intended for cultivation of individualls convinient to use goal, proliferation and bulbs growth in these investigations. Colchicine applications, crossbreeding, molecular characterizations studies were done in order to determine variations within species. At the end of investigation, generative high proliferation capacity particularly of Ornithogalum pyrenaicum species and proliferation in vitro conditions and vegetative high proliferation of Ornithogalum umbellatum was determined after determination of present sittuation in natural population and their properties, well adaptation to present conditions after growing in cultural conditions of Leucojum aestivum species in West Mediteranean region along with 15 Ornithogalum species. Significant effects of applied splitting methods on young bulbs formation were assessed. Succesfull results were obtained by 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA ve 4 mg/l BAP+ 0,5 mg/l NAA mediums in vitro proliferations. The bulbs obtained were transplanted to outer conditions. The effect of one dose fertilizer and two different irrigation (1l per plant and 2 l/ per plant) was shown in cultivation studies intended for bulbs hypertrophy. The significant effects resulted from 0.2% colchicine solution intended for forming variation within species in view of leaf and the prominent situation of control plants in terms of blossom properties were observed. O. nutans ve O. alpigenum was the closest species, O. Pyrenaicum showed different genetic properties from the other speicies in molecular characterization studies. Species studied on were preserved in collection field founded in institute. Key words: Ornithogalum, Leucojum, growth for cultivation, molecular characterization XII 1. GİRİŞ Dünya üzerinde, çok geniş yayılış alanına sahip olan çiçek soğanlarının, özellikle Balkanlar, Kafkasya ve Anadolu’da yoğunlaştığı bilinmektedir. Bu bitkiler yüzyıllardır tıbbi amaçlarla kullanılmasına karşın, kış aylarında çiçeklenmeleri nedeniyle geniş ölçüde bahçelerde süs bitkisi olarak da kullanılmaktadır. Dünyada yaklaşık 43.000 hektarlık bir alanda çiçek soğanları üretimi yapılmaktadır. Üretim alanlarının dağılımına bakıldığında en fazla üretimin Hollanda (% 53,5) da olduğu ve yine çiçek soğanı ihracatı yapan en önemli ülkenin de Hollanda olup dünya ihracatının % 80,4’ünü gerçekleştirdiği görülmektedir. Çiçek soğanlarının toplam küresel ihracat değeri ise 1,1 milyar ABD dolarıdır (AİB, 2008). Doğal çiçek soğanları yönünden ülkemiz doğası da zengin bir çeşitliliğe sahiptir. Floramızdaki yaklaşık 700 civarındaki doğal çiçek soğanı (geofit) türünden (Koyuncu, 2007) 162 tanesi endemiktir. Bunların büyük çoğunluğu Toros dağları, Batı Anadolu ve Kuzeydoğu Anadolu bölgelerinde yayılım göstermektedir . Doğal çiçek soğanı ticaretinin ağırlık kazanmaya başladığı 1960’lı yılların sonuna doğru doğadan her yıl artan miktardaki sökümler,1970’li yılların sonları ile 1980’li yılların başlarında tahribat derecesine ulaşmıştır. Doğadan çok fazla bitki sökülmesi, kaynakların bilinçsizce ve aşırı şekilde tüketimi adeta bitki katliamına dönüşmüş, bu yüzden yayılış alanları daralmış, ancak sınırlı alanlara lokalize olmuş ve bir kısmının nesli tükenme sınırına gelmiştir. Önceleri herhangi bir sınırlama getirilmeksizin ticareti desteklenen geofitlerin, daha sonra süs bitkileri sektöründeki gelişmeler, çevre bilincinin gelişmesi ile korunmaları ve kontrollü olarak dışsatımları için yönetmelik ve tebliğler hazırlanmasına yol açmıştır. Yönetmeliklerle getirilen doğadan toplama kısıtlamalarına rağmen kaçak sökümler nedeniyle halen bazı türlerde tehlike devam etmektedir. Bu nedenle doğal çiçek soğanlarımızı korumak, gelecek nesillere aktarmak, gerekli tedbirleri almak ancak doğal dengenin bozulmasına neden olmadan doğal kökenli çiçek soğanlarının üretimi ve yapılacak detaylı araştırma çalışmaları ile mümkündür. Zaten son yıllarda doğal çiçek soğanlarının kültüre alınarak çoğaltılması önemli bir politika olarak görülmekte, dünyanın birçok ülkesinde öncelikli araştırma konuları arasında yer almaktadır. Avustrulya’da son yirmi yılda süs bitkileri araştırmalarının büyük bir bölümü doğal türlerin kültüre alınması üzerine yoğunlaşmıştır (Karagüzel, 2007). Ülkemizde gerek yetkili kurumlar gerekse Tarım Bakanlığı tarafından doğadan söküm, sınırlandırılmasına karşın kültüre alınarak çoğaltılmış olan çiçek soğanlarında dışsatım serbest bırakılarak özendirilmektedir. Bu nedenle ekonomik koşulları ve gelir kaynakları sınırlı olan dağ köylerinde bu biçimde bir üretim, halka yeni bir gelir kaynağı sağlayıcı bir tarım şekli olarak umut vermektedir. Tarım ve Köyişleri Bakanlığının "Doğal Çiçek Soğanlarının 2009 Yılı İhracat Listesi Hakkındaki Tebliği" ne göre Leucojum aestivum’un üretim alanları dışında, Sakarya ili Karasu ve Kaynarca ilçelerinden soğan sökümü ve yaprak hasadı yapılması yasaklanmış, ancak ilgili kurum ve kuruluşlardan gerekli izinlerin alınması durumunda doğal alanlardan göl soğanı yaprağı hasadı yapılmasına izin verilmiştir. 2004-2005 sezonu itibariyle Türkiye’de doğal çiçek soğanlarının üretim alanı 226 hektara ulaşmış ve toplam süs bitkileri üretiminin % 6’sını oluşturmuştur 2007 yılı doğal çiçek soğanı ihracat miktarımız ise 2.917.702 FOB $’dır (AİB, 2008). Ülkemiz süs bitkileri sektöründe üretim materyalinde dışa bağımlı olunması, tescilli hiçbir süs bitkisi çeşidimizin bulunmaması, yine sektörde ilk sırada yer alan kesme çiçeklerin ihracatta tek ürün ve tek pazara bağımlı bir yapı göstermesi de yeni çeşitlerin geliştirilmesi gerekliliğini göstermektedir. Süs bitkileri sektöründe istenen bu çeşitlilik doğal türlerin değerlendirilmeleri gerekliliğini daha önemli kılmaktadır. Ülkemizin geniş doğal zenginliğine karşın doğal türlerin süs bitkisi olarak değerlendirilmelerine yönelik yapılan çalışmaların yeterli olduğu söylenemez. İhracatı yapılan yaklaşık 20 çiçek soğanı türünden ilk 5’te yer alan Leucojum aestivum türü ve Ornithogalum spp türü ile ilgili de kültüre alınmaları konusunda detaylı bir çalışma bulunmamaktadır. Yukarıda verilen bilgiler doğrultusunda bu çalışmanın amacını sözü edilen türlerin hem korunmaları hem de sürdürülebilirlik ve kullanılabilirliklerinin sağlanmasına yönelik çoğaltım, yetiştirme özelliklerinin belirlenmesi ve ıslaha yönelik temel verilerin elde edilmesi oluşturmuştur. 2 2. GENEL BİLGİLER 2.1. Ornithogalum’ların Bitki Sistematiği, Botanik Sınıflandırması,Taksonomisi ve Palinolojisi ile İlgili Yapılmış Çalışmalar Ornithogalum cinsi 1986 yılına kadar Davis tarafından Liliaceae familyası içerisinde tanımlanmasına karşılık, daha sonra Hyacinthaceae familyasına ait olduğu kabul edilmiştir (Şabudak, 1999). Dünya üzerinde iki ana yayılış alanına sahip olup (birincisi Güney Afrika, ikincisi Güney Avrupa, Kuzey Afrika ve Akdeniz’dir) 150 civarında tür içermektedir (Petanidou ve Vujic, 2007). Ülkemizde ise toplam 44 tür ile temsil edilmekte olup bunların da 17 tanesi endemiktir Antalya ilindeki mevcut 18 Ornithogalum türünden 5 i endemiktir (Davis, 1984; Ekim ve ark., 2000, Düşen ve Deniz, 2005 ; Uysal ve ark., 2005). Türlerin çoğu beyaz çiçekli olup Güney Afrika’nın güney batısında doğal olarak yetişen Ornithogalum dubium gibi turuncu ve birkaç sarı renkli türü de mevcuttur. Türkçe adı Akyıldız ya da Bethlehem yıldızı olarak geçen Ornithogalum’un farklı türleri, ülkemizin değişik yörelerinde köpek soğanı (Alanya, Antalya), kurt kirişi (Kemah-Erzincan), karga soğanı (Dinar-Afyon), teke sakalı (Burdur), ak baldır (Diyarbakır, Siverek), kurt soğanı, tükrük otu, sakarca, çökülce,yoğurt otu gibi adlarla bilinmektedir (Baytop 1997). Kandemir (1993), Davis’in 1965-1985 yılları arasında Türkiye Florasıyla ilgili yürüttüğü kapsamlı çalışmalarda, Ornithogalum cinsine ait örneklerde tür sınırlarını ve türler arası ilişkileri belirlemede bazı problemlerle karşılaştıklarını belirtilmektedir. Yine aynı araştırıcı, Cullen tarafından 1967 yılında yapılan revizyonlarda Türkiye’den toplanan örneklerde soğan yapısı, tohum kabuğu yapısı ve çimlenme tipleri hakkında yeterli bilgilerin elde edilemediğini, bazı türlerde bazal yaprakların çiçeklenme zamanına kadar kuruyup dökülmesi ve herbaryum örneklerinde bazı morfolojik özelliklerin kaybolması sonucu, türler arası ilişkileri belirlemenin ve tür sınırlarını tesbit etmenin oldukça zor olduğunu bildirmektedir. Kandemir ayrıca, morfolojik özelliklerin türler arasında benzerlik göstermesi, türler arası hibritleşme olasılığı, poliploidi, apomiktik durum ve türün Asya’daki yayılış alanlarında evrimsel açıdan hızlı bir gelişme içinde bulunması gibi faktörlerin de cinse ait taksonomik problemlerin oluşmasına sebep olduğunun değişik bildirmektedir. 3 araştırıcılar tarafından belirtildiğini Karaca ve ark.(2007), Erciyes dağı’nda (Kayseri) doğal olarak yetişen bazı geofit bitkilerin (Liliaceae, İridaceae) polen morfolojisi üzerine yürüttükleri çalışmada Ornithogalum cinsine ait polenlerin, prolat,subprolat şekilli, perforat, perforat-retikulat ekzin süslemeli ve 1-kolpat apertürlü olduğunu belirtmişlerdir. 2.2. Ornithogalum’ların Kullanım Alanları ile İlgili Yapılmış Çalışmalar Ornithogalum türleri günümüzde tıbbi özellikleri bakımından değişik kullanım alanları bulmaktadırlar. Kusturucu, idrar artırıcı, kalbin kasılmasını önleyici ve çalışmasını düzene koyup kuvvetlendirici, iştah açıcı, sinirleri kuvvetlendirici özelliklere sahip olup eski Yunanlılardan beri taze veya pişmiş soğanları çıbanların, sivilcelerin üzerine bağlamak suretiyle kullanılır. Ayrıca urlara, böbrek ve idrar yolları iltihabına, rahim akıntısına karşı da iyi gelmektedirler. Ancak fazla kullanıldıklarında zararlı olduğu ve uzmanına danışılarak kullanılabilecek olan bitkiler olarak da tanımlanmaktadırlar (Asımgil 2003). Bilhassa soğanlarında, kalbe etkili bazı zehirli bileşikler (konvallaksin ve diğer glikozitler) ve saponinler taşıdığı bilinmektedir. Bu nedenle soğanlarının yüksek miktarlarda yenilmesi bazı zararlı etkiler meydana getirebilir (Baytop 1999; Şabudak, 1999; Anonim, 2008 a). Aynı zamanda Ornithogalum’ların bazı türleri (O.comosum L., O.lanceolatum Labill., O.latifolium Baker, O.pyrenaicum L., O.sibthorpii W.Greuter) ekonomik öneme sahip olup, sebze olarak da farklı şekillerde tüketilmektedirler (Baytop 1984). O. oligophyllum ,O. platyphyllum, O. sigmoideum türlerinin yaprak ve gövdelerinin yumurtalı kavurmasının yapıldığı belirtilmektedir (Özbucak ve ark., 2006). Bazılarının kaynatılarak suyu içilir ya da yaprakları kurutulup dövülerek bala karıştırılarak yenir (Anonim, 2008 b). Kurutulmuş soğanları, müsilaj içerdiğinden dondurmaya kıvam verir ve bu nedenle Anadolu’nun bazı bölgelerinde toz haline getirildikten sonra dondurma yapımında, salep yerine de kullanılmaktadırlar. Ülkemizde Ornithogalum türlerinin süs bitkisi olarak değerlendirilmeleri ise sadece Ornithogalum nutans türünün doğadan soğanlarının toplanarak ihraç edilmesiyle olmaktadır. 2007 yılında 150 bin adet O. nutans soğanı doğadan toplanarak ihraç edilmiştir (AİB, 2008). Getirilen yönetmeliklerle doğadan söküm kontrol altında tutulsa da bu türün üretimi henüz yapılmadığından her yıl ihracatçı 4 firmalar tarafından yapılan sökümlerle doğadaki populasyonlar gittikçe azalmakta hatta nesilleri tehlike altına girmektedir. Ornithogalum nutans çoğunlukla Batı, Orta ve Güney Anadolu’da doğal olarak yetişir. Yamaçlar, çayırlıklar, yol kenarları ve tarlalarda deniz seviyesi ile 1950 m arasında bulunur. Dış tarafı yeşil renkle bezeli beyaz çiçekleri ile Ornithogalum türleri arasında en çekici olanıdır. Gövdesi üzerinde çiçek sayıları 3-12 arasında değişir. Mart- Mayıs aylarında çiçek açar. Gölgeli, iyi drene olmuş, kumlu ve organik maddeler açısından zengin toprakları sever. pH:6.0-7.0 olmasını ister. Özellikle yapraklarının gelişimi sırasında neme ihtiyaç duyar. O.nutans için en uygun çoğaltma yöntemi yavru soğanla ve doku kültürü ile yapılan üretimdir. Bu yöntem ile bitki 1-2 yıl içerisinde çiçeklenme büyüklüğüne ulaşır. (Anonim 2008 a, Anonim 2008 b, Atay, 1996) 2.3. Ornithogalum’ların Vegetatif ve Generatif Periyodu ile İlgili Çalışmalar Shimada ve ark. (1995), Ornithogalum arabicum’un çiçeklenmesinde sıcaklığın etkilerini araştırmışlardır. Doğal koşullar altında yetişen bitkilerde çiçek oluşumu ve çiçek tomurcuğunun gelişimini incelemişlerdir. Çiçek sapı Eylül başında oluşmuştur. İlk çiçeklerin iç ve dış çanak yaprakları Ekim sonunda oluşmuş ve karpel primordiası Aralık sonunda oluşmuştur. Çiçek tomurcuklarının daha fazla gelişimi polen tetratları oluştuğu zaman Nisan sonuna kadar yavaşça devam etmiştir ve bitkiler Mayıs ortasında çiçeklenmiştir. Ekim sonunda açık alandan seraya taşınan (20oC’nin üzerindeki) bitkiler Şubat sonunda çiçeklenmiştir. Uzun saplı kesme çiçekler Ocak sonuna kadar doğal düşük sıcaklığa maruz kalarak Mart ortasında elde edilmiştir. Bitkiler 5-13 0C’de 8 hafta bekletildiğinde çiçeklenme ve sap uzunluğu hızlanmıştır. Soğanlar hasattan sonra 16 hafta 30 ve 20 0 C’nin çeşitli kombinasyonlarında depolandığı zaman çiçek üreten soğanların yüzdesi 30 0C’lik depolama süresinin artması ile artmış ve 20 0C’lik depolama süresinin artmasıyla azalmıştır. Vuuren ve ark. (1993), O. thyrosoides’in sıcaklığın çiçeklenme zamanına olan etkileri ile ilgili bir çalışma yürütmüşlerdir. Soğan depolama sıcaklığı (5-35 0C) ile bitkilerin gelişme oranları arasında negatif bir ilişki olduğunu, depolama sıcaklığının artması ile çiçeklenme zamanının geciktiğini bildirmişlerdir. Soğanların 5 0C’de 14 5 hafta depolanması en erken çiçeklenme zamanıyla (dikimden sonra 136 gün) sonuçlanmıştır. 30 0C’de depolama ile 35 0C’de depolama arasında istatistiksel olarak bir fark bulunmamıştır. Kariuki (2003), Ornithogalum saundersiae’nin büyüme ve çiçeklenmesinde dikim derinliklerinin etkilerini araştırmış ve bu amaçla soğanları 5,10,15 ve 20 cm derinlikte dikmiştir. Hasat zamanında 5 cm derine dikilen soğanlarda en uzun boya sahip bitkiler elde edilirken (45.2 cm), en kısa boylu bitkiler 20 cm derine dikilen soğanlardan (37.6 cm) elde edilmiştir. Dikim derinliğinin artmasıyla sürgünlerin ortalama sayısı, soğan başına yaprak sayısı, çiçek sapı uzunluğu azalmıştır. 5,10,15 ve 20 cm derinliklerde, çiçek sapının ortalama uzunluğu sırasıyla 85, 80, 77 ve 64 cm olmuştur. Dikim derinliğinin artmasıyla dikimden hasata kadar geçen süre artmış, 5,10,15 ve 20 cm derinliklerde 119, 131, 125 ve 38 gün olmuştur. Yine dikim derinliğinin artmasıyla ortalama yavru soğan sayısı ve büyüklüğü azalmıştır. Dikim derinliği çiçek sayılarını belirgin olarak etkilememiştir. En iyi büyüme ve çiçeklenme performansı 5 cm derinliğe dikilen soğanlardan elde edilmiştir. Güney Afrika orijinli, Avrupa ve Kuzey Amerika’da kesme çiçek ve saksı bitkisi olarak büyük talep gören O. dubium’un büyüme ve çiçeklenmesi ile ilgili yapılan bir çalışmada, soğanlar dikim öncesi 3 hafta 13 oC’de bekletildiklerinde, 2,9 veya 25 o C’de bekletilmelerine oranla daha uzun çiçek sapı oluşturmuşlardır. Kontrollü büyüme sıcaklığı(gündüz/gece sıcaklıkları (27/22 oC) ve uzun gün denemeleri erken çiçek oluşumuna neden olmuştur. Salkımdaki çiçekçik sayısı sıcaklığa bağlı olmuş, her salkımda birçok çiçek 2 düşük sıcaklıkta gelişirken uzun günlerde bu sayıya tekrar ulaşmıştır .Büyüme oranı, çiçeklenme zamanı ve yavru soğanın toplam verimi dikilen soğanın büyüklüğüne bağlı olarak değişmiştir. Dikim öncesi yapraktan veya topraktan uygulanan Gibberellin, 24 saat 10 ppm etilen uygulanan soğanlar gibi tümünde çiçekli gövde uzunluğunu arttırmıştır (Luria, G. ve ark., 2002). Hertogh ve Gallitano (1997), İsrailde yetiştirilen Ornithogalum dubium’un depolama gereksinimlerini belirlemek amacıyla 4 yıl boyunca yürüttükleri çalışmada 4/5 ve +5cm çapındaki soğanların optimum soğan büyüklüğü olduğunu, bu soğan büyüklüğünün genelde 2 adet ve her birinin 20cm üzeri çiçek sapı oluşturduğunu belirlemişlerdir.Tüm soğanlar tohumdan üretildiğinden dolayı çiçek renkleri, bitki boyu ve çiçeklenme zamanları yüksek oranda değişiklik göstermiştir. Araştırıcılar hasattan sonra soğanların 25OC’de depolanması gerektiğini, dikimden önce saksılı bitkiler için 6 4 hafta 17 OC’de, kesme çiçekler için 9 OC’de yer alması gerektiğini belirtmişlerdir. Soğanlar 9 OC’de depolandığında birkaç çiçek üretmekte fakat çiçek sapı daha uzun olmaktadır. Soğanların serada tutulduklarında minumum gündüz/gece sıcaklıklarının 22/18 OC’de olması, çiçeklenme için en az 96 gün gerektiği ve. 9 saat kısa gün ya da 3 saat uzun gün, daha sonra da çok kısa kış gün uzunluğuna ihtiyacı olduğunu belirtmektedirler. Bir başka çalışmada da Ornithogalum saundersiae’nin çiçek kalitesi ve çiçeklenme periyodunda soğan depolama koşullarının etkileri araştırılmıştır. Martta hasat edilen soğanlar 6 hafta serada solarize edilmiştir. Mart başında bazı soğanlar kontrol olarak dikilmiştir. Diğerleri 2-4 ay karanlık koşullarda 3,8 veya 20 0C’de depolanmıştır. Sonra Mayıs başı veya Temmuz’da sürekli olarak solarize olmuş soğanlarla birlikte dikilmişlerdir. Solarize olmuş soğanlar iyi bir çıkış oranı, çiçeklenme oranı, soğan başına düşen çiçek salkımı sayısı ve çiçek salkımı uzunluğu vermiştir. Soğanların 3 0C’de 4 ay depolanması %100 ün üzerinde soğan oluşumu ile sonuçlanmıştır. 8 0C’de 4 ay depolanması Kasımda çiçeklenmeyi geciktirmiştir. 20 0 C’de 2 ay depolanan soğanların performansı sürekli solarize olmuş soğanlarla benzer olmuştur (Meiling ve ark., 2006). Hagiladi ve ark. (1992), bazı geofitlerin gelişimi ve çıkışında dikim derinliğinin etkileri ile ilgili yürüttükleri çalışmada O.arabicum’un en uygun 0-90 cm derinlikte dikildiğinde çıkış gösterebildiğini bildirmişlerdir. Dikim derinliğinin artmasıyla çıkan bitkilerin yüzdesinin azaldığını ve çıkışın geciktiğini , gelişen sürgün sayısı, yapraklar ve çiçek gövdeleri, yavru soğan sayısının dikim derinliği arasında negatif bir ilişki olduğunu bildirmişlerdir. 2.4. Ornithogalumların Çoğaltılması ile İlgili Çalışmalar Saknishi ve Yanagawa (1979), çeşitli soğanlı süs bitkilerinde (Ornithogalum spp. Leucojum aestivum) pullarına ayırma yöntemiyle çoğaltımı yapılan bitkilerde soğancık oluşumunu araştırmışlardır. Pulların 20 veya 25 0C’de depolanmasının 15 veya 30 0 C’de depolanmasından daha etkili olduğunu bulmuşlardır. Soğancık oluşumunda sürekli sıcaklıkta pul parçaları inkübe edilerek mevsimsel farklılıklar azaltılmıştır. Yaz boyunca 4 ay soğanların depolanma etkisinin soğanların regenerasyon kapasitesinde türlere bağlı olduğunu bildirmişlerdir. 7 Blomerus (2002), Ornithogalum (2n=12) eksplantlarını doku kültüründe farklı kolhisin konsantrasyonuna (% 0.1, 0.2 ve 0.3) farklı sürelerde (24, 48 ve 72 saat) tabi tutmuş ve sonuçta % 54-89 oran ile doku kültüründe kolhisin uygulamalarının tetraploit bitki oluşumunda çok etkili olduğunu bulmuştur. En etkili sonuç 48 saat % 0.2 kolhisin ile muamele edilen bitkilerden elde edilmiştir. Ornithogalum hibritlerinin doku kültürü ile hızlı çoğaltımı amacıyla yürütülen bir başka çalışmada MS ortamında sürekli ışık koşullarında kültüre alınan soğan pul eksplantlarında, karanlık ortamda kültüre alınanlara oranla daha fazla kök ve sürgün gelişimi gözlenmiş, düşük kültür sıcaklıklarında ise gelişim engellenmiştir. Eksplant kaynağı olarak periantlar kullanıldığında ve 0.5 mgl-1 NAA ve 1.5 mg l-1 kombinasyonunda kültüre alınan bitkilerde sürgün sayısı belirgin olarak artmıştır.Aynı zamanda sürgün ve kök sayıları 60g•L-1 sukroz ve 0.8 mg•L-1 ancymidol’ lu ortamda artmıştır. Ayrıca soğan çapı, taze ve kuru ağırlıklar 35°C/15°C(gündüz-gece) sıcaklık koşullarında artmıştır (Suh ve ark., 2005). Ornithogalum saundersiae’nin soğan pul parçaları ile mikroçoğaltımında da 0.05, 0.5 veya 5 µM NAA+0,0.5, 5, 10 veya 20 µM BA kombinasyonları, 0,005, 0.5 veya 5. µM NAA+0,0.5, 5, 10 veya 20 µM BA kültür ortamı ile kıyaslanmıştır. NAA’siz ve BA’siz ortamda eksplantlar yaşamamıştır. En yüksek yaşama oranları 5 µM NAA +BA kombinasyonu (%93.3’ün üzerinde) ile, 0.5 µM NAA +10 µM BA kombinasyonlarından (% 88.9’un üzerinde) elde edilmiştir. NAA, BA ve ikisi arasındaki interaksiyon, organ regenerasyonunu belirgin olarak etkilemiştir. NAA konsantrasyonunun artmasıyla sürgün sayısı ve sürgünlü eksplantın yüzdesi artarken, BA konsantrasyonu bu oranı etkilememiştir. Kökler 0.5 veya 5.0 µM NAA konsantrasyonlu ortamdaki eksplantlarda oluşurken BA konsantrasyonu kök regenerasyonunu önlemiştir. Kallus, BA’siz 5 µM NAA’li ortamdaki eksplantlarda oluşmuştur. Çeşitli çiçek eksplantlarından O. saundersiae’nin doku kültürü mümkündür fakat organların regenerasyonu için 0.5 µM NAA ve 2 µM BA li MS ortamı gereklidir. Bitkicikler,sürgünler, kökler veya kallus, direkt veya indirekt olgunlaşmamış çiçek sapı, boğum arası, pedisel ve sepallerden elde edilmiştir (Kariuki ve Kako, 2002). Nayak ve Sen (1995), Ornithogalum umbellatum’un direkt organesisle in vitro çoğaltımını araştırmışlardır. O. umbellatum’un, soğan pul eksplantından sürgün tomurcuğu oluşumu, NAA (2 mg/litre) ve BA (1 mg/litre)li MS ortamında direkt 8 oluşmuştur. Yine aynı araştırıcılar yaptıkları bir başka benzer çalışmada 30 gün içinde ana soğandan 6-8 soğan üreten bir method tanımlamışlardır. 8 mg NAA/litre’li MS ortamında çiçek tablasını da içeren 2-3 pula sahip soğan eksplantından kallus oluşmuştur. Kallustan oluşan veya 2 mg NAA/litre veya 0.5 mg BA/litre li eksplant ortamından direkt oluşan sürgünler MS yarı sıvı ortamında köklenmiştir (Nayak ve Sen,1992). Chung ve ark. (1980), Ornithogalum thyrosoides’in in vitro’da kallus oluşumu ve dişi organlardan organogenesisinde bitki büyüme düzenleyicilerinin etkilerini belirlemeye çalıştıkları araştırmada çeşitli ortamlar denemişler ve kallus oluşumu ve bitki farklılaşması için 0.2 mg/l NAA + 2.0 mg/l kinetin destekli MS ortamının en iyi olduğunu bulmuşlardır. Hussey (1976) de Ornithogalum thyrosoides’de ana bitki ve kallustan bitki rejenerasyonu ile ilgili yürüttüğü çalışmasında gövde parçası, yaprak, sepal ve soğan pullarını bitki büyüme düzenleyicisiz MS ortamında kültüre almıştır. Ortama IAA; NAA veya 2.4 D eklendiği zaman gövde ve yaprak parçaları kallus oluşturmuştur. Ana bitkiden çoğalan bitkiler diploiddir (2n=12). NAA’li kallustan çoğaltılan bitkiler ilk olarak diploiddir fakat 7.5 hafta boyunca NAA ortamında tetraploid bitkiler oluşturmuştur. Landby ve Neiderwieser (1992), Ornithogalum cv Rollow’un (sarı çiçekli bir çeşit) in vitroda hızlı çoğaltımını araştırmışlar ve sonuçta in vitro sürgün oluşumunun eksplant kaynağına bağlı olduğunu bildirmişlerdir. Araştırıcılara göre içsel büyüme düzenleyiciler sürgün oluşumu için gerekli değilken BA ve NAA tarafından teşvik edilmektedir. Bu çeşidin hızlı çoğaltımının yaprakların tabanındaki küçük eksplantlar (0.5 X 0.5 cm) kullanılarak ve 0.1-1.0 mg NAA ve 1-2 mg BA/litre içeren modifiye MS ortamında olduğunu bulmuşlardır. Yanaga ve Ito (1988), O.arabicum soğan pul eksplantları 25 0C’de NAA ve BA destekli White’s katı ortamında kültüre alınmıştır. Çiçek tablasının 10 mm yukarısından alınan eksplantlarından yüksek oranda soğancık rejenerasyonu görülmüştür. Ornithogalum maculatum’un microçoğaltımında eksplant olarak kullanılan olgun bitkiler ve kültüre alınan fidelerin yaprakları çeşitli BA (0, 0.5, 1.0 or 2.0 mg/dm3) ve NAA (0, 0.01, 0.1, 1.0 veya 2.0 mg/dm3) kombinasyonlu farklı ortamlarda [Nel, D.D., Agroplantae (1981) 13, 83-84] kültüre alınmıştır. Diğer bir 9 denemede ise değişik sakkaroz konsantrasyonları (10, 30, 50, 70 veya 100 g/dm3) kullanılmıştır. Çoğaltım ilk çiçekler açtığı zaman ana bitkiden kesilen yapraklardan sağlanmıştır. Kültürlerin gelişimi, kallus içermesi, sürgünler ve yaprak kısımları, 0.52.0 mg BA+0.01-2.0 mg/dm3 NAA kombinasyonundan sağlanmıştır. Sukroz konsantrasyonu sürgün ve kalllus oluşumunu etkilemiştir. 30 g/dm3 de sürgünler kök geliştirmiş ve kısa yapraklı 50-70 g lık soğancıklar oluşmuştur (Rensburg ve ark., 1989). Nel (1981), Ornithogalum hibritlerinin hızlı çoğaltımında BA ve NAA (2 ve 0.1 mg/dm3) li modifiye MS ortamında yaprak eksplantlarından sürgün rejenerasyonunu araştırmış, kök oluşumu için de büyüme maddeleri içermeyen ortamı kullanmıştır. 6-8 hafta aralıklarla 3 kez alt kültüre alarak bir yapraktan Kasım ve Temmuz ayları arasında 9000’in üzerinde bitki üretmiştir. Geofitlerin doku kültürü yoluyla çoğaltımında; soğan pul yaprakları, gövde nodları, yapraklar, olgun tohum, ince hücre katmanları, kök parçaları ve olgunlaşmamış embriyo gibi eksplantlar kullanılmaktadır (Mirici ve ark., 2005). Buna rağmen kullanılan eksplant türleri içinde soğan eksplantları, kök, gövde ve yaprak eksplantlarından daha yüksek oranda büyüme potasiyeli göstermektedir (Zaidi ve ark., 2000). 2.5. Ornithogalumlarda Bitki Büyüme Düzenleyicilerinin Kullanımıyla İlgili Yapılmış Çalışmalar Ornithogalum’un çiçeklenmesine bitki büyüme düzenleyicileri ve sıcaklıklarının etkileri ile ilgili yapılan bir çalışmada O. dubium ve O. arabicum’da soğanların 10, 15 ve 20 o C ‘de 4-6 hafta depolanması, kontrole kıyasla (25 o C) çiçeklenmeyi hızlandırmıştır. O. dubium’da soğanların 19/13 oC’de bekletilmeleri sonucu, 13/19 o C’de bekletilmelerine oranla çiçeklenme daha hızlı oluşmuştur. O.dubium’da soğanların depolama süresi 2-6 haftadan daha fazla olduğunda sıcaklığa bağlı olmaksızın çiçek sayıları azalmıştır. Bununla birlikte O. arabicum’da etkilememiştir. O.dubium’da soğanlar 100 mg L-1 GA3 ve Promalin [benzyladenine + gibberellins] çözeltisine daldırıldıklarında çiçeklenme hızlanmıştır. O.arabicum ise promalin tarafından etkilenmemiştir. Ancak 50 mgL-1 Promalin ve 200 ve 400 mgL-1 GA3’in püskürtme şeklinde uygulanması O.arabicum’un çiçeklenmesini kontrole göre 10 hızlandırmıştır. O.dubium’un çiçek sayıları promalin tarafından azalmıştır. O.arabicum’da promalinin tüm konsantrasyonları çiçeklenmeyi hızlandırırken çiçek sayılarını azaltmamıştır (Suh JeungKeun ve ark., 2000). Blomerus ve Schreuder (2002), Ornithogalum’un çiçeksiz yaprak çeliklerinden hızlı çoğaltımı amacıyla O.thyrsoides ve O.thyrsoides hibritlerinde üstten ısıtma (24.5 ve 14 oC) ve 2 toprak karışımı kombinasyonunda IBA’nın (1000 ile 2000 ppm) etkilerini araştırmışlardır. Sonuçta en fazla sayıda soğan, ısıtma yapılmayan ve 2000 ppm IBA uygulanmış bitkilerden elde edilirken en geniş soğanlar ise 24.5 ºC ısıtma yapılan ve 1000 ppm IBA uygulamasından elde edilmiştir. 2.6. Ornithogalumların Islahı ile İlgili Yapılmış Çalışmalar Kesme çiçek ve saksılı bitki ıslahında bazı önemli karakterler için Ornithogalum gen bankası oluşumlarının değerlendirilmesi ile ilgili bir çalışma yürütülmüştür. Güney Afrika orijinli Ornithogalum türleri 3 alt cinse bölünmektedir. (Aspasia, Urophyllon ve Osmyne) O. thyrosoides türü Aspasia alt cinsine girmektedir ve beyazdan sarı ve koyu portakal rengine kadar değişik renkli çiçeklere sahiptir. Bu türde 2299 genotip toplanmıştır. Karşılaştırmalı koşullarda yetiştirilen ana baba bitkiler melezleme için ölçülmüştür. İncelenen kriterler yaprak durumu, çiçek rengi ve şekli, gövde uzunluğu,şekli, büyüklüğü ve çiçek salkım yoğunluğudur. Ek olarak görülebilir virüs simptomlarının varlığı ve doku kültürü ile çoğaltım için yaprak çelikleri değerlendirilmiştir. Değişimler her bir tür için ve bazı durumlarda türler içinde gözlemlenmiştir. Yaprak durumları türler arasındaki gibi tür içinde de oldukça fazla değişiklik gösterirken çiçek salkım karakterleri türler içinde en fazla uyumlu olan karakterler olarak ölçülmüştür. Doğal populasyonlardaki mevcut çeşitlilik, melezlemede ana baba olarak seçilen bitkilerde değerlendirilmiştir. Bu yüzden farklı tiplerin ıslahı için ya türler içi ya da türler arası seviyede kombinasyon oluşturulması gerekir (Littlejohn ve Blomerus, 1997). Ornithogalum’un türler arası melezlemesinden yeni çiçek renklerinin oluşumu ile ilgili yürütülen çalışmada O.dubium (portakal renkli kısa çiçek salkımları) ve O.thyrosoides (beyaz çiçekli uzun çiçek salkımları) arasında hibritlerin gelişimi için embriyo kurtarma yöntemi başarıyla kullanılmıştır. F1 hibritler kısmen döllenmiş ve elde edilen F2’ler geriye melezlenerek yeni bitkiler elde edilmiştir.Geriye melezlenen 11 hibritlerde çiçek rengi ve çiçek salkımı özelliklerinde açılım görülmüş ve portakal renkli fideler ve uzun çiçek salkımları elde edilmiştir (Griesbach ve ark.,1993). Griesbach ve ark. (1993), Ornithogalum’dan yeni hibritlerin geliştirilmesi ile ilgili yaptıkları çalışmada, ıslah amaçlarını renk sayısının, gövdedeki çiçek sayısının ve çiçeklenme sürelerinin arttırılması olarak belirlemişler ve bu amaçla da O.dubium ile O.throsoides türlerini melezlemişler ve türler içi hibritleri elde etmeye çalışmışlardır. Ön denemelerde olgun tohumların klasik ıslahla elde edilemiyeceği belirlendiği için fideler doku kültüründe ovül kültürü ile elde edilmiştir. Ovaryumları tozlanmadan 3-21 gün sonra hasat etmişler, bundan aldıkları tohum kapsüllerini % 1.5 NaOCl ‘de 30 dk yüzey sterilizasyonuna tabi tutmuşlardır. Daha sonra da ovülleri tuz, vitamin, 30 g/l sukroz ve 6.5 g/l agar içeren MS (Murashige-Skoog) ortamında kültüre almışlardır. Bu ortamda 2-3 ay sonra gelişen bitkicikler seraya aktarılmış ve çiçeklenme 6-9 ay sonra olmuştur. Yaprak parçacıklarından olan üretimde ise yine 1mg/l BA tuz ve vitamin destekli MS ortamı kullanılmıştır. 3 hafta içinde 5 ila 20 soğanımsı bitki oluşmuş ve bu bitkicikler hormonsuz MS ortamında köklendirilmiştir. Islah sonucunda da 40 farklı çaprazlamadan birkaç yüz fide çiçeklenmiştir. Bunların 31 tanesi türler içi hibrittir. Bunların 12 tanesi F1, 11 tanesi F1 geriye melez hibriti, 7 tanesi F2 hibritidir. 9 tane türler arası hibrit üretilmiştir. Bunların 5 tanesi F1 hibrit, 3 tanesi F1 geriye melez hibriti, 1 tanesi F2 hibritidir. Blomerus (2002), Ornithogalum’ların kesme çiçek olarak popüler bir cins olduğunu, ıslah programlarında sadece Güney Afrika’daki birkaç türün kullanıldığını ve bu türlerden O. thyrsoides ve O. dubium’un ıslahında, var olan bazı uyuşmazlık problemlerinin poliploidizasyon ile çözümlenebileceğini bildirmiştir. Araştırıcıya göre poliploidler aynı zamanda daha çok varyasyon oluşturabilmektedir. Bu amaçla in vitro eksplantlarını farklı colchicine konsantrasyonunda (0.1, 0.2 and 0.3%) ve farklı zamanlarda (24, 48 ve 72saat) bekletmiştir. Sonuçta in vitro colchicine muamelesinden % 54-89 oranında tetraploid bitkiler elde edilmiştir. En etkili muamelenin 48 saat % 0.2’lik colchicine uygulamasından olduğu görülmüştür. Sonuçta çeşitli Ornithogalum hibritlerinin % 17-100 arasında tetraploidler oluşturabileceğini ve in vitro colchicine muamelesinin tetrapoloid bitki elde etmek için çok etkili bir method olduğu belirtilmektedir. İsrail’de bazı Ornithogalum taksonlarının ekocoğrafik dağılımı ve sitolojisi çalışılmıştır. Bu taksonlar Ornithogalum narborense spp. narborense (2n=54, 54 1B), 12 Ornithogalum narborense spp. brachystachys (2n=18, 18 1B) ve Ornithogalum fuscescens (2n=54 2B)dir. O. spp. narborense ve O. spp.brachystachys , çok az karyomorfolojik ve morfolojik farklılıklar göstermiştir. O.fuscens’in karyotipi de O.narborense spp.narborense’ninkine çok benzer bulunmuştur (Kushnir ve ark.,1977). Özhatay (2002), Türkiye’deki Ornithogalumların kromozom sayıları ile ilgili yaptığı araştırmada, türlerin 2n = 12, 14, 16, 18, 20, 21, 24, 27, 28, 32, 40, 45, 54, 60, 80 arasındaki kromozomlara sahip olduğunu bildirmiştir. 2.7. Ornithogalumların Kültürel İşlemleriyle İlgili Çalışmalar Claassens (1990), Ornithogalum’un besin içerikleri ile ilgili yaptığı çalışmada hem vegetatif hem de soğan büyütmesi için iyi bir besin uygulamasının yapılması gerektiğini bildirmiştir. Araştırıcıya göre P ve K gereksinimleri çok yüksek değildir fakat yeterli K seviyeleri, erken büyüme döneminde çok önemlidir. Ornithogalum soğanlarının N içeriği çok yüksektir ve düşük N uygulaması erken büyüme döneminde verim açısından çok az etkilidir. Littlejohn ve Blomerus (2000), Ornithogalum’un saksı bitkisi olarak kullanımını etkileyen bazı kültürel faktörleri araştırmışlar, 20-25 o C sıcaklıktaki köklendirme odasında muhafaza etmeleri sonucu geniş soğanlar elde etmişlerdir. Araştırıcılar ayrıca iyi drene olmuş bir saksı karışımında 5:2:4 N:P:K gübre oranlarını tavsiye etmektedirler. Büyüme koşullarının yüksek ışık intensitesinde olması gerektiğini belirtmektedirler. Soğanlı bitkiler ile kesme çiçek bitkilerinden bazı türlerde tuzlulukla ilgili yapılan bir çalışmada, sulama suyu tuzluluğunun çiçek verimi ve kalitesine etkileri incelenmiş ve tuzluluğun Ornithogalum arabicum’da kök ağırlığı,yaprak ve soğanın küçülmesine neden olduğu belirlenmiştir (Shillo ve ark., 2002). 2.8. Leucojum aestivum’un Bitki Sistematiği ve Botaniği İle İlgili Yapılmış Çalışmalar Leucojum cinsi ise Liliaceae familyası içerisinde yer almaktadır. Anavatanı, Güney Afrika ve Akdeniz Bölgeleri olup Avrupa ve Batı Asya’da geniş alanlarda 13 kullanım bulunmaktadır. Dünyada 10 civarında türü olan göl soğanının ülkemizde sadece Leucojum aestivum türü yetişir. Ülkemizde Trakya, Kuzey Anadolu Bölgesi ve Beyşehir civarında doğal olarak bulunur ve deniz seviyesi ile 1100 m yükseklikler arasındaki nemli, bataklık ve sulak alanlarda yarı gölge yerlerde yetişir. Mart-Nisan aylarında çiçek açan Leucojum’un çan şeklindeki çiçeklerinin sayısı genellikle bir ile beş arasında değişir. Türkçe adı Göl soğanı olarak geçen Leucojum, ülkemizin değişik yörelerinde inci çiçeği, mayıs çanı, akçabardak, çayırsümbülü (Edirne: Keşan), göl lalesi (Sakarya) gibi adlarla bilinmektedir (Baytop, 1997, Anonim, 2007 a). Kırmızı kitapta VU kategorisinde yer almaktadır (Davis, 1984, Ekim ve ark. 2000, Özhatay, 2005). 2.9. Leucojum aestivum’un Kullanım Alanları İle İlgili Çalışmalar Leucojum aestivum’un en bol bulunduğu yöreler Samsun; Sakarya ve Beyşehir’dir. Samsun, Bafra ve Terme’de bitkinin çiçekleri sapları ile toplanarak, çiçekçi dükkanlarında kesme çiçek olarak satılmaktadır. Göl soğanı içermiş olduğu amarylldaceae alkoloidleri (galanthamine, tazettin, lycorine) sayesinde tıbbi amaçlı olarak da kullanılan soğanlı bitkilerin başında gelmektedir. Tıpta alzheimer ve çocuk felci gibi sinir sistemini etkileyen hastalıkların tedavisinde kullanılmaktadır Ayrıca taze yumru kusturucu etkiye sahiptir. Çıbanların olgunlaştınlması ve açılmasında kullanılır. Taze yumru ezilir ve bir tülbent içinde çıban üzerine sarılır. Göl soğanının doğadan toplanarak ihracatı yapılmaktadır. Yıllık ihracatı 4.000.000 adettir. İhracatın bir kısmı Bulgaristana yapılmaktadır. Bu ülkede bulunan alkoloid fabrikasında işlenen soğanlardan ilaç elde edilmektedir. (Anonim, 2007 a). Yine ilaç sanayinde kullanılmak üzere 2008 yılında göl soğanının 180 ton yaprağı Bulgaristan’a ihraç edilmiştir. Leucojum aestivum’un içermiş olduğu alkoloid varyasyonu ile ilgili bir çalışma yürütülmüş, bu amaçla Bulgaristan’da 18 populasyondan toplanan ve GCMS ile çalışılan örneklerde 19 alkoloid saptanmıştır. Esas alkoloid olarak galanthamine ve lycorine başta olmak üzere haemanthamine ve homolycorine alkoloidleri baskın alkoloidler olarak bulunmuştur (Georgieva ve ark., 2007). 14 2.10. Leucojum aestivum’un Vegetatif ve Generatif Periyodu İle İlgili Yapılmış Çalışmalar Mori ve ark. (2006), yaptıkları çalışma ile Leucojum aestivum ve Leucojum autumnale’nin açıkta yetiştiriciliğinde büyüme ve çiçeklenme özelliklerini belirlemişlerdir. Her iki türde yaprak oluşumu ilkbahardan sonbahara kadar devam etmiştir. L.aestivum’un yapraklar ve birincil çiçek salkımı Şubat başında eş zamanlı olarak çıkmıştır. Yaprakların kuruması Mayıs sonunda tamamlanmıştır. L.autumnale’de yapraklar Eylül ve Ekimde oluşmuş, çiçeklenmeden sonra kuruma Temmuzda sona ermiştir. Çiçek oluşumu L.aestivum’da Mayıs ortasında, L.autumnale’de Mayıs sonunda başlamıştır. 2.11. Leucojum aestivum’un Çoğaltılması İle İlgili Yapılmış Çalışmalar Ülkemizde firmalar tarafından gerçekleştirilen üretimi tohum ve yavru soğanladır (Aksu ve ark., 2002). Yarı gölge yerlerde ve nemli topraklarda yetişmeyi sever. Yazı dormant halde geçirir. İlkbaharda çiçeklenme ve büyüme periyodu süresince düzenli sulama yapmak gerekir. Yavru soğanlar ana soğandan ayrılır ve tekrar dikilir. Bitkiler bütün gelişmeleri boyunca nemli tutulmalıdır. Yetiştirildikleri toprak organik gübre ile takviye edilmelidir. Soğuğa oldukça dayanıklıdırlar (Atay, 1996). Leucojum aestivum’un tohumlarının çimlenmesinde strafikasyonun etkilerinin araştırıldığı bir çalışmada tohumlar laboratuvar ortamında kumda 4 0C’de 0, 3, 6 ve 7 hafta ve 22 ºC’ de 3, 6 ve 7 hafta bekletilmişlerdir. 4 ºC’ de strafikasyon tohum dormansisini kırmamış, dormant tohumlar 6 hafta 22 ºC’ de tutulduğunda % 73 oranında çimlenme görülmüştür. Laboratuvar ortamında strafike edilmemiş olan tohumlarda çimlenme görülmemiştir. Arazi şartlarında da strafike edilmeden ekilen tohumlarda ise 6 ay sonra % 82 oranında çimlenme görülmüştür (Çiçek ve ark., 2007). Göl Soğanı (Leucojum aestivum)’nın vegetatif yöntemlerle üretilme olanaklarının araştırıldığı bir çalışmada, chipping (dilimlere ayırma) ve twin-scaling (ikişerli pullarına ayırma) yöntemleri denenmiştir. Materyal olarak çevre uzunlukları 67 cm’den 12-13 cm’ye kadar olan soğanlar kullanılmış ve kontrol soğanlarına hiçbir bölme işlemi uygulanmamıştır. Soğan iriliklerine göre dörde ve sekize dilimleme ile 15 ikişerli pullarına ayırma uygulamaları sonucunda soğancık oluşumu kontrol uygulamalarında % 100, diğer uygulamalarda ise % 94-97 arasında bulunmuştur. İki yıllık bir dönemin sonunda elde edilen soğan sayısı açısından en iyi sonuçlar, ikışerli pullarına ayırma uygulamalarından, bu yöntemin uygulanamadığı daha küçük soğanlarda ise sekize dilimleme uygulamalarından elde edilmiştir. İki yıllık süre içerisinde ihraç boyuna ulaşan soğan oranı açısından ise en iyi sonuçlar, % 78.3 ile % 98.3 arasında değişen oranlarda kontrol uygulamalarından elde edilmiştir (Aksu ve ark., 2002). Ptak ve Cierniak (2003), Leucojum aestivum soğanlarının doku kültüründe üretimleri üzerine bir çalışma yürütmüşler, soğanlardan ayrılan yapraklar ve pul parçalarını oksin (NAA, 2.4 D, Picloram ) ve sitokinin (BA’nin farklı oluşum ve konsantrasyonlarında) destekli ortamda kültüre almışlar ve sonuçta 2.4 D ve Picloram’lı ortamda somatik embriyogenesis ve embriyonik kallus oluşumu elde etmişlerdir. Diğer yandan direkt organogenesis (soğancık ve kök oluşumu) ise büyüme düzenleyicisiz ortamda meydana gelmiştir. Göl soğanının hızlı çoğaltımı amacıyla yapılan bir başka çalışmada da; 2 ve 4 soğan pul yaprakları ile olgunlaşmamış embriyoları BAP ve NAA’nın değişik konsantrasyonlarını içeren MSO besin ortamında kültüre alınmıştır. 4 ve 2 pul yapraklı soğan eksplantlarında en fazla soğancık oluşumu sırasıyla 6.67 ve 5.83 adetle 1 mg/l BAP+1 mg/l NAA ile 2 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA içeren MSO besin ortamından elde edilmiştir. Olgunlaşmamış embriyolarda ise en fazla soğancık 2.27 adetle 0.5 mg/l BAP+4 mg/l NAA içeren MSO besin ortamında gözlenmiştir. Soğan pul yapraklarından gelişen soğancıklarda en fazla kök oluşumu 1 mg/l NAA içeren MSO besin ortamından gerçekleşmiştir Köklenen sürgünler son olarak saksılara aktarılarak dış şartlara alıştırılmıştır (Karaoğlu, 2004). Bulgaristan’da 9 farklı populasyondan alınan L.aestivum’un in vitroda klonal çoğaltımı amacıyla yürütülen çalışmada, 5-6 mm çapındaki soğancıklar dikey olarak 4 eşit parçaya bölünmüş ve 2 mg/l BAP+0.15 mg/l NAA destekli MS ortamında (25°C) kültüre alınmıştır. 4 hafta sonra pullar arasında soğancıklar oluşmuştur. 1 yılın sonunda tek bir çift puldan yaklaşık 500 soğancık elde etmişlerdir (Stanilova ve ark., 2004). 16 Bulgaristan’da yapılan bir diğer çalışmada da L.aestivum’da in vitroda soğancık oluşumu, büyüme düzenleyicili ve büyüme düzenleyicisiz MS ortamında oluşmuştur. Büyüme düzenleyicili ortamda soğancıkların büyümesi daha fazla olmuştur. En iyi kombinasyon 1 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA olarak belirlenmiştir. Aynı ortamda alt kültüre alınan bitkiler 3-4 ayda 4-5 mm çaplı ve yapraklı soğancıklar oluşturmuştur (Genova ve ark., 2004). Pavlov ve ark. (2007), L.aestivum’un in vitroda galanthamine üretimi ile ilgili yaptıkları çalışmada 4 mg/L 2,4 D+2 mg/L BAP destekli MS ortamında genç meyveleri kallus oluşumu için kültüre almışlardır. Ayrıca .15 mg/L α-NAA+2.0 mg/L BAP destekli MS ortamında sürgün kültürü yapmışlardır. Maksimum galanthamine miktarı (2.5 mg/l) 80 sürgün kültüründen 35 gün sonra elde edilmiştir. 2.12. Leucojum aestivum’da Bitki Büyüme Düzenleyicilerinin Kullanımı İle İlgili Yapılmış Çalışmalar Samsun’da 2000-2002 yılları arasında yapılan çalışmada Leucojum aestivum’un bazı bitki karakterleri ve soğan verimi üzerine bitki büyüme düzenleyicileri ve gölgelemenin etkileri araştırılmıştır. İlk 2 yıl boyunca soğanlar büyümesi için ayrılmış ve 3. yılda vegetasyon başlangıcında seçilen tekerrürler 0.635 cm polietilen örtü ile gölgelenmiş ve GA3 (50,100, 250 ve 500 ppm) ve NAA’in (500,1000, 2500 ve 5000 ppm) farklı dozları hem gölgeli hem de gölgesiz tekerrürlere püskürtülmüştür. Vegetasyon boyunca bitki boyu, bitki başına yaprak sayısı ve hasat sonrası soğan çapı, soğan ağırlığı, hasat edilen soğan sayısı, soğan verimi saptanmıştır. Hem gölgeleme hem de bitki büyüme düzenleyicileri, incelenen kriterler üzerinde belirgin bir etki göstermiştir (Ak ve ark., 2004). 2.13. Leucojum aestivum’un Kültürel İşlemleri İle İlgili Yapılmış Çalışmalar Samsun’da yapılan bir çalışmada Leucojum ‘un bazı bitki karakterleri ve soğan verimi üzerine hasat zamanı ve farklı N dozlarının etkileri araştırılmış, 0,5,10,15 ve 20 kg/da N uygulanan bitkiler Haziran ve Temmuz aylarında hasat edilmişlerdir. Çalışma sonucunda farklı hasat zamanlarının incelenen özellikler bakımından etkili olmadığı, ancak N dozlarının soğan verimi, soğan çapı, bitki boyu , yaprak sayısı ve 17 soğanın ham protein içeriğini arttırdığı bulunmuştur (Çırak ve ark., 2004) . 3. GEREÇ VE YÖNTEM 3.1. Gereç 3.1.1. Deneme Yeri Araştırma, bitkilerin doğal olarak bulundukları alanları ile Batı Akdeniz Tarımsal Araştırma Enstitüsü’nün deneme alanları (kapalı ve açık) ve laboratuvarlarında yürütülmüştür. 3.1.2. Deneme Alanının İklim Özellikleri Türler kültüre alınırken yetiştirme alanı olarak Batı Akdeniz Tarımsal Araştırma Enstitüsündeki yeşil gölge perdesi ile korumalı ısıtmasız cam sera kullanılmıştır. Deneme sırasında açık alan ve cam seradaki sıcaklık ve nem değerleri hobo veri cihazıyla ölçülmüştür (Şekil 3.1). ü Şekil 3. 1. Araştırma yerindeki sıcaklık ve nem değerlerinin alındığı hobo veri cihazının görünümü 2006-2008 yılları arasında denemenin sürdürüldüğü dönemlerde cam sera ve açık alanda gözlenmiş olan sıcaklık değerleri Şekil 3. 2 ve Şekil 3.4’te sunulmuştur. 18 Buna göre açık alanda en düşük aylık ortalama sıcaklık değerleri 2.4 ºC ile 2008 yılı Şubat ayında, serada en düşük aylık ortalama sıcaklık değerlerinin ise 3.7 ºC ile 2008 yılı Şubat ayında olduğu belirlenmiştir. En yüksek aylık ortalama sıcaklık değeri ise açık alanda 32.3 ºC ile 2007 yılı Temmuz ayında, serada 34.2 ºC ile 2008 yılı Temmuz ayında ölçülmüştür. Kış döneminde cam serada ısıtma yapılmadığından açık alan ile sera arasında sadece 1.3 ºC’lik bir sıcaklık farkı oluşmuştur. Yaz döneminde ise serada koyu gölge perdesi ile gölgeleme yapılmış ve sıcak günlerde üstten mistleme şeklinde sulama yapılmıştır. Bu nedenle açık alan ile seradaki sıcaklık farkı sadece 1. 9ºC olmuştur. Aynı dönemlerde elde edilen nem değerleri ise Şekil 3.3 ve Şekil 3. 5 ’te gösterilmiştir. Buna göre açık alanda en düşük nem değerleri % 27.2 ile 2006 Şubat ayında, en yüksek nem değerleri ise %92.4 ile 2007 Şubat ayında ölçülmüştür. Serada en düşük nem değerlerinin % 28.3 ile 2006 Aralık ayında ve en yüksek nem değerlerinin ise % 91.1 ile 2007 Aralık ayında olduğu belirlenmiştir. 40,0 Ortalama Sıcaklık (C) 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 10.Haz.08 16.May.08 21.Nis.08 27.Mar.08 02.Mar.08 06.Şub.08 12.Oca.08 18.Ara.07 23.Kas.07 29.Eki.07 04.Eki.07 09.Eyl.07 15.Ağu.07 21.Tem.07 26.Haz.07 01.Haz.07 07.May.07 12.Nis.07 18.Mar.07 21.Şub.07 27.Oca.07 02.Oca.07 08.Ara.06 0,0 Tarih Şekil 3. 2. Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen sera içi ortalama sıcaklık değerleri 19 20 Tarih Şekil 3. 4 .Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen açık alan ortalama sıcaklık değerleri 10.Haz.08 16.May.08 21.Nis.08 27.Mar.08 02.Mar.08 06.Şub.08 12.Oca.08 18.Ara.07 23.Kas.07 29.Eki.07 04.Eki.07 09.Eyl.07 15.Ağu.07 21.Tem.07 26.Haz.07 01.Haz.07 07.May.07 12.Nis.07 18.Mar.07 21.Şub.07 27.Oca.07 02.Oca.07 08.Ara.06 Ortalama Sıcaklık(C) 10.Haz.08 16.May.08 21.Nis.08 27.Mar.08 02.Mar.08 06.Şub.08 12.Oca.08 18.Ara.07 23.Kas.07 29.Eki.07 04.Eki.07 09.Eyl.07 15.Ağu.07 21.Tem.07 26.Haz.07 01.Haz.07 07.May.07 12.Nis.07 18.Mar.07 21.Şub.07 27.Oca.07 02.Oca.07 08.Ara.06 Ortalama Nem (%) 100,0 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 Tarih Şekil 3. 3. Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen sera içi ortalama nem değerleri 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 100,0 Ortalama Nem (%) 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 10.Haz.08 16.May.08 21.Nis.08 27.Mar.08 02.Mar.08 06.Şub.08 12.Oca.08 18.Ara.07 23.Kas.07 29.Eki.07 04.Eki.07 09.Eyl.07 15.Ağu.07 21.Tem.07 26.Haz.07 01.Haz.07 07.May.07 12.Nis.07 18.Mar.07 21.Şub.07 27.Oca.07 02.Oca.07 08.Ara.06 0,0 Tarih Şekil 3. 5. Araştırmanın yürütüldüğü dönemlerde gözlenen açık alan ortalama nem değerleri Denemenin yürütüldüğü serada ısıtma yapılmamıştır. 3.1.3. Türlerin Doğal Populasyonlarının ve Deneme Alanının Toprak Özellikleri Bazı türlerin doğal populasyonlarından ve yetiştirme alanlarından alınan toprak örneklerinin özellikleri ile temel besin elementi içerikleri Tablo 3.1. ve Tablo 3.2’de verilmiştir. Buna göre doğal populasyondaki bitkiler daha çok kumlu tınlı olmak üzere killi tınlı ve tınlı bünyedeki tuzsuz alkali ya da nötr topraklarda yetişmektedir. Doğal populasyon topraklarındaki kireç içerikleri türlere bağlı olarak değişken olup, organik madde içerikleri yüksektir. Yetiştirme alanında kullanılmış olan torf: perlit karışımının (1:1) ise tuzsuz ve nötr olduğu saptanmıştır. Yetiştirme alanlarındaki harcın doğal ortamlarındaki toprak özelliklerine yakın bir ortam haline dönüştürülmesi için toprak analiz sonuçlarına göre bitki besleme uzmanı Cevdet Fehmi ÖZKAN tarafından bir gübreleme programı hazırlanmıştır. 21 Tablo 3.1. Türlerin doğal ortamlarındaki toprakların bazı özellikleri ve besin elementi düzeyleri Türler O. narborense O. pyrenaicum O. nutans O. montanum O. umbellatum O. oligophyllum O. ulouphyllum O. armeniacum O. orthophyllum O. pamhyllicum O. lanceolatum PH (1: 2,5) 7.3 Nötr EC 106(25C)(mhos/ cm) 685 Tuzsuz 7.9 Alkal i 196 Tuzsuz 1.8 Az 8.3 25 453 4735 420 Kumlu 8.0 Tın Alkal i Tın 7.8 Hafif Alkal i Kumlu 8.2 Alkal Tın i Kumlu 7.2 Tın Nötr 187 Tuzsuz 2.6 Az 2.4 16 92 4468 350 419 Tuzsuz 16.4 Çok Yüksek 12.6 118 607 4978 391 256 Tuzsuz 1.8 16 178 2899 265 709 Tuzsuz 33.3 Çok Yüksek 2.3 Az 13.3 48 288 5020 515 187 Tuzsuz 4.1 Orta 4.1 20 436 5698 542 741 Tuzsuz 363 Tuzsuz 1.8 Az 13.8 Yüksek 13.2 211 799 4241 1232 11.6 89 481 5089 430 210 Tuzsuz 47.0 Çok Yüksek 1.8 Az 4.2 19 85 1870 689 5.9 104 661 4426 365 Tekst ür Kumlu Tın Killi Tın Kumlu 8.2 Tın Alkal i Kumlu 6.9 Tın Nötr Kumlu 7.8 Tın Hafif Alkal i Kumlu 8.1 Tın Alkal i Tın 7.9 Alkal i 216 Tuzsuz Kireç (%) 5.2 Orta Organik madde (%) 13.1 P K Ca Mg (ppm (ppm (ppm (ppm ) ) ) ) 111 276 4736 381 Tablo 3.2. Türlerin yetiştirme alanındaki yetiştirme ortamının (torf:perlit) bazı özellikleri ve besin elementi düzeyleri Tekstür PH (1: 2,5) EC 10 (25C) Kireç (%) 6 Çalışmadaki türler Organik madde (%) 92.0 Nötr Tuzsuz 22 P (%) K (%) 0.24 0.24 Ca (%) 3.3 Mg (%) 0.18 3.1.4. Bitkisel Materyal Çalışmanın bitkisel materyalini Batı Akdeniz Bölgesinde doğal olarak yetişmekte olan Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. türlerinin doğal populasyonu, bu populasyondan alınarak kültür koşullarında yetiştirilen soğanlar ve tohumlardan elde edilen bitkiler ile kültür çeşitleri oluşturmuştur. 3.2. Yöntem 3.2.1. Bitki Sistematiğine Yönelik Çalışmalar Çalışılan türlerle ilgili tür teşhisleri, Akdeniz Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi Biyoloji Bölümü öğretim üyesi Yrd. Doç. Dr. Ramazan GÖKTÜRK tarafından yapılmıştır. 3.2.2. Lokasyon, Tür ve Doğal Populasyonların Tespiti ile Kullanım Amaçlarına Göre Seleksiyonu Çalışılan türlerin doğal olarak bulundukları lokasyonlara önce çiçeklenme dönemlerinde gidilmiş ve projede yardımcı araştırıcı olarak görev alan Yrd. Doç. Dr. Ramazan GÖKTÜRK tarafından türlerin teşhisleri yapılmış, lokaliteleri tanımlanmış, populasyonları, yetişme ortamları belirlenmiş, GPS kayıtları tutulmuş, fotoğrafları çekilmiş ve aşağıdaki fenolojik ve morfolojik gözlemler yapılmıştır. Çiçeklenme tarihi: Alandaki bitkilerin % 50’sinin çiçeklendiği tarih esas alınarak hesaplanmıştır Çiçek Durumu Bitki Boyu (cm): Toprak düzeyi ile bitkilerin en üst noktaları arasından metrik sistemle ölçüm yapılarak hesaplanmıştır. Yaprak Özelliği Meyve Tipi Soğan Durumu Daha sonra aynı lokasyonlara soğanların olgunlaşmaları döneminde (yaprakların sararıp kurumaya başladığı, tohumların oluştuğu dönem) tekrar gidilerek 23 populasyon yoğunluğuna zarar vermeyecek şekilde, göreceli olarak türlerin soğan ve tohum örnekleri toplanmıştır. Soğanlar koruma amaçlı olarak Benlate çözeltisi içerisinde 45 dk bekletildikten sonra da gölgede kurutulup dikim zamanına kadar serin bir ortamda bekletilmişlerdir. 3.2.3. Seçilen Türlerde Kültüre Alma Çalışmaları: 3.2.3.1. Çoğaltım Çalışmaları: 3.2.3.1.1. Arazi Şartlarında Çoğaltım: 3.2.3.1.1.1. Generatif Çoğaltım: Doğal populasyonlardan toplanan türlerden alınan tohum örnekleri önce torf: perlit (1:1) karışımlı viyollere ekilmişler, daha sonra da çimlenen tohumlardan küçük soğan oluşturanlar siyah 7 cm çapındaki plastik saksılara şaşırtılmışlardır. 3.2.3.1.1.2.Vegetatif Çoğaltım: En uygun üretim yöntemlerinin belirlenmesi amacıyla yürütülen bu çalışmada doğadan toplanan Leucojum aestivum türü soğanlara ilk yıl bölme (chipping) yöntemlerinden ikiye bölme, dörde bölme, sekize bölme, ikişerli pullarına ayırma (twin scaling) ve tekli pullarına ayırma (scaling) yöntemleri uygulanmıştır. Ornithogalum türleri içerisinde de materyal olarak en fazla sayıda bulunan O. montanum türünün soğanlarına dörde bölme, sekize bölme, ikişerli pullarına ayırma yöntemleri uygulanmıştır. Bölünen ve pullarına ayrılan soğanlar soğan tablasını da içerek şekilde birbirinden ayrılarak Benlate çözeltisinde (0.6 g/l) 30 dk bekletildikten sonra saksılara dikilmişlerdir. Deneme tesadüf blokları deneme desenine göre 3 tekerrürlü olarak kurulmuş ve her tekerrürde 3’er adet soğan kullanılmıştır. Kontrol uygulaması olarak da soğanlara hiçbir bölme işlemi uygulanmamıştır. İlk yıl boyunca yapılan araştırma ve gözlemlerin sonuçlarına göre soğanlara bölme işlemleri uygulandıktan sonra soğan parçalarının ayrılmadan dikilmesinin yavru soğan oluşturma bakımından daha etkili olduğu kanaatine varılmıştır. Bu nedenle ikinci yıl O. umbellatum ve L. aestivum soğanlarında 2’ye, 4’e ve 8’e bölme işlemleri uygulandıktan sonra soğanlar 24 ayrılmadan dikilmişlerdir. Soğanlar ayrılmadan dikildiğinden pullarına ayırma yöntemi uygulanmamıştır. Deneme tesadüf parselleri deneme desenine göre 3 tekerrürlü olarak kurulmuş ve her tekerrürde 5’er adet soğan kullanılmıştır. Bu denemede elde edilen. verilere tarist istatistik programında varyans analizi uygulanmış ve ortalamalar % 5 önem düzeyinde Duncan testine göre karşılaştırılmıştır. 3.2.3.1.2. İn Vitro Çoğaltım: Türlerin soğan pul yapraklarıyla in vitro çoğaltımlarında, soğanların dış kabukları ve kökleri uzaklaştırıldıktan sonra akan musluk suyu altında soğanlar deterjanla birkaç kez yıkanmış ve daha sonra da çok farklı yüzey sterilizasyon yöntemleri denenmiştir. Bunlar; 1. 30 dk akar su altında, 3 dk % 96’lik etil alkolde, 10 dk. % 20’lik ticari sodyum hipoklorik asitte ve 3 kez steril suda bekletme 2. 30 dk akar su altında, 3 dk % 96’lik etil alkolde, 20 dk. % 35’lik ticari sodyum hipoklorik asitte ve 3 kez steril suda bekletme 3. 30 dk akar su altında, 3 dk % 96’lik etil alkolde, 20 dk. % 80’lik ticari sodyum hipoklorik asitte ve 3 kez steril suda bekletme 4. 30 dk akar su altında, 3 dk % 96’lik etil alkolde, 30 dk. % 80’lik ticari sodyum hipoklorik asitte ve 3 kez steril suda bekletme 5. 30 dk akar su altında, 10 dk ticari sodyum hipoklorik asitte ve 3 kez steril suda bekletme, daha sonra soğanların dış pul yapraklarının uzaklaştırılıp tekrar 30 dk % 80’lik ticari sodyum hipoklorit çözeltisinde ve 3 kez steril suda bekletme 6. 45 dk Benlate çözeltisinde (0.6 g/l) bekletme, daha sonra 5 dk % 96’lik etil alkolde, 45 dk. % 80’lik hipoklorik asitte ve 3 kez steril suda bekletme. Yüzey sterilizasyonu tamamlanan soğanlardan eksplant hazırlanırken çiçek tablasını içerecek şekilde soğanlar soğan büyüklüğüne göre ikiye veya dörde bölünmüştür. Hazırlanan eksplantlar aşağıda farklı hormon dozları içeren MS (Murashige-Skoog, 1962) hazır besi ortamında (Sigma 5519) kültüre alınmışlardır. 25 0.25 mg/l NAA+1 mg/l BA 0.25 mg/l NAA+2 mg/l BA 0.25 mg/l NAA+4 mg/l BA 0.5 mg/l NAA+1mg/l BA 0.5 mg/l NAA+2 mg/l BA 0.5 mg/l NAA+4 mg/l BA Denemeler 3 tekerrürlü olarak yapılmış olup, her bir deneme için araziden toplanan soğan sayılarına göre 3-10 adet eksplant kullanılmıştır. Denemeler ayda bir kez alt kültüre alınmıştır. MS ortamının mineral madde içerikleri Tablo 3.3’de verilmiştir. Ortama tüm aşamalarda 30 g/l sukroz ve 7 g/l agar (Sigma 1296) ilave edilmiştir. Tablo 3.3. Murashige ve Skoog (1962) temel ortamının mineral madde içeriği Makro elementler mg/l Mikro elementler mg/l KNO 3 1900 MnSO 4 .4H 2 O 22.3 NH 4 NO 3 1650 H 3 BO 3 6.2 CaCl 2. 2H 2 O 440 ZnSO 4 .4H 2 O 8.6 MgSO 4 .7H 2 O 370 KI 0.83 KH 2 PO 4 170 Na 2 MoO 4 2H 2 O 0.25 FeSO 4 .7H 2 O 27.8 CuSO 4. 5H 2 0 0.025 Na 2 EDTA.2H 2 O 37.3 CoCl 2 .6H 2 O 0.025 Ortam hazırlığı aşamasında 4.43 g MS (1962) hazır besi ortamı 990 ml saf su içerisinde iyice çözülmüş ve çözüldükten sonra 30 g sakkaroz ve bitki büyüme düzenleyicileri ilave edilmiştir. Ortamların pH’ları otoklavlanmadan önce 0.1 ve 1.0 Normal (N) sodyum hidroksit (NaOH) ve 0.1 ve 1.0 N hidroklorik asit (HCl) kullanılarak 5.7’ye ayarlanmış ve hacimleri 1 l’ye tamamlanmıştır. Otoklavlamadan önce ortamlara 7 g agar eklenerek agar eriyene kadar kaynatılmıştır. Daha sonra ortamlar 121 ºC sıcaklık ve 1.2 kg/ cm 2 basınç altında 20 dakika otoklavlanmıştır. Otoklavlanan ortamlar steril kabine taşınmış ve ortamlar oda sıcaklığına gelene kadar soğumaya bırakılmışlardır. 26 İn vitroda yapılan çalışmalarda, malzeme olarak uzun pens (Sigma 3no’lu) ve 9 cm genişliğinde steril petriler kullanılmıştır. Pensler kullanılmadan önce alüminyum folyoya sarıldıktan sonra 121 ºC sıcaklık ve 1.2 kg/cm 2 basınç altında 20 dk. otoklavlanmıştır. Otoklavlanan malzemeler soğuduktan sonra steril kabin içerisine taşınmışlardır. Pensler sık sık % 96’lık alkole bandırıldıktan sonra alevden geçirilmiştir. Kültür odasında sıcaklık 25 ºC’ye ayarlanmış ve karanlık ortam kullanılmıştır. Sterilizasyonlarında başarı elde edilen eksplantlardan oluşan küçük soğancıkların sayımı yapılarak yeterli büyüklüğe ulaşanlar köklendirme ortamına alınmışlardır. Köklenme ortamı olarak herhangi bir bitki büyüme düzenleyicisi içermeyen MS, MS+0.1 mg/l NAA veya MS+0.5 mg/l NAA ortamları kullanılmıştır. Küçük soğancıklar da belirli bir büyüklüğe ulaşana kadar ayda bir alt kültüre alınarak belirli bir büyüklüğe gelmesi sağlanmış ve yeterli soğan büyüklüğüne ulaşanlar plastik bardakların içerisine doldurulmuş olan 1:1 oranındaki steril torf: perlit ortamına aktarılmışlardır. Bu denemede elde edilen. verilere tarist istatistik programında varyans analizi uygulanmış ve ortalamalar % 5 önem düzeyinde Duncan testine göre karşılaştırılmıştır. 3.2.3.2. Yetiştirme Tekniğine Yönelik Çalışmalar 3.2.3.1. Cam Serada Topraksız Ortamda Değişik Nem Düzeylerinde Yetiştirilen Türlerde Erken Dikim Geç Hasat ve Gübrelemenin İhracat Boyutundaki Soğan Gelişimine Etkileri İle İlgili Çalışmalar Bu çalışmada ihracat boyutuna ulaşmaları uzun zaman alan çiçek soğanlarının daha kısa sürede ihracat boyutuna getirilebilmeleri amacıyla yetiştirme tekniğine yönelik farklı uygulamalar yapılmıştır. Bu amaçla doğal ortamlarından toplanan soğanlar koyu gölge perdesi ile korunmalı cam sera koşullarındaki topraksız kültür ortamına (1:1 hacimsel torf: perlit karışımlı) erken dönemde dikilip (2006 Haziran sonu) geç dönemde (2008 Eylül sonu) sökülmüş ve 2 farklı sulama düzeyi ile tek bir gübreleme programında yetiştirilmişlerdir (Şekil 3. 6). 27 Şekil 3.6 . Doğal ortamlardan söküldükten sonra cam serada topraksız ortamda kültüre alınan Leucojum aestivum ve Ornithogalum türleri Dikimden önce soğanlar topraklarından arındırılmak için önce sudan geçirilmiş (Şekil 7a-b), daha sonra dikim öncesi mantari hastalıklardan korunmak amacıyla 1 lt suya 6 g tartılarak hazırlanan Captan 50 WP (etkili maddesi: Captan) çözeltisi içerisinde 30 dakika bekletilmişlerdir. Dikimden sonra mantari hastalıklara karşı önlem olarak haftada bir dönüşümlü olarak Captan 50 WP (etkili maddesi: Captan) ve Benomyl 50 WP (Benlate) (etkili maddesi: benzimidazole carbamic acid, 1butylcarbamoyl-methyl) ilaçları bitkilerin yapraklarına püskürtülmüştür. Şekil3. 7. (a) Su ile topraklarından arındırılan soğanlar ilaçlama yapılan soğanlar 28 (b) Dikim öncesi koruyucu Uygulanan gübre solüsyonu türlerin doğal ortamlarından ve kültür ortamından alınarak analizleri yapılan toprak örneklerine ve daha önce bu konuda yapılan çalışmalar göz önünde bulundurularak enstitüde bitki besleme uzmanı olarak görev yapan araştırıcı tarafından belirlenmiştir. Gübreleme; makro, mikro element ve asit içeren gübrelerden oluşmuş stok çözeltiden (Tablo 3.4.) yapılmıştır. Uygulama şekli; 100 litre sulama suyuna 1 litre Stok A, 1litre Stok B ve 0.2 litre Asit ile Mikro element stoğundan B stoğunun 1 litresine 10 mililitre olacak şekilde hazırlanmış çözeltiden saksı başına ölçü silindiri ile haftada bir 150 cc verilmiştir. Tablo 3.4. Yetiştirme alanları denemesinde uygulanmış gübreler ve miktarları Stok A (g) Kalsiyum Nitrat: 24.3 Potasyum Nitrat: 31.5 Fe-EDTA: 1.12 % 33 N Amonyum nitrat:6.2 Stok B (g) MKP:17.0 Potasyum Nitrat:31.5 Magnezyum Sülfat:123 Mangan Sülfat. 0.17 Stok C (ml/l) Nitrik asit: 18.4 Çinko Sülfat: 0.14 Borax: 1.14 Bakır Sülfat: 0.012 Sodyum Molibdat: 0.012 Uygulanan sulama programı 1. sulama uygulaması: Bitki başına 1lt , 2.sulama uygulaması: Bitki başına 2 lt olacak şekilde yukarıdaki çizelgede belirtilen gübreleme programı ile birlikte haftada bir kez uygulanmıştır. Deneme 3 tekerrürlü olarak ve her tekerrürde 5 adet soğan bulunacak şekilde (Doğada bulunma sayılarına göre O. narborense türünde 4 adet O. orthophyllum türünde 2-3 adet ) iki farklı sulama düzeyi ve bir gübreleme dozu (kontrol olarak gübresiz olmak üzere) uygulanacak şekilde bölünmüş parseller deneme desenine göre kurulmuştur. Nem ve gübreleme programına bitkilerde yaprak oluşumunun tamamlandığı Eylül ayında başlanmıştır. O döneme kadar yaz aylarında seradaki sıcaklık seviyesinin düşürülmesi amacıyla mistleme ile serada belli bir nem seviyesi oluşturulmuş, haftada bir de soğanları mantari hastalıklardan korumak amacıyla dönüşümlü olarak Benlate ve Captan 50 WP ile ilaçlamaları yapılmıştır. Dikimden önce soğanlarda soğan çapı ve soğan ağırlıkları ölçülmüştür. Söküm sonrası da yine aynı ölçümler tekrarlanarak aradaki fark belirlenmiştir. 29 Çalışmada aşağıdaki gözlemler yapılmıştır. 1. Yaprak Oluşum Tarihleri (gün): Bitkilerin ilk yaprak oluşturdukları tarih esas alınmıştır. 2.Çiçek Sapı Uzunluğu (cm):Toprak düzeyi ile bitkilerin en üst noktaları arasından metrik sistemle ölçüm yapılarak hesaplanmıştır. 3.Dikimden çiçeklenmeye kadar geçen süre (gün): Bitkilerin ilk çiçeklendiği tarih esas alınarak hesaplanmıştır 4.Çiçeklenme tarihleri (gün): parseldeki bitkilerin % 50’sinin çiçeklendiği tarih esas alınarak hesaplanmıştır 5. Bitki Başına Çiçekçik Sayısı (adet/dal): Bir çiçek sapındaki çiçekçiklerin sayısı hesaplanmıştır. 6. Soğan çapı (cm): Digital kumpasla en geniş kısımdan ekvatoral ölçüm yapılarak saptanmıştır 7. Soğan ağırlığı (g): hassas terazi ile ölçüm yapılarak hesaplanmıştır 8.Hasat edilen soğan sayısı (adet/parsel) 9.Yavru soğan sayısı (adet) 10.Yavru Soğan Ağırlığı (g) Bu denemede elde edilen. verilere tarist istatistik programında varyans analizi uygulanmış ve ortalamalar % 5 önem düzeyinde Duncan testine göre karşılaştırılmıştır. 3.2.4. 3.2.4. Varyasyon Oluşturma Çalışmaları 3.2.4.1.Kolhisin İle Muamele Bu çalışmada ilk yıl Ornithogalum sp. ve Leucojum aestivum türlerinin soğanları 5 saat süreyle % 0.2 ve % 0.5 ‘lik kolhisin çözeltisinde bekletilmiş ve daha sonra torf: perlit karışımlı saksılara dikilmişlerdir. Kontrol olarak steril distile su kullanılmıştır. İkinci yıl ise uygulama süresi arttırılmış ve 1. yıl uygulaması yapılan soğanlar yetiştirme ortamından çıkartılarak % 0.2 ve % 0.5’lik kolhisin çözeltisinde 24 saat bekletilmiştir. Ayrıca kimyasalın daha iyi nüfuz etmesi bakımından uygulama öncesi soğanlarda kertik açılmıştır. 30 Çalışmada aşağıdaki gözlemler yapılmıştır. 1.Yaprak Çapı (cm): Yaprak çıkış yerinin 2 cm üzerinden ölçüm yapılmıştır. Ölçüm kalın ve etli yaprak özelliğine sahip türlerde yapılmıştır. 2.Çiçeklenme Tarihleri (gün): Parseldeki bitkilerin % 50’sinin çiçeklendiği tarih esas alınarak hesaplanmıştır 3.Çiçek sapı uzunluğu (cm):Toprak düzeyi ile bitkilerin en üst noktaları arasından metrik sistemle ölçüm yapılarak hesaplanmıştır. Bu denemede elde edilen verilere tarist istatistik programında varyans analizi uygulanmış ve ortalamalar % 5 önem düzeyinde Duncan testine göre karşılaştırılmıştır. 3.2.4.2. Melezleme Çalışmaları Proje teklifinde de belirtildiği gibi ön deneme mahiyetinde melezleme çalışmalarının yapılmasına çalışılmıştır. Melezlemede farklı renkte çeşitler elde edilmesi amaçlanmıştır. Bu nedenle de çalıştığımız türlerle aynı dönemde çiçekte olan ve farklı renklerdeki Fressia sp. ve Fritillaria persica türleri ve ayrıca Ornithogalum’un kültür çeşitleri (O.mount fuji) baba bitkiler olarak kullanılmıştır. İlk olarak ana bitki olarak seçtiğimiz doğal türlerde erkek organlar uzaklaştırılmış (emasküle edilmiş) daha sonra da baba bitki olarak seçilen bitkilerden erkek organlar alınarak ana bitki üzerindeki dişicik tepesi üzerine bir fırça yardımıyla sürülerek tozlama işlemi gerçekleştirilmiştir. Daha sonra yabancı tozlanmaya karşı çiçekler bir tülbent yardımıyla kapatılmıştır. Tozlama işlemi sabah erken saatlerde yapılmış ve erkek organlar anthesis aşamasında toplanmıştır. 31 3.2.5. Moleküler Markerlarla Genetik Uzaklıkların Belirlenmesi 3.2.5.1. DNA izolasyonu: 15.12.2006 tarihindeki DNA izolasyonu için bitkilerin taze uç yaprakları kullanılmıştır. Karşılaştırılan 13 farklı Ornithogalum türünden (Tablo 3.5.) DNA izolasyonu DNA ekstraksiyon kiti (Promega) kullanılarak yapılmıştır. örneklerden iki defa çıkarılan DNA konsantrasyonları agaroz jelde belirlenmiştir. Tablo 3.5. DNA’larına bakılan türler Sıra No Tür 1 O. pamphyllicum 2 O. lanceolatum 3 O. orthphyllum 4 O. armeniacum 5 O. ulouphyllum 6 O. umbellatum 7 O. montanum 8 O. nutans 9 O. wiedemanni (daha sonra Muscari muscarimi olduğu anlaşıldı) 10 O.pyrenaicum 11 O.narborense 12 O.alpigenum 13 O.oligophyllum 14 Leucojum aestivum (kontrol) 15 Lilium candidum (kontrol) 16 Stenbergia lutea (kontrol) 32 Aynı 3.2.5.2. DNA Amplifikasyonu: 16 genotipte toplam 315 markır (249 RAPD, 57 ISSR ve 9 SRAP markırı) oluşturulmuştur. Bunun için 19 RAPD primeri, 6 ISSR primeri ve 2 SRAP primer kombinasyonu kullanilmistir (Tablo 3.6, 3.7). OPERON RAPD primerlerinden I16, L04, M04, M05, M10, M11, I03, I04, I07, I08, I11, I15, M19, F08, F10, B06, F12, ve B03; ISSR (inter simple sequence repeats) primerlerinden (CA)7, (CAC)6, (CA)7C, (CA)7T, (GT)8G, ve (TCC)7; SRAP primerlerinden Me1-Em1, ve Me2-Em1 kombinasyonları kullanılmıştır. Tablo 3.6. Değişik markır sistemleri için kullanılan PCR master mix içerikleri, volumetrik ve konsantrasyon olarak miktarları PCR master Konsantrasyonlar SRAP RAPD ISSR mix Buffer 1X 1.5 µl 1.5 µl 1.5 µl dNTP 0.1 mM 1.0 µl 1.0 µl 1.0 µl MgCl2 2.5 mM 1.5 µl 1.5 µl 1.5 µl Primer1 3-10 µM 2 µl 2 µl 2 µl Primer2 3-10 µM 2 µl - - TAQ enzimi 0.6 U 0.2 µl 0.2 µl 0.2 µl DNA 20 ng/µl 1.0 µl 1.0 µl 1.0 µl 5.8 7.8 7.8 15 µl 15 µl 15 µl Su Toplam hacim 15 µl 33 Tablo 3.7. Markır sistemleri SRAP, RAPD, ISSR ve RGA için haritalamada kullanılan PCR koşulları SRAP RAPD ISSR 1-94 0C 5:00 1-94 0C 3:00 1-94 0C 2:30 2-94 0C 1:00 2-94 0C 1:00 2-94 0C 0:40 3-35 0 C 1:00 3-38 0C 0:45 3-48 0C 0:45 4-72 0 C 4- 72 0C 2:00 4- 72 0C 1:30 5-GO TO 2, 5 TIMES 5-GO TO 2, 35 TIMES 5-GO TO 2, 35 TIMES 6-94 0C 1:00 6-72 0C 10 TIMES 6-72 0C 10 TIMES 7-50 0C 1:00 7-END 7-END 1:00 8-GO TO 6, 35 TIMES 9-72 0C 5 TIMES 10-END 3.2.5.3. Veri Analizleri: DNA bantlarının değerlendirilmesi, bant varsa “1” , yoksa “0” olarak yapılmıştır. Elde edilen bant verileri, NTSYS-pc version 2.0 (Numerical Taxonomy Multivariate Analysis System, NTSYS-pc version 2.1 Exeter Software, Setauket, N.Y., USA, Rohlf, 1993) programında değerlendirilmiştir. Genotipler arasındaki genetik benzerlik, NTSYS-pc programı içerisindeki UPGMA (unweighted pair-group method algorithm)’ daki cluster analiz (SAHN) kullanılarak belirlenmiştir, benzerlik indeksleri Dice (1945)’e göre hesaplanmıştır. 34 4. BULGULAR 4.1. Bitki Sistematiği İle İlgili Bulgular Çalışılan türlerle ilgili tür teşhisleri Davis (1984,1988)’in Flora of Turkey adlı kitabından ve ilgili makalelerden yararlanılarak projede yardımcı araştırıcı olarak görev alan Akdeniz Üniversitesi Botanik Bölümü Öğretim Üyesi tarafından yapılmıştır. 4.2. Lokasyon, Tür ve Doğal Populasyonların Tespiti ile Kullanım Amaçlarına Göre Seleksiyonu İle İlgili Bulgular Çalışılan türlerin doğal olarak bulundukları lokalitelerde yapılan arazi çalışmaları ve yapılan fenolojik gözlemlerde belirlenen vegetatif ve generatif dönemler Tablo 4.8 ‘de verilmiştir. Tablo 4.8. Ornithogalum cinsi ve Leucojum aestivum türlerinde yapılan arazi çalışmaları TARİH LOKALİTELER 20.03.2006 Antalya Merkez (Akdeniz Üniversitesi Kampus alanı) 09.04.2006 Antalya- Akseki-Manavgat çevreleri 14.04.2006 Antalya -Korkuteli-Elmalı Finike-Kumluca çevreleri 17.04.2006 20.04.2006 21.04.2006 01.05.2006 ÇİÇEKLENME DÖNEMİNDE BELİRLENEN TÜRLER O. narborense O. montanum O. orthophyllum OLGUNLAŞMA DÖNEMİNDE TOPLANAN TÜRLER O. narborense O. ulophyllum, O. pyrenaicum O. montanum O. lanceolatum O. orthophyllum O. orthophyllum Antalya-Geyik bayırı-Feslikan Saklıkent O. nutans, yaylaları ve Manavgat Köprülü kanyon Zerk O. pamhyllicum üzeri O. wiedemannii Antalya-Kemer Tahtalı dağı, KumlucaO. alpigenum Finike çevreleri Antalya- Serik İbradı-Akseki-Manavgat O. umbellatum çevreleri O. oligophyllum Antalya-Gündoğmuş Akseki-İbradı— O. oligophyllum 35 Manavgat çevreleri 15.05.2006 Antalya- Merkez Termessos- KorkuteliElmalı Finike-Kumluca çevreleri O. narborense 22.05.2006 Antalya-Serik çevresi, Feslikan ve Saklıkent yaylası 09.06.2006 Antalya-Manavgat Köprülü Kanyon Zerk üzeri, Akseki-Beyşehir çevreleri 23.06.2006 Antalya-Korkuteli-Elmalı çevresi 26.02.2007 Antalya Manavgat Köprülü Kanyon çevresi O. sigmoideum 19.03.2007 Antalya Manavgat Köprülü Kanyon çevresi Gündoğmuş çevresi 27.04.2007 Antalya Kemer Beycik köyü Üçoluk Yaylası O. oligophllum 14.05.2007 Antalya Akdeniz Üniversitesi Kampus alanı O. narborense 21.05.2007 Antalya İbradı, Akseki-Beyşehir çevresi Kurucuova Yeşildağ-İskele arası 22.05.2007 Antalya Manavgat Köprülü Kanyon Zerk üzeri 31.05.2007 Antalya Kemer Çıralı, Antalya Geyikbayırı Feslikan Yaylası 08.06.2007 Antalya Korkuteli Elmalı, Finike Kumluca çevresi O. orthophyllum O. armeniacum O. montanum O. lanceolatum O. ulophyllum O. umbellatum O. nutans, O. pamhyllicum Leucojum aestivum O.narborense O. pyrenaicum O. sigmoideum O. isauricum (endemik) Leucojum aestivum O.armeniacum (tohum) O. pyrenaicum (tohum) O. nutans (tohum) O. sümbülianum O.narborense (tohum) O.pyrenaicum (tohum) Yürütülen arazi çalışmaları sonucu belirlenen Ornithogalum cinsine ait türler ve Leucojum aestivum türünün lokaliteleri, populasyonları ve bazı bitkisel özellikleri Tablo 4.9 ‘da verilmiştir. 36 Çizelge 4.9. Türlerin doğal populasyondaki özellikleri Tür O. armeniacum Adı Lokalite Termesos dağı Gündoğmuş’a 23 km kala Serinyaka köyü girişi İbradı Yukarı mah. Hisar önü Elmalı Sedir Araştırma Ormanı yolu başlangıcı Akseki Cevizli Çakıllı Geçidi O. narborense O. lanceolatum O. montanum İbradı Ormana Köyü Makilik al. Kayalıktaş lık yamaç Kayalık nemli alan Düşük (20-30 civarı) Düşük (20 civarı) Makilik taşlık alan Yüksek (300 civarı) Çok yüksek (600-700 civarı) Yüksek (200 civarı) Makilik taşlık alan Makilik kireçtaşlı kayalık alanlar Rakım (m) GPS Değerleri Nisan başı 620 620 Çiçeklen me Tarihi (gün) 364735.1 314957.2 4-5 Nisan 1075 370550.3 313602.5 Nisan ortası 1089 363602.3 295735.3 Nisan ortası Çiçek Durumu Salkım silindirik (çiçek sapı gövdesi tüylü) Çiçe k Sapı Uzu n (cm) 1025 Yaprak Özelliği Meyve Tipi Soğ an Duru mu İnce uzun şeritsi ve tüylü, çiçeklenme de tüyler kayboluyor Kapsül yuvarlak 5-6 loblu Orta yuva rlak 1210 371028.7 314758.3 Mayıs başı 978 370436.8 313538.3 Nisan ortası Ranunculus Muscari Makilik kireçtaşlı kayalık alanlar Yüksek (300 civarı) 12731313 arası 363528.5 295835.0 Nisan sonu Yıldız şekilli 1025 cm (en fazla 40 cm) Mat gri yeşil, kalın etli kaşıksı Kanatsız kalın yuvarlak kapsül Büyü k Yuva rlak beya z renkli Elmalı Sedir Araştırma Ormanı Çamkuyusu Lojmanları Taban suyunun çekildiği oldukça nemli düz çayırlık alan Yol kenarı Makilik alan Çok yüksek (500 civarı) 1593 363521.5 300126.4 Nisan ortası Salkım hemen hemen toprak seviyesi nde Yok sayılı r Parlak, açık yeşil kalın etli, kıvırcık ters mızraksı Kanatsız kalın yuvarlak kapsül Büyü k Oval Düşük (30 civarı) 49 365352.8 303952.9 Nisan ortası 25-35 cm İnce uzun Kapsül Büyü k, yuva rlak Yol kenarı nemli, kireçtaşlı alanlar Orta (50-75 civarı) 1210 371028.7 314758.3 Mayıs sonuna yakın Yıldız şekilli çıplak gövdede primidal salkım şeklinde (başak gibi) Açık düz çayırlıklar Düşük (20-30 civarı) 1080 363815.3 302533.1 Mayıs ortası Çok kayalık kireçtaşlı yamaçlar Düşük (30 civarı) 645 370218.8 313731.2 Nisan sonuMayıs başı Akdeniz Üniversitesi Kampüs Alanı Sağlık Bilimleri Meslek Yüksek Okulu ve Kreş önü Akseki Cevizli Çakıllı Geçidi Kemer Ovacık Yaylası İbradı Gembos yaylası (Karamuklu mevkii) Nemli açık yamaçlar Yüksek (300 civarı) Alandaki diğer bitkiler Geranium Elmalı Sedir Araştırma Ormanı yolu başlangıcı Manavgat Altınbeşik Mağarası Girişi O. oligophyllum Yetişme Ortamı Populasy on Yoğunluğ u (adet) 1478 371238.1 312938.4 Mart ortasını geçince (20 Mart civarı) 37 Doğrusal yarı dik gri-yeşil Frittillaria pinardi Muscari Ranunculus Muscari neglectum 30-35 cm Yıldız şekilli 30-35 cm 10-15 cm Geniş puslu uzunluğu yaklaşık 20 cm Kanatsız kalın yuvarlak kapsül Küçü k yuva rlak Birçok soğanlı bitki (geofit cenneti) O. umbellatum O. orthopyllum O. pamphylicum (endemik) Nemli açık Çayırlıklar Akdeniz Üniversitesi Kampüs Alanı Sağlık Bilimleri Meslek Yüksek Okulu önü Eski Korkuteli Yolu Yenice Köyü Girişi Feslikan Yaylasına gelmeden Sakarpınarı mevkii Elmalı Çığlıkara Ormanı Taşlık, kayalık kireçtaşlı yamaçlar Feslikan Yaylası Yol kenarı, nemli az yamaçlı kumluk açık alanlar Orta (100-150) Kemer Tahtalı Dağı Kayalık, oldukça dik yamaç, step arazi Korkuteli Kızılcadağ arası Elmalı Finike arası Göltarla mevkii O.pyrenaicum O. ulouphyllum O. alpigenum (endemik) O. nutans Serik Burmahancı Köyü Akseki Ömer Duruk Tesisleri Önü Orta (50 civarı) 15 365628.8 310350.1 Mart ortasına gelmeden (8 -10 Mart arası) Yol kenarı düz alan Düşük (30 civarı) 35 365349.7 303915.1 Mart ortasına gelmeden (8 -10 Mart arası) Yol kenarı kireçtaşlı düz alan, ağaç altı Orta (5080 civarı) 402 370043.3 302902.1 Orta (80100) 1787 365049.2 302449.4 Mart ortasını geçince (20 mart civarı) Mayıs ortası 2016 364858.8 302226.6 Mayıs ortasını geçince (20 Mayıs) Mayıs başı Yüksek (300-350) 17972010 arasın da 363227.4 302509.1 Mayıs ortasını geçince 25 Mayıs civarı Kireçtaşlı, kayalık yamaçlar Orta (100-150 civarı) 663 370102.3 295825.6 Mayıs ortası Yamaç, makilik alan Orta (100 civarı) 1172 363319.7 295820.8 Mayıs ortasını geçince25 Mayıs civarı Yol kenarı, düz alan 10-20 cm Yaprağın üst kısmı beyaz düz çizgili İnce uzun kapsül Bir sapta 310 arası çiçek tomurcu ğu 5-10 cm Çok ince şeritsi Yuvarlak kapsül Bir sapta 27 çiçek tomurcu ğu 7-8 3-13 adet ince şeritsi Yumurta msı, yumurta msısilindirik Çok sayıd a diş şekli nde yavr u soğa n orta yuva rlak Küçü k yuva rlak O.narboren se, Bellavalia Küçü k, uzun oval Tulipa 38 20-60 cm Şeritsi, yarı dik 10-15 cm Şeritsi, tüy gibi çok ince Küçük yıldız şekilli 20-25 cm İnce şeritsi Petaller yeşil çizgili 20-45 cm İnce şeritsi Yıldız şekilli, aşağı doğru bakmakt a, gümüşbeyaz renkte, petaller yeşil çizgili Küçük yıldız şekilli İri, kalın uzun kapsül Çok sayıd a soğa ncıklı orta büyü klükt e, yuva rlak Uzun -oval küçü k Küçük yuvarlak kapsül Geranium , Cyclamen , Anemone blanda Orta büyü klükt e, uzun -oval Küçü k oval Maki, çalılar O. sigmoideum O. isauricum (endemik) Leucojum aestivum Manavgat Köprülü Kanyon Taşağıl mevkiini geçince Beşkonak’a gelmeden Manavgat Gündoğmuş arası Beyşehir çevresi Kurucuova Yeşildağ-İskele arası Nemli düz , kumul bir alan Orta (50-80 civarı) 74 370437.2 311411.7 Şubat ortası Bir sapta 35 çiçek 10-15 cm doğrusal İri kalın kapsül Yol kenarı Çok sayıda kireçtaşlı yamaçlar Orta (50-60 civarı) 600 364728.7 314947.7 Mart ortası 5-10 cm doğrusal Küçük yuvarlak kapsül Küçü k yuva rlak Pinus brutia altında bulunuyor Göl kenarı, bataklık, sazlık alanlar Yüksek (500 civarı) 1142 373418.4 312831.9 Nisan sonu Bir sapta oldukça çok çiçek (20’ye yakın) Bir sapta 35 çiçek 15-35 cm Parlak koyu yeşil doğrusal İri kalın kapsül Orta büyü klükt e oval Butomus umbellatus Çalışılan türlerin çiçeklenme durumları Şekil 4. 8 a-n ‘de verilmiştir. Şekil 4.8. Ornithogalum türlerinin çiçeklenme dönemindeki durumları (a) O. armeniacum (b) O. alpigenum (endemik) (c) O. lanceolatum (d) 39 O. oligophyllum Anemone, Gagea, daphne serica, Romulea (e) O. narborense (f) O .montanum (g)O. nutans (h) O. pyrenaicum 40 (I) O. pamphyllicum (endemik) (k) (İ) O. orthophyllum (l) …………(m) O. sigmoideum O. isauricum (endemik) (n) 41 O. umbellatum Leucojum aestivum 4.3.Seçilen Türlerde Kültüre Alma Çalışmaları ile İlgili Bulgular 4.3.1. Çoğaltım Çalışmaları ile İlgili Bulgular 4.3.1.1. Arazi Şartlarında Çoğaltım ile İlgili Bulgular 4.3.1.1.1. Generatif Çoğaltım ile İlgili Bulgular Doğal ortamlarından Mayıs-Haziran ayları döneminde toplanan Ornithogalum ve Leucojum türlerine ait tohumlar çimlenmenin kolaylaştırılması amacıyla 24 saat GA 3 çözeltisiyle muamele edildikten sonra bekletilmeksizin yaz döneminde torf: perlit (1:1) karışımlı saksılara ekilmişlerdir. Ancak bu dönemde yaz aylarındaki yüksek sıcaklıklardan dolayı tohumların dormansi göstermesi ihtimali nedeniyle tohumlarda çimlenme faaliyeti gözlenmemiştir. Daha sonra tohum ekimleri Ekim başında tekrarlanmıştır. Bu dönemin sonunda türlerde elde edilen çimlenme miktarları ve yüzdeleri Tablo 4.10’da, çimlenen tohumların görünümleri Şekil 4.9, 4.10. ve 4.11 ’de verilmiştir. Tohum ekiminden yaklaşık 3 ay sonra soğancık oluşumlarının başlamasıyla bitkiler saksılara şaşırtılmışlardır. Bir yılın sonundaki soğancıkların görünümü Şekil 4.12 , 4.13 ve 4.14’te gösterilmiştir. Tablo 4.10. Çalışılan türlerin tohumlarının çimlenme özellikleri Türler O. lanceolatum Ekilen tohum Çimlenen sayısı (adet) tohum sayısı (adet) 600 60 Çimlenme yüzdesi (%) 10.0 O.armeniacum 600 45 7.5 O. narborense 600 150 25 O. ulouphyllum 600 -- -- O. nutans 600 55 9.2 O. pyrenaicum 600 600 100.0 O. sümbülianum 600 135 22.5 Leucojum aestivum 600 30 5.0 O. montanum 600 36 6.0 42 Şekil 4.9 O. pyrenaicum türü ve O.sümbülianum türünde çimlenmiş tohumlar Şekil 4. 10. O. nutans türü ve O.armeniacum türünde çimlenmiş tohumlar 43 Şekil 4.11. O. montanum türünde çimlenmiş tohumlar Şekil 4.12. O. pyrenaicum türünün tohumlarından 1. yıl sonunda oluşan soğancıkların görünümü 44 Şekil 4.13 .O.sümbülianum türünün tohumlarından oluşan soğancıkların görünümü Şekil 4.14 .O.lanceolatum türünün tohumlarından oluşan soğancıkların görünümü 45 4.3.1.1.2. Vegetatif Çoğaltım İle İlgili Bulgular: Uygulanan çoğaltım yöntemleri Şekil 15 a, b, c‘de verilmiştir. Şekil 4.15. Bölme Yöntemleri (a) İkiye bölme (b) Dörde bölme (c) Sekize Bölme Ornithogalum umbellatum ve Ornithogalum montanum türlerinde yapılan çoğaltım yöntemlerine ait görünüm Şekil 16 a, b‘de verilmiştir. Şekil 4. 16. (a) Ornithogalum umbellatum 46 (b) Ornithogalum montanum Leucojum aestivum türünde yapılan çoğaltım yöntemleri ise Şekil 4.17‘de verilmiştir. Şekil 4. 17. Leucojum aestivum türünde yapılan çoğaltım yöntemleri İlk yıl vegetatif çoğaltım yöntemi uygulanan Leucojum aestivum türüne ait bulgular Tablo 4.11 ‘de, elde edilen yavru soğanların görünümleri ise Şekil 4.18 a-f de verilmiştir. Tablo 4.11. Leucojum aestivum türünde 1. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri BÖLME YÖNTEMLERİ (1. yıl) Leucojum aestivum Kontrol 4’ e bölme 8’e bölme 2’ li pullarına Tekli ayırma pullarına ayırma Oluşan yavru 3.67 c* 8.67 ab 13.00 a 10.00 ab 8.00 b 2.44 a* 1.78 b 1.56 b 1.43 b 1.42 b 4.53 b** 31.49 a 7.73 b 5.84 b 4.60 b 0.72* a 0.54 a 0.21 b sayısı (adet) Yavru soğan çapı (cm) Yavru soğan Ağırlığı (g) Bölme başına elde edilen yavru soğan sayısı (adet) Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. 47 0.22 b Tablo 4.11’den de görüldüğü gibi Leucojum aestivum türünde 1. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu ile soğan çapı üzerinde istatistiksel anlamda (P <0,05) ve ağırlıkları (P <0,01) üzerinde önemli etkileri olmuştur. Bölme miktarı arttıkça yavru soğan sayısı artmış, ancak bölme başına elde edilen yavru sayısı bakımından en az bölme yöntemi uygulanan soğanlardan en iyi sonuçlar elde edilmiştir. Leucojum aestivum türünde ikinci yıl uygulanan vegetatif çoğaltım yöntemine ait bulgular ise Tablo 4.12’de verilmiştir. Tablo 4.12. Leucojum aestivum türünde 2. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri BÖLME YÖNTEMLERİ (2. yıl) Leucojum aestivum Kontrol 2 ye bölme 4 e bölme 8 e bölme Oluşan yavru sayısı (adet) 4.33 d** 7.67 c 14.67 b 21.67 a Yavru soğan çapı (cm) 1.77 a** 1.52 b 1.30 c 1.01 d Yavru soğan Ağırlığı (g) 4.53 a ** 4.76 a 3.35 a 1.46 b 0.77 a* 0.73 a 0.55 b Bölme başına elde edilen yavru soğan sayısı (adet) Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. 2. yıl değerlerinde de benzer sonuçlara ulaşılmış, bölme yöntemlerinin yavru soğan oluşumu ile soğan çapı ve ağırlıkları (P <0,01) üzerinde istatistiksel anlamda önemli etkileri olmuştur. (a) Kontrol (b) 2’ye bölme 48 (c) 4’e bölme (d) 8’e bölme (e) İkili pullarına ayırma (f) Tekli pullarına ayırma Şekil 4.18.a,b,c,d,e,f. Leucojum aestivum türüne uygulanan çoğaltım yöntemlerinden elde edilen yavru soğanların görünümleri Ornithogalum montanum türüne ait bulgular Tablo 4.13’de, elde edilen yavru soğanların görünümleri Şekil 4.19’ da, Ornithogalum umbellatum türüne ait bulgular Tablo 4.14’de, elde edilen yavru soğanların görünümleri ise Şekil 4.20 a-c’de verilmiştir. Tablo 4.13. Ornithogalum montanum türünde 1. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri BÖLME YÖNTEMLERİ (1. yıl) Ornithogalum montanum Kontrol 4’e bölme 8’e bölme 2’li pullarına Tekli ayırma pullarına ayırma Oluşan yavru 3.00 c** 8.33 b 11.67 ab 12.00 a 1.73 a** 1.14 c 1.01 cd 0.93 d 10.33 ab sayısı (adet) Yavru soğan çapı 49 1.46 b (cm) Yavru soğan 4.03 ağırlığı (g) bc** Bölme başına elde 3.44 c 6.86 a 5.05 b 6.90 a 0.69 a** 0.48 b 0.25 c 0.29 c edilen yavru soğan sayısı (adet) Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Şekil 4.19. Ornithogalum montanum türüne uygulanan tüm çoğaltım yöntemlerinden elde edilen yavru soğanların görünümleri Tablo 4.14. Ornithogalum umbellatum türünde 2. yıl uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu üzerine etkileri BÖLME YÖNTEMLERİ (2. yıl) Ornithogalum umbellatum Oluşan yavru sayısı (adet) Kontrol 2’ye bölme 4’e bölme 8’e bölme 4.33 c** 7.33 bc 10.33 ab 14.33 a ** Yavru soğan çapı (cm) 1.53 a 1.55 a 1.14 b 1.09 b Yavru soğan ağırlığı (g) 2.73 aö.d. 4.73 a 2.78 a 5.77 a 0.73 a* 0.52 ab 0.36 b Bölme başına elde edilen yavru soğan sayısı (adet) 50 (a) 2’ye bölme (b) 4’e bölme (c) 8’e bölme Şekil 4.20 a,b,c. Ornithogalum umbellatum türüne uygulanan çoğaltım yöntemlerinden elde edilen yavru soğanların görünümleri Ornithogalum türlerinde de uygulanan çoğaltım yöntemlerinin yavru soğan oluşumu ile soğan çapı ve ağırlıkları üzerinde istatistiksel anlamda (P <0,01) önemli etkileri olmuştur. Bölme miktarı arttıkça yavru soğan sayısı artmış, ancak bölme başına elde edilen yavru sayısı bakımından en az bölme yöntemi uygulanan soğanlardan en iyi sonuçlar elde edilmiştir. 51 4.3.1.1.3. İn Vitro Çoğaltım İle İlgili Bulgular Yöntem kısmında belirtilen soğanlara uygulanan farklı yüzey sterilizasyon yöntemlerinden en etkili olanı; soğanların dış kabukları ve kökleri uzaklaştırıldıktan sonra akan musluk suyu altında soğanların deterjanla birkaç kez yıkanması, iyice durulanan soğanların % 10’luk ticari sodyum hipoklorit çözeltisinde sürekli karıştırılarak 10 dakika bekletilmesi, 3 kez 5’er dakika steril su ile durulandıktan sonra soğanların dış pul yapraklarının uzaklaştırılıp tekrar % 80’lik ticari sodyum hipoklorit çözeltisinde sürekli karıştırılarak 30 dakika bekletilmesi ve 3 kez 5’er dakika steril su ile durulanmasıdır. Hormon destekli MS ortamında kültüre alınan eksplantlardan 15-20 gün içinde sonra yeni soğancık oluşumu başlamıştır. 5 aylık kültürlerde soğanlar oldukça iyi gelişmiş olup, köklenme ortamına transfer edilecek duruma gelmişlerdir (Şekil 4. 2139). Elde edilen bulgular Tablo 4.15.‘de verilmiştir. Ayrıca tohumdan in vitro çoğaltım yönteminin denendiği çalışmada O. lanceolatum türünün tohum ekimleri yapılmış, önce kallus oluşmuş sonra, kallus yüzeyinden soğan ve yeni yaprak oluşumları elde edilmiştir (Şekil 4.22). Şekil 4.21. Sterilizasyonu başarılan kültür ortamındaki eksplantlar Şekil 4. 22. 4 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAA ortamında O. lanceolatum türünün tohumundan gelişen soğanlar 52 Şekil 4. 23. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O.umbellatum türünün explantlarından oluşan soğanlar Şekil 4. 24. 4 mg/l BAP+0.5 mg/ lNAA ortamında O.umbellatum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar 53 Şekil 4.25. 1 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAA ortamında O. oligophyllum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4. 26. 4 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAA ortamında O. oligophyllum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar 54 Şekil 4.27. 1 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAA ortamında O. oligophyllum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4.28. 1 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAAA ortamında O. sigmoideum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar 55 Şekil 4.29. 2 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAAA ortamında O. sigmoideum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4.30. 1 mg/l BAP+ 0.5 mg/l NAAA ortamında O. sigmoideum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar 56 Şekil 4.31. 2 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. narborense türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4.32. 4 mg/l BAP+0.25 mg/l NAA ortamında O. narborense türünün eksplantlarından oluşan soğanlar 57 Şekil 4.33. 1 mg/l BAP+0. 5 mg/l NAA ortamında O. narborense türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4.34. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. sümbülianum türünün 4 pul yapraklı eksplantlarından oluşan soğanlar 58 Şekil 4.35. 1 mg/l BAP+ 0.25 mg/l NAA ortamında O. pyrenaicum türünün 4 pul yapraklı eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4.36. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. lanceolatum türünün 4 pul yapraklı eksplantlarından oluşan soğanlar . 59 Şekil 4.37. 4 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. montanum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Şekil 4.38. 1 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O. lanceolatum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar 60 Şekil 4.39. 1 mg/l BAP+0.5 mg/l NAA ortamında O.isauricum türünün eksplantlarından oluşan soğanlar Tablo 4.15. Farklı Ornithogalum türlerinin 4 pul eksplantından in vitro çoğaltım ile elde edilen ortalama soğan sayıları (adet) 1 BAP+ 0.25 NAA 1 BAP+ 0.5 NAA O. umbellatum 19.00 Aax 7.00 Ba HORMON DOZLARI 2BAP+ 2 BAP+ 4 BAP+ 0.25 0. 5 NAA 0.25 NAA NAA 3.67 Ba 6.67 Ba 6.67 Ba O.oligophyllum O.sigmoideum O.narborense 14.33 Ab 3.00 Ac 3.67 ABc 5.33 Babc 2.33 Abcd 6.33 Aab 4.00 Ba 2.67 Aa 4.00 Aba O.sümbülianum O.pyrenaicum O.lanceolatum O.isauricum O.montanum O.nutans ORT 2.33 Ac 1.33 A c 3.00 Bc 0.00 Ac 0.00 Ac 0.00 Ac 4.67** 5.00 Aabc 1.67 Acd 7.33 Aa 1.33 Acd 3.33 Aabcd 0.00 Ad 3.97 3.33 Aa 2.67 Aa 2.33 Ba 0.00 Aa 0.00 Aa 0.00 Aa 2.27 TÜRLER 5.00 Bab 1.67 Abc 4.33 ABabc 4.33 Aabc 1.67 Abc 2.67 Babc 1.33 Abc 0.00 Ac 0.00 Ac 2.77 4 BAP+ 0.5 NAA ORT (adet) 21.67 Aa 10.78** 2.00 Bbc 2.33 Ab 1.67 Bb 4.33 Bbc 4.33 Ab 6.33 Ab 5.83 2.72 4.39 2.33 Abc 2.67 Abc 2.67 Bb 2.67 Ac 0.00 Abc 0.00 Ac 2.30 2.33 Abc 2.33 Abc 5.67 ABb 0.00 Ac 2.00 Abc 0.67 Ac 4.97 3.28 2.06 3.94 0.89 0.89 0.11 3.49 x: Büyük harfler yatay verilen ortalamaların (satır boyunca), küçük harfler ise dikey (sütun boyunca) verilen ortalamaların karşılaştırmalarını göstermektedir. Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. 61 İn vitro çoğaltımda elde edilen soğan sayıları açısından ortama eklenen farklı hormonların istatistiksel açıdan (P<0,01) önemli olduğu bulunmuştur. 1 BAP+0.5 NAA ve 4 BAP+ 0.5 NAA ortamları soğan oluşturma bakımından en etkili ortamlar olmuştur. En fazla soğan sayısı O. umbellatum türünden elde edilmiştir. Leucojum aestivum türünde ise bulaşıklık probleminin üstesinden gelinememiştir. İn vitrodan elde edilen steril ve yeterli soğan büyüklüğüne ulaşmış olan soğanlar 1:1 oranındaki steril torf: perlit ortamına aktarılmışlardır (Şekil 4. 40 a, b, c, d). a b c d Şekil 4. 40. a, b, c, d. Steril soğanların steril yetiştirme ortamına aktarılması 62 4.4 Yetiştirme Tekniğine Yönelik Çalışmalar ile İlgili Bulgular 4.4.1. Cam Serada Topraksız Ortamda Değişik Nem Düzeylerinde Yetiştirilen Türlerde Erken Dikim Geç Hasat ve Gübrelemenin İhracat Boyutundaki Soğan Gelişimine Etkileri İle İlgili Çalışmalar ile İlgili Bulgular Cam serada topraksız ortamda farklı sulama düzeylerinde yetiştirilen türlerin görünümleri Şekil 41’ de verilmiştir. Şekil 4.41.Cam serada topraksız ortamda farklı sulama düzeylerinde yetiştirilen türlerin görünümleri Cam serada topraksız ortamda yetiştirilen türlerde yaprak oluşum tarihi (gün), Tablo 4.16, dikimden çiçeklenmeye kadar geçen süre (gün) ve çiçeklenme tarihleri ile ilgili bulguları Tablo 4.17 ‘de, ortalama çiçek sapı uzunlukları ve bitki başına çiçekçik sayıları da Tablo 4.18’de verilmiştir. 63 Tablo 4.16. Cam serada topraksız ortamda yetiştirilen türlerin yaprak oluşum tarihleri Türler İlk Yaprak Oluşum Tarihleri (gün) 1. yıl 1 Ekim 2006 2. yıl 1 Aralık 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 2 ay sonra) 5 Aralık 2006 5 Aralık 2007 (1.yıldaki ile aynı dönemde) 1 Aralık 2006 20 Eylül 2006 25 Eylül 2006 1 Eylül 2006 1 Ekim 2006 1 Eylül 2006 6 Ekim 2006 14 Aralık 2006 14 Eylül 2006 14 Aralık 2006 7 Ağustos 2006 5 Aralık 2007 (1.yıldaki ile yaklaşık aynı dönemde) 15 Ekim 2007 (1.yıldaki ile yaklaşık 1 ay sonra) 15 Ekim 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 3 hafta sonra) 5 Aralık 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 3 ay sonra) 1 Kasım 2007 (1.yıldaki ile yaklaşık aynı dönemde) 1 Ekim 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 2 hafta sonra) 15 Ekim 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 1 hafta sonra) 15 Ocak 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 1 ay sonra) 1 Ekim 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 2 hafta sonra) 15 Ocak 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 1 ay sonra) 15 Ağustos 2007 (1.yıldakinden yaklaşık 1 hafta sonra) O. narborense O. pyrenaicum O. nutans O. montanum O. umbellatum O. oligophyllum O. ulouphyllum O. armeniacum O. orthophyllum O. pamhyllicum O. lanceolatum O. alpigenum Leucojum aestivum Tablo 4.17. Cam serada topraksız ortamda yetiştirilen türlerin çiçeklenme özellikleri Türler Dikimden Çiçeklenmeye Kadar Geçen Süre (gün) Çiçeklenme Tarihleri (gün) 1.yıl 2.yıl 266 8 20 Mart 2007 25 Mart 2008 (1. yıldaki ile yaklaşık aynı dönemde)- O. narborense 268 10 22 Mart 2007 O. pyrenaicum O. nutans 1 Nisan 2008 (1. yıldakinden yaklaşık 10 gün sonra) 228 5 10 Şubat 2007 O. montanum 247 7 01 Mart 2007 O. umbellatum 237 6 19 Şubat 2007 O. oligophyllum 210 3 23 Ocak 2006 O. ulouphyllum 295 11 15 Nisan 2007 O. armeniacum 268 9 22 Mart 2007 O. orthophyllum 213 4 26 Ocak 2006 O. pamhyllicum 302 12 25 Nisan 2007 O. lanceolatum 176 1 20 Aralık 2006 O. alpigenum 307 13 30 Nisan 2007 Leucojum aestivum 183 2 27 Aralık 2006 3 Mart 2008 (1. yıldakinden yaklaşık 3 hafta sonra) 15 Şubat 2008 (1. yıldakinden yaklaşık 2 hafta önce) 15 Şubat 2008 (1. yıldaki ile yaklaşık aynı dönemde)15 Şubat 2007 (1. yıldakinden yaklaşık 3 hafta sonra) 27 Nisan 2008 (1. yıldakinden yaklaşık 2 hafta sonra)-25 Mart 2008 (1. yıldaki ile yaklaşık aynı dönemde)15 Şubat 2007 (1. yıldakinden yaklaşık 3 hafta sonra) 15 Nisan 2008 1. yıldakinden yaklaşık 2 hafta önce) 5 Aralık 2007 (1. yıldakinden yaklaşık 2 hafta önce) 15 Nisan 2008 1. yıldakinden yaklaşık 2 hafta önce) 13 Aralık 2007 (1. yıldakinden yaklaşık 2 hafta önce) 64 Tablo 4.17.’de görüldüğü gibi ilk çiçeklenme O.lanceolatum ve Leucojum aestivum türlerinde Aralık sonunda gerçekleşmiştir. Doğal ortamlarında yapılan gözlemlerde ise bu türlerin ilk çiçeklenmesinin 2. gelişme raporunda da bildirildiği gibi Mart ortasından itibaren başladığı görülmektedir. Türlerin çiçeklenme durumlarına ait görünümleri ise Şekil 4. 42 ‘de verilmiştir. Şekil 4.42 .Türlerin çiçeklenme durumları Tablo 4.18. Türlerin ortalama çiçek sapı uzunlukları ve bitki başına çiçekçik sayıları Türler O. narborense O. pyrenaicum O. nutans O. montanum O. umbellatum Ortalama Çiçek Sapı Uzunluğu (cm) Ortalama Bitki Başına Çiçekçik Sayısı (adet/dal) Kontrol 52.00 aö.d 26.00 aöd 1.sulama 2.sulama Kontrol 1.sulama 2.sulama Kontrol 1.sulama 2.sulama Kontrol 1.sulama 2.sulama Kontrol 1.sulama 55,75 a 57,33 a 17.93 a öd. 21,50 a 21,75 a 7.17 aöd. 9,13 a 7,33 a 9.79 b * 13,00 a 12,00 ab 15.13 b* 18,00 a 31.67 a 39,33 a 10.00 aöd 14,33 a 15,00 a 3.33 aöd 5.33 a 4,55 a 8.50 aöd. 13.82 a 15,00 a 5.33 b* 14,19 a Sulama 65 2.sulama 17,80 a Kontrol 8.00 b* 1.sulama 9,25 a O. oligophyllum 2.sulama 8,20 b Kontrol 5,88 aöd. 1.sulama 6,63 a O. ulouphyllum 2.sulama 5,63 a Kontrol 5.03 ab* 1.sulama 6,00 a O. armeniacum 2.sulama 4,50 b Kontrol 2.77 aöd. 1.sulama 3,00 a O. orthophyllum 2.sulama 2,67 a Kontrol 4.57 a 1.sulama 4,00 a O. pamhyllicum 2.sulama 3,50 a Kontrol 2.00 a 1.sulama 2,00 a öd O. lanceolatum 2.sulama 2,00 a Kontrol 6.03 a* 1.sulama 5,00 ab O. alpigenum 2.sulama 4,00 b Kontrol 21.17 aöd Leucojum 1.sulama 20,80a aestivum 2.sulama 23,00 a Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. 15.00 a 7.60 aöd. 7,60 a 7,50 a 9.00 b** 10.78 a 7.08 c 6.67 b* 8,00 ab 10,00 a 9.33 aöd 10,00 a 9,33 a 2.00 aöd 2,50 a 2,50 a 5,67 aöd 4.80 a 3,33 a 6.00 a öd 8.33 a 6.33 a 2.67 ab* 3.56 a 2.00 b Cam serada topraksız ortamda yetiştirilen türlerde farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının soğan çaplarına etkileriyle ilgili veriler ve istatistiksel değerlendirmeler Tablo 4.19., soğan ağırlıklarıyla ilgili veriler Tablo 4.20.’de, parselden hasat edilen soğan sayıları ise Tablo 4.21.’de verilmiştir. Tablo 4.19. Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının türlerin soğan çaplarına etkileri (cm) TÜRLER Kontrol 1. sulama (1lt/bitki) 2. sulama (2lt/bitki) 2.28 b** 3.13 a 3.39 a 1.72 aöd. 1.83 a 1.67 a 1.88 c** 2.31 a 2.14 b O. montanum 2.43 b* 2.86 ab 2.99 a O. umbellatum 1.83 b* 2.60 a 2.13 ab O. oligophyllum 1.27 b** 1.56 a 1.43 a O. narborense O. pyrenaicum O. nutans 66 O. ulouphyllum 1.87 b* 2.33 a 2.29 a O. armeniacum 1.70 b** 1.74 b 2.14 a O. orthophyllum 1.08 aöd. 1.43 a 1.64 a O. pamhyllicum 0.65 b** 0.99 a 1.07 a ** O. alpigenum 1.56 a 1.24 b 1.19 b O. lanceolatum 1.67 b* 2.02 a 1.78 b 3.40 a 3.34 a Leucojum aestivum 3.26 aöd. Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Tablo 4.20. Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının türlerin soğan ağırlıklarına etkileri (g) TÜRLER Kontrol 1. sulama (1lt/bitki) 2. sulama (2lt/bitki) 12.32 aöd. 22.67 a 24.70 a 3.88 aöd. 4.25 a 3.57 a 3.73 c** 7.82 a 6.25 b O. montanum 10.30 b* 16.19 a 13.17 ab O. umbellatum 4.42 b* 11.12 a 9.82 a O. oligophyllum 1.90 b* 2.43 a 2.02 b O. ulouphyllum 2.63 b** 11.30 a 10.88 a O. armeniacum 3.21 b* 4.03 b 6.03 a O. orthophyllum 3.16 aöd. 4.05 a 6.27 a O. pamhyllicum 0.72 b** 1.13 a 1.44 a O. alpigenum 2.20 b** 3.54 a 3.79 a ** 6.75 a 4.64 b 26.23 a 25.39 a O. narborense O. pyrenaicum O. nutans O. lanceolatum 2.72 c Leucojum aestivum 18.11 b** Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Tablo 4.19. ve Tablo 4.20’de görüldüğü gibi farklı sulama uygulamalarının Ornithogalum türlerinin soğan çapları ve ağırlıkları üzerinde önemli etkilere neden olduğu belirlenmiştir. Çoğu türde 1. sulama uygulamasının daha etkili olduğu 67 görülmüştür. Leucojum aestivum soğanlarında ise soğan çapı üzerinde istatistiksel olarak bir fark bulunmamasına karşın yine 1.sulama uygulamasının ön planda olduğu görülmektedir. Tablo 4.21. Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının hasat edilen soğan sayısına etkileri (adet/parsel) TÜRLER Kontrol 1. sulama (1lt/bitki) 2. sulama (2lt/bitki) 1.00 aöd 0.75 a 0.83 a 0.80 aöd 0.93 a 0.80 a 0.80 aöd 0.73 a 0.67 a O. montanum 0.20 b* 0.73 a 0.73 a O. umbellatum 0.60 aöd 0.80 a 0.73 a O. oligophyllum 0.80 aöd O. narborense O. pyrenaicum O. nutans 1.00 a 0.73 a O. ulouphyllum * 0.40 b 0.73 a 0.60 ab O. armeniacum 0.40 b* 0.73 a 0.47 ab O. orthophyllum 1.00 aöd. 0.80 a 0.83 a O. pamhyllicum 0.80 aöd. 0.60 a 0.60 a O. alpigenum 0.20 aöd. 0.20 a 0.40 a O. lanceolatum 0.40 b* 0.93 a 1.00 a 1.00 a 1.00 a Leucojum aestivum 1.00 aöd. Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Hasat edilen soğan sayıları bakımından da yine çoğu türde 1. sulama uygulamalarının ön planda olduğu görülmektedir. En fazla soğanın hasat edildiği türler ise Leucojum aestivum ile O.orthophyllum ve O.narborense türleri olmuştur. 68 Tablo 4.22 . Farklı sulama düzeyleri ve gübre uygulamasının yavru soğan sayısına (adet) ve yavru soğan ağırlığına etkileri (g) Yavru Soğan Ağırlığı (g) Yavru Soğan Sayısı (adet) TÜRLER O. arborense Kontrol 1. sulama 2. sulama Kontrol (1lt/bitki) (2lt/bitki) 4 2 18 1. sulama 2. sulama (1lt/bitki) (2lt/bitki) 10.78 2.60 19.48 O. pyrenaicum O. nutans 4 1 ---- 4.99 1.09 --- 3 10 13 3.93 7.40 14.56 O. montanum 1 -- --- 12.80 O. umbellatum 12 30 19 65.7 145.7 82.07 O. oligophyllum 4 2 2 0.91 1.28 3.84 O. ulouphyllum 2 -- -- 2.82 --- --- O. armeniacum 2 3 1 3.26 2.27 0.29 O. orthophyllum 2 2 1 4.07 4.31 0.24 O. pamhyllicum 1 -- -- 0.90 --- ---- O. alpigenum -- -- -- --- --- ---- O. lanceolatum 1 -- -- 3.20 --- ---- Leucojum aestivum 5 4 2 21.66 177.8 205.49 TOPLAM 54 56 41 Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Yavru soğan sayıları ve ağırlıkları bakımından da farklı etkiler görülmüş (Tablo 4.22.), en fazla ve en ağır yavru soğanın oluştuğu tür O. umbellatum türü olmuştur. 69 4.5. Varyasyon Oluşturma Çalışmaları ile İlgili Bulgular 4.5.1.Kolhisin İle Muamele Bulguları Şekil 4. 43. Kolhisin uygulaması yapılan bitkilerden genel görünüm Varyasyon oluşturmak amacıyla yürütülen bu çalışmada kolhisin uygulamalarının bitkilerin yaprak özellikleri üzerinde önemli etkilere neden olduğu görülmüştür. % 0.2’lik Kolhisin uygulamaları yapılan bitkilerin yaprak çaplarının kontrol ve % 0.5’lik Kolhisin uygulamasına göre daha büyük olduğu görülmüştür (Tablo 4.23). Ayrıca yapılan subjektif gözlemlerde % 0.2’lik Kolhisin uygulaması yapılmış bitkilerin yapraklarının diğer uygulamalara göre daha koyu renkli yapraklar oluşturduğu gözlemlenmiştir. Çiçek özellikleri bakımından Kolhisin uygulamalarının etkileri incelendiğinde ise çiçek sapı uzunluklarının kontrol bitkilerinde daha fazla olduğu görülmüştür (Tablo 4.24.). Çiçeklenme tarihleri olarak da 2. yıl uygulamalarında yine kontrol bitkilerinin ön plana çıktığı görülmektedir (Tablo 4.25). 70 Tablo 4.23. Kolhisin uygulamasının türlerin yaprak çapına (cm) etkileri TÜR ADI O. pyrenaicum O. montanum O. ulouphyllum O. lanceolatum Leucojum aestivum Çiçek Sapı Uzunluğu (cm) % 0.2 Colchicine % 0.5 Colchicine 0.53 ab 0.68 a 1.02 b 1.35 a 0.55 ab 0.63 a 1.06 b 1.35 a 1.40 b 1.89 a Kontrol 0.44 b* 0.92 b** 0.48b* 1.15 ab* 1.15 b** Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir. *,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Tablo 4.24. Kolhisin uygulanan türlere ait çiçek sapı uzunlukları (cm) TÜR ADI O. pyrenaicum O. montanum O. ulouphyllum O. lanceolatum O. nutans O. narborense O. umbellatum O. oligophyllum O. armeniacum O. alpigenum Leucojum aestivum Çiçek Sapı Uzunluğu (cm) % 0.2 Colchicine % 0.5 Colchicine 17.75 b 17.31 b 10.62 a 8.77 b 4.48 a 4.37 a 2.09 a 2.27 a 7.68 b 7.34 c 58.05 b 62.83 b 15.50 aa 15.47 a 6.95 b 8.29 a 4.40 a 4.65 a 3.35 b 3.16 c 16.76 a 16.50 a Kontrol 20.50 a* 10.83 a* 5.13 aöd. 2.07 aöd. 8.15 a** 61.73 a** 15.86 aöd. 7.82 a** 4.32 aöd. 3.58 a** 17.50 aöd. Duncan testine göre % 5 önem düzeyinde farklı ortalamalar ayrı harflerle gösterilmiştir.*,**,***; sırasıyla % 5, % 1 ve % 0.1 alfa düzeyinde önemli. Tablo 4.25. Kolhisin uygulanan. türlere ait çiçeklenme tarihleri (gün) TÜR ADI 1. yıl gözlemleri (2007 yılı ) Kontrol % 0.2 % 0.5 Colchicine Colchicine 15 Nisan 20 Nisan 01 Nisan 2. yıl gözlemleri (2008 yılı) Kontrol 20 Mart % 0.2 Colchicine 01 Nisan % 0.5 Colchicine 01 Nisan 05 Mart 20 Mart 13 Aralık 2007 10 Mart 01 Nisan 10 Mart 10 Mart 10 Nisan 20 Mayıs 01 Şubat O. pyrenaicum O. montanum O. ulouphyllum O. lanceolatum O. nutans O. narborense O. umbellatum O. oligophyllum O. armeniacum O. alpigenum Leucojum aestivum 13 Şubat 20 Nisan 01 Nisan 15 Mart 25 Mart 01 Mart 25 Mart 01 Nisan 20 Mart 15 Şubat 20 Nisan 20 Mart 10 Mart 01 Nisan 10 Mart 25 Mart 25 Mart 01 Mart 15 Mart 25 Mart 01 Mayıs 15 Şubat 20 Mart 01 Nisan 05 Mart 20 Şubat 01 Nisan 15 Mayıs 01 Şubat 01 Nisan 15 Nisan 20 Mart 01 Mart 30 Nisan 30 Mayıs 15 Şubat 05 Mart 25 Mart 03Mart 03 Mart 01 Nisan 15 Mayıs 03 Mart 20 Mart 25 Mart 05 Mart 10 Mart 10 Nisan 20 Mayıs 15 Şubat 71 4.5.2. Melezleme Çalışmaları ile İlgili Bulgular Ornithogalum ve Leucojum aestivum türlerinde proje teklifinde de belirtildiği gibi ileride yapılması planalanan ıslah çalışmalarına temel oluşturması açısından ön deneme mahiyetinde melezleme çalışmalarının yapılmasına çalışılmıştır. Melezlemede ilk yıl farklı renkte çeşitler elde edilmesi amaçlanmıştır. Bu nedenle de ilkbahar döneminde türler arası melezleme yapılmış, çalıştığımız türlerle aynı dönemde çiçekte olan ve farklı renklerdeki Fressia sp. ve Fritillaria persica türü baba bitkiler olarak kullanılmışlardır. İkinci yıl ise Ornithogalum’da tür içi melezleme için kültür çeşitleri baba olarak kullanılmıştır. Melezleme yapılan türler aşağıda belirtilmiş olup Şekil 44-51’de bazı türlere ait melezleme işlemleri gösterilmiştir. 1. yıl O. montanum X Fressia sp. (pembe renkli) O. montanum X Fressia sp. (sarı renkli) O. montanum X Fritillaria persica O. umbellatum X Fritillaria persica (uygulama açık alandaki bitkiler üzerinde yapılmıştır) O. pyrenaicum X Fritillaria persica O. armeniacum X Fritillaria persica 2. yıl O. umbellatum (ana) X O. lanceolatum (baba) (5 adet) O. umbellatum X Leucojum aestivum (3 adet) O. umbellatum X O. nutans türlerinde (5 adet) O. narborense X O. pyrenaicum (5 adet) O. umbellatum X O.narborense (5 adet) O. umbellatum X O. pyrenaicum (5 adet) O. mount fuji (Ornithogalum ‘un kültür çeşidi) X O.pyrenaicum (3 adet) O. mount fuji X O. narborense (8 adet) O. mount fuji X O. pyrenaicum (3 adet) O. mount fuji X O. narborense (3 adet) 72 Yaklaşık bir hafta sonra tülbent ile izole edilen türler kontrol edilmiş, çiçeklerin canlı olduğu ve tohum bağlama özelliğine yakın olduğu gözlemlenmiştir. Ancak daha sonraki kontrollerde ise türlerin tohum bağlamadıkları görülmüş sadece 15.04.2008 tarihinde O. narborense X O. pyrenaicum türleri arasında yapılan melezlemeden 04.06.2008 tarihinde tohum elde edilmiştir (Şekil 52). Şekil 4.44. O. montanum’da emaskulasyon (erkek organların uzaklaştırılması) işlemi Şekil 4.45. O. pyrenaicum’da türler arası melezleme işlemi (O. pyrenaicum X Fritillaria persica) 73 Şekil 4.46. O. pyrenaicum’da melezleme sonrası izolasyon işlemi Şekil 4. 47. Leucojum aestivum türünde emaskülasyon (erkek organların uzaklaştırılması) işlemi 74 Şekil 4. 48. Leucojum aestivum türler arası melezleme işlemi (Leucojum aestivum X Fritillaria persica) Şekil. 4. 49. Leucojum aestivum’da melezleme sonrası izolasyon işlemi 75 Şekil 4.50. O. umbellatum X O. nutans ve O. umbellatum X O. lanceolatum melezlemeleri Şekil 4.51. O. umbellatum’da emaskulasyon (erkek organların uzaklaştırılması) işlemi 76 Şekil 4.52. O. narborense X O. pyrenaicum melezlemesinden elde edilen tohumlar 4.6. Moleküler Markerlarla Genetik Uzaklıkların Belirlenmesi ile İlgili Bulgular Yapılan analizler sonucunda her genotipte 315 moleküler markır ile elde edilen toplam band sayısı ve ve türlerin tahmini haploid kromozom sayıları Tablo 4.26.’da, DNA bantlarının görünümü Şekil 4.53’de, elde edilen dendrogramlar ise Şekil 4. 54, 4. 55 ve 4.56’da verilmiştir. Tablo 4.26. Sıra No Elde edilen bant sayıları toplam band sayısı 1 82 2 119 3 98 4 126 5 96 6 85 7 86 8 109 9 85 10 89 11 106 12 107 13 92 14 88 15 64 16 73 Haploid kromozom sayıları (n) 10 veya 11 8 ? 7 ile 10 arası 10? 17 veya 18 7 ile 9 arası 7 ile 20 arası 6 ile 11 arasında 9 7 9 10 veya 12 11 veya 12 ? 5-10 veya 11 77 12 34567 8 9101112 13141516 12 3 45678910111213141516 12 3 45678910111213141516 12 34567 8 9101112 13141516 12 3 45678910111213141516 12 3 45678910111213141516 Şekil 4. 53 DNA bantlarının görünümü 78 Şekil 4. 54. Ornithogalum Genotiplerine ait dendogram 79 Şekil 4. 55. Ornithogalum türleri arasındaki Temel Bileşenler Analizinden (PCA) elde edilen genotiplerin iki boyutlu düzlem üzerinde dağılımı 80 Şekil 4. 56. Ornithogalum türleri arasındaki Temel Bileşenler Analizinden (PCA) elde edilen üç boyutlu düzlem üzerinde genotiplerin dağılımı Toplam band sayısı o türün genomunun kompleksitesini gosterir. Daha cok band veren turlerin ya haploid kromozom sayıları daha fazladır, veya ploidi seviyeleri 2n=2x den fazladir (4x, 5x, 6x, 8x gibi). Bu bulgular ışığında 4, 2, 8, 11, ve 12 inci türlerin kromozom sayılarının diğerlerinden daha yüksek olması gerekir. 15 ve 16. türler en düşük kromozom sayısına (veya ploidi seviyesine) sahip olmalıdır. 3, 5, ve 13 türler ile 1, 7, 9, 10 ve 14 türler birbirine daha yakın genom kompleksitesine sahip görünmektedirler. Ancak detaylı sitogenetik çalışmaları gerektiren kromozom sayımı ile gerçek ploidi seviyeleri ortaya çıkarılabilir. Filogenetik ilişkileri verilen genotiplerden 8 nolu genotip olan O. nutans ve 12 nolu genotipi temsil eden O. alpigenum gerçekten de birbirine kısmen daha yakın bulunmuştur. 81 5. TARTIŞMA VE SONUÇ Bu çalışmada süs bitkisi olarak değerlendirilme potansiyeli olan Batı Akdeniz Bölgesinde doğal olarak yetişen Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. türlerinin doğal populasyonlarındaki mevcut durumlarının tespitine, veri tabanının oluşturulması ve toplanmasına, morfolojik ve moleküler karakterizasyonlarının yapılmasına, çoğaltılmalarına ve soğan olarak ihraç edilen bu türlerin soğan irileştirmesi gibi bazı yetiştirme tekniklerine yönelik bilgilerin oluşturulmasına, ıslah çalışmalarına temel oluşturması açısından bazı varyasyon oluşturma çalışmaları ile ilgili bulguların elde edilmesine ve toplanan türlerin koleksiyon bahçesinde muhafazasına çalışılmıştır. Doğal populasyon üzerinde yürütülen çalışmalarda en son yıllara ait kayıtlar da taranmış ve Davis’in 1965-1985 yılları arasında Türkiye Florasıyla ilgili yürüttüğü kapsamlı çalışmalarda rastlanılmayan yeni Ornithogalum türlerine de ulaşılmış, bunlarla ilgili veri tabanı oluşturulmuş, çoğaltım çalışmaları yürütülmüş ve bu türler ensitüde oluşturulan koleksiyon bahçesinde muhafaza altına alınmışlardır. Ancak yine Davis’in 11 ciltlik kitabında Batı Akdeniz Bölgesinde bulunduğu belirtilen Ornithogalum cinsine ait iki türe (O. macrum ve O. wiedemanni) yürütülen arazi çalışmalarında rastlanamamıştır. Türlerin bulunduğu belirtilen alanlara çiçeklenme dönemi öncesi, çiçeklenme dönemi, çiçeklenme dönemi sonrası ve meyve dönemlerinde 2 yıl boyunca gidilmiş, ancak türler bulunamamıştır. Bunun olası sebebi olarak alanda hayvan ve insan baskılarının olduğunun gözlemlenmesi, ya da özellikle endemik olan O. macrum türünün sınırlı populasyona sahip olduğu ve türlerin zaman içerisinde ekolojik faktörlerin etkisi altında kaldığının düşünülmesidir. Türlerin çoğaltılmalarına yönelik yürütülen çalışmalarda generatif çoğaltımda en yüksek çimlenme oranı Ornithogalum pyrenaicum türünden elde edilmiş olup, tohumların % 100 çimlendiği ve soğan oluşturduğu görülmüştür. Leucojum aestivum türünde ise % 5 oranında çimlenme ve soğan oluşumu görülmüştür. Leucojum aestivum ile Ornithogalum montanum ve Ornithogalum umbellatum türlerinde uygulanan vegatif çoğaltım yöntemlerinden bölme yönteminde, uygulama şekilleri arasında önemli farklılıklar gözlenmiştir. Soğanların bölünme miktarı arttıkça elde edilen yavru soğan sayısı artmış, ancak bölme başına elde edilen yavru soğan sayısı bakımından en yüksek oran az sayıda bölme uygulanan soğanlardan elde 82 edilmiştir. Elde edilen yavru soğanların çapları ve ağırlıkları bölme miktarı artıkça azalmıştır. Aksu ve ark (2002)’nın Leucojum aestivum üzerinde yürüttüğü benzer çalışmada da 9-10 cm iriliğindeki soğanlarda üç yıllık büyütme periyodu sonunda, kontrol uygulamasından elde edilen soğanların %81’i ihraç boyuna gelirken, bu oran 4’e bölme uygulamasında %77, 8’e bölme uygulamasında % 63, pullarına ayırma uygulamasında ise % 52 olmuştur. İn vitro çoğaltım çalışmalarında, 4 soğan pul yaprak eksplantları ile denemeye alınan Ornithogalum türlerinde en yüksek soğan oluşumu ortalama 10.78 adet ile O. umbellatum türünden elde edilmiştir. Kullanılan hormon destekli ortamlar arasında en fazla soğan oluşumunun görüldüğü ortam türlere göre değişmekle birlikte en başarılı sonuçlar 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA ve 4 mg/l BAP+ 0,5 mg/l NAA ortamlarından elde edilmiştir. Gelişen soğanlar köklendirilmiş ve topraklı ortama başarıyla aktarılmıştır. Leucojum aestivum türünün soğanlarında görülen aşırı bulaşıklığın üstesinden ise gelinememiştir. Mirici ve ark. (2008) da endemik bazı çiçek soğanlarında yürüttüğü benzer çalışmada Muscari mirum Speta bitkisinde soğan pul yaprakları eksplantları (2 ve 4 pulyaprakları) ile denemeye alınan ortamlar arasında en yüksek soğan oluşumunu (19,13 adet) 0,05 mg/l TDZ ve 0,25 mg/l NAA ve 4 mg/l BAP 0,25 mg/l NAA (23,5 adet) ortamlarından elde etmişlerdir. Ayrıca embriyo eksplantında en yüksek soğan sayısı (9,07 adet) 4 mg/l BAP 0,5 mg/l NAA içeren ortamdan elde edilmiştir. Bellavalia tauri bitkisinde de yine en iyi sonuç (1,60 adet) olgunlaşmamış embriyo eksplantında 1 mg/l BAP 0,5 mg/l NAA içeren MS besin ortamından elde edilmiştir. Araştırıcılar da Bellavalia taurinin soğanlarından sterilizasyon problemi nedeniyle başarılı sonuç elde edememişlerdir. Çalışılan türlerin süs bitkileri sektöründe soğanları değerlendirildiğinden ve soğanları ihraç edildiğinden soğan irileştirmeye yönelik yürütülen yetiştirme tekniği çalışmasında bitkilerin öncelikle kültürel koşullardaki bitkisel özellikleri incelenmiştir. Doğal ortamlarındaki özellikleri ile kıyaslandıklarında cam serada yetiştirilen türlerin yaprak ve çiçek oluşumlarının en az 15 gün daha erken olduğu ve bu sürenin 2 aya kadar uzayabildiği görülmüştür. Bu sonuçlar Karagüzel ve ark. (2001)’nın belirttiği gibi sera koşullarının daha az değişken ve sıcaklık koşullarının nispeten yüksek olmasının erkencilik üzerinde etkili olduğu görüşünü desteklemektedir. Yine bu sonuç Kodaira ve ark. (1996) ile benzerlik göstermektedir. Karagüzel ve Baktır (2005) ın yürüttüğü çalışmalarla Kültür koşullarındaki bitkiler doğal ortamdaki bitkilerle 83 çiçek sapı uzunlukları bakımından kıyaslandığında O. narborense türünde daha fazla olmuş, O.pyrenaicum, O.montanum, O. umbellatum, O.lanceolatum ve Leucojum aestivum türlerinde ise benzer sonuçlar elde edilmiştir. Diğer türler de ise kültür koşullarında daha kısa saplı bitkiler elde edilmiştir. Nitekim Karagüzel ve ark (2002), süs bitkisi potansiyeli olan doğal Lupinus varius (acı bakla) üzerinde yürüttükleri çalışmada kültür koşullarındaki bitkilerin doğal populasyondaki bitkilere göre incelenen tüm özellikler bakımından daha yüksek değerler vermesini, üzerinde çalışılan türün kültür koşullarına çok iyi uyum sağlayabildiği ve farklı amaçlı kullanımlar için bir potansiyel oluşturma özelliği göstermesi şeklinde yorumlamışlardır. Soğanların irileştirilmesi amacıyla tek gübre dozu ve 2 farklı sulama uygulaması (1lt/bitki ve 2lt/bitki) yapılmış ve uygulamaların incelenen tüm özellikler açısından önemli bir etkiye sahip olduğu görülmüştür. Çiçek sapı uzunlukları, ortalama bitki başına elde edilen çiçekçik sayısı ve hasat edilen soğan sayıları bakımından 1 lt/bitki sulama uygulamasının ön planda olduğu belirlenmiştir. Soğan çapı, soğan ağırlığı, yavru soğan sayısı ve ağırlıkları bakımından sulama uygulamaları, sulama yapılmayan kontrol bitkilerine kıyasla önemli etkiler göstermiş ancak türlere göre bu etkiler değişkenlik göstermiştir. Türlerde varyasyon oluşturmaya yönelik uygulanan kolhisin çözeltisinin yaprak özellikleri bakımından önemli etkiler yarattığı görülmüş, yaprak çaplarının %0.2 lik kolhisin uygulamasında kontrol ve % 0.5 lik colchicine uygulamasına göre daha fazla olduğu belirlenmiştir. Yine yapılan subjektif gözlemlerde yaprak renginin % 0.2’lik uygulamalarda daha koyu olduğu görülmüştür. Çiçek sapı uzunlukları bakımından ise kontrol bitkilerinin daha etkili olduğu, kolhisin uygulamaları ile daha kısa saplı bitkiler oluştuğu görülmüştür. Çiçeklenme zamanları yönünden de türler arasında farklı uygulamalar ön plana çıkmıştır. Ön deneme mahiyetinde yürütülen melezleme çalışmalarında başarı şansı düşük olmuştur. Bu durumun türler arası melezlemelerde tohum bağlama oranlarının oldukça düşük olması ile ilişkili olduğu düşünülmekte ve çok fazla sayıda türün melezlenmesi ile ancak başarı şansının yakalanacağı düşünülmektedir. Ayrıca tür içinde yapılan melezlemelerde farklı renkte çiçek tipleriyle çalışılamamıştır. 84 Ornithogalum türlerinin kendi içlerindeki ve aralarındaki belirlenmesi için yürütülen moleküler çalışmada, O. nutans varyasyonun ve O. alpigenum türlerinin birbirine en yakın türler olduğu, O. pyrenaicum türünün ise diğer türlerden farklı genetik özellik gösterdiği saptanmıştır. Çalışma sonucunda türler, bu konuda ileride yapılması planlanan ıslah çalışmalarında değerlendirilmek üzere enstitü içerisinde oluşturulan koleksiyon bahçesinde muhafaza altına alınmışlardır (Şekil 57). Genel olarak elde edilen sonuçlar değerlendirildiğinde türlerin kültürel koşullara uyum sağladığı, süs bitkileri sektörü içerisinde Ornithogalum türlerinin değerlendirilmeleri bakımından kesme çiçek olarak O. narborense ve O.pyrenaicum türlerinin, saksılı bitki olarak O. montanum ve O. narborense türlerinin, yer örtücü olarak da O. lanceolatum türünün ümitvar türler olduğu belirlenmiş, bundan sonra bu türlerle çalışmaların yönlendirilmesi gerektiği kanısına varılmıştır. Türlerin süs bitkileri sektöründe kullanımları elde edilen bu sonuçların ışığında geliştirilmiş yetiştirme tekniklerinin kullanılması ile ve ıslah çalışmalarının yapılmasıyla mümkün olabilecektir. Şekil 5. 57. Koleksiyon bahçesine aktarılan Leucojum aestivum ve Ornithogalum türleri 85 6. REFERANSLAR AİB, Çiçek Soğanları. T.C.Başbakanlık Dış Ticaret Müsteşarlığı Antalya İhracatçı Birlikleri Genel Sekreterliği, 2008. AK., A. Kurtar,E.., Çırak-C., Kevseroğlu-K., "Bulb Yield and Some Plant Characters of Summer Snowflake (Leucojum aestivum L.) Under Shading as Affected by GA3 and NAA At Different Concentrations" Pakistan Journal of Agronomy, Vol. 3, No. 4, Pp. 296-300, (2004,) AKSU, E., Görür, G. ve Çelikel, F.G. 2002. Göl Soğanı (Leucojum aestivum)’nın Vegetatif Yöntemlerle Üretilme Olanaklarının Araştırılması. II. Ulusal Bahçe Bitkileri Kongresi, 224 Ekim 2002. s:29-34. ANONİM 2007 a (http://www.babylon.com/definition/Leucojum/Turkish 2007 ANONİM 2008 a agaclar.net/forum/showthread ANONİM 2008 b, Şifalı bitkiler http://www.yemenbaharat.com/sifalibitkiler_detay.asp?id=140 ARSLAN, N. , Soğanlı Bitkilerin Genel Kültürü. Doğal Süs Bitkilerin Kültüre Alınması ve Herbaryum Teknikleri Kurs Notları. (2007) ASIMGİL, A., Şifalı bitkiler Kitabı. Hayat-sağlık 352 sayfa. (2003) ATAY, S. 1996. Soğanlı Bitkiler. Türkiye’den İhracatı Yapılan Türlerin Tanıtım ve Üretim Rehberi. Doğal Hayatı Koruma Derneği. 84 ss. BAYTOP, T., Türkçe Bitki Adları Sözlüğü, Atatürk Kültür, Dil ve Tarih Yüksek Kurumu, Türk Dil Kurumu Yayınları, 578, Ankara, (1997). BAYTOP T. Türkiyede Tıbbi Bitkiler ile Tedavi. s: 146, 161, 275,301, 350. 2.baskı, İstanbul Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Yayınları, İstanbul, (1999). BLOMERUS, L.M. Ornıthogalum: from Diploid to Tetraploid. ISHS Acta Horticulturae 570: VIII International Symposium on Flowerbulbs 2002. BLOMERUS L.M. and Schreuder, HA., Rapid Propagation of Ornithogalum Using Leaf Cuttings. ISHS Acta Horticulturae 570: VIII International Symposium on Flower Bulbs. (2002) CHUNG, J.-D.; Chun, C.-K.; Suh, Y.-K.; Lee, D.-W.; Byun, S.-K.; Park, J.-K. Studies on tissue culture of Ornithogalum thyrsoides in vitro. I. Effect of plant growth regulators on callus formation and organogenesis from tissues of 86 female organs (stigma, style and ovary). Journal of the Korean Society for Horticultural Science 21 (2) : 198-203 (1980). CLAASSENS, A. S.The nutrient requirements of Ornithogalum and Lachenalia, two indigenous South African flowering bulbs. Plant nutrition - physiology and applications. Proceedings of the Eleventh International Plant Nutrition Colloquium, Wageningen, Netherlands, (30 July - 4 August 1989). ÇIRAK, C., Ayan, A.K., Kurtar, E.S., Kevseroğlu, K. ve Çamas, N. The effects of different N doses and harvesting times on bulb yield and some plant charecters of summer snow flakes (Leucojum aestivum). Asian Journal of Plant Sciences 3(2), 192-195. (2004). ÇİÇEK, E. Aslan, M. and Tilki, F. Effect of Stratification on Germination of Leucojum Aestivum L. Seeds, a Valuable Ornamental and Medicinal Plant. Research Journal of Agriculture and Biological Sciences, 3(4): 242-244, (2007). DAVIS, P. H., Flora of Turkey and The East Agean Islands, University Pres Edinburgh, ,Vol.:8 (1984). DÜŞEN,O.,.Deniz, İ.G Ornithogalum sumbulianum (Hyacinthaceae), a New Endemic Species from South West Anatolia. Pak.J.Bot., 36 (4):33-36,2005. EKİM, T., Koyuncu, M., Vural, M., Duman, H., Aytaç, Z. ve Adıgüzel, N. Türkiye Bitkileri Kırmızı Kitabı. (Eğrelti ve tohumlu Bitkiler), Ankara,196 ss. (2000) GENOVA, E., Bogdanova, J., Berkov, S., Stanilova, M. In Vitro Micropropagation and Acclimatizatıon Of Leucojum aestıvum L. (Summer Snowflake) In Bulgarıa 3rd Conference on Medicinal and Aromatic Plants of Southeast European Countries, Abstract Book, p:63, (2004). GEORGIEVA, L.A, Berkov, S., Kondakova V., Bastidab, J Viladomat . F., Atanassova, A. and Codina C. Alkaloid Variability in Leucojum aestivum from Wild Populations 627-635 (2007); received March 2/April 3, (2007) GRIESBACH, R. J.; Meyer, F.; Koopowitz, H. Creation of new flower colors in Ornithogalum via interspecific hybridization. Journal of the American Society for Horticultural Science 118 (3) : 409-414 (1993) HAGILADI, A.; Umiel, N.; Ozeri, Y.; Elyasi, R.; Abramsky, S.; Levy, A.; Lobovsky, O.; Matan, E. The effect of planting depth on emergence and development of some geophytic plants. Acta Horticulturae (No. 325) : 131-137 (1992) 87 HERTOGH, A. A. DE; Gallitano, L. Basic forcing requirements for Israeli-grown Ornithogalum dubium. Acta Horticulturae (No. 430) : 227-232 (1997) HUSSEY, G.Plantlet regeneration from callus and parent tissue in Ornithogalum thyrsoides. Journal of Experimental Botany 27 (97) : 375-380 (1976) JANSEN VAN VUUREN, P. J.; Holtzhausen, L. C. Influence of temperature on the flowering date of Ornithogalum thyrsoides Jacq. Acta Horticulturae (No. 337) : 153-159 (1993) OZBUCAK T., KUTBAY H. G. AKCIN O E., The Contribution of Wild Edible Plants to Human Nutrıtion in the Black Sea Region of Turkey (2006). KARACA , Z. Yaşar, A., Vural, E. , Vural, C. Erciyes Dağı’nda (Kayseri) Doğal Olarak Yetişen Bazı Geofit Bitkilerin (Liliaceae, Iridaceae) Polen Morfolojisi Erciyes Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi 23 (1-2) 37- 46 (2007) KANDEMİR, A. Orta Karadeniz Bölgesindeki Bazı Ornithogalum L. (Liliaceae) Türleri Üzerinde Taksonomik ve Morfolojik Bir Çalışma.Yüksek Lisans Tezi, Ondokuz Mayıs Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, 1993. KARAGÜZEL, O., Baktır İ., Çakmakçı, S., Ortaçeşme V., Aydınoğlu,Atik, M. Yetiştirme Ortamı ve Ekim Zamanlarının Güney Anadolu Doğal Lupinus’larının Büyüme ve Çiçeklenme Özelliklerine Etkileri. Akd. Üniv. Derg. 16(2) 187197.(2002). KARAGÜZEL, O, BAKTIR, İ. Süs Bitkisi Olarak Kullanılabilecek, Antalya Yöresinde Yetişen Üç Endemik Allium Türünün junceum Subs. tridentatum, A. robertianum, A. sandrasicum)Kültüre Alınma ve Çoğaltılabilme Olanaklarının Araştırılması. Akdeniz Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Doktora Tezi.s: 138, (2005). KARAGÜZEL, O., Doğal Tür ve Genotiplerden Süs Bitkisi Olarak Yararlanma Stratejileri: Avantajlar ve Zorluklar. Doğal Süs Bitkilerin Kültüre Alınması ve Herbaryum Teknikleri Kurs Notları. (2007). KARAOĞLU, C. Göl Soğanı (Leucojum Aestivum L.)’nın In Vıtro Koşullarında Hızlı Çoğaltımı.Yüksek Lisans Tezi Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Tarla Bitkileri Anabilim Dalı, 38 syf (2004) KARİUKİ, W. and Kako, S., Micropropagation of Ornithogalum saundersiae Bak. Acta Horticulturae (No.624) : 521-526 (2002) 88 KARİUKİ, W. Effect of planting depth on growth and flowering of Ornithogalum saundersiae Bak. Acta Horticulturae (No.624) : 217-221 (2003) KODAIRA, E., Mori, G. and Imanıshı, H.. Effects of temperature on the growth and flowering of Allium cowanii Lindl. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science 64(4): 891-897. (1996) KOYUNCU, M., Türkiye Geofitleri. Doğal Süs Bitkilerin Kültüre Alınması ve Herbaryum Teknikleri Kurs Notları. (2007). KUSHNIR, U.; Galil, J.; Feldman, M. Cytology and distribution of Ornithogalum in Israel. II. Section Beryllis (Salisb.) Bak. Israel Journal of Botany 26 (2) : 83-92 (1977) LANDBY, P. A.; Neiderwieser, J. G.In vitro propagation of Ornithogalum 'Rollow'. African Society for Horticultural Sciences 2 (1) : 50-54 (1992) LEE MEILING; Huang ChaurChuang; Chen IJu; Chang TsuLiang Bulb storage conditions influence flowering period and flower quality of Ornithogalum saundersiae Bak. Journal of the Taiwan Society for Horticultural Science 52 (1) 53-60 (2006) LITTLEJOHN, G. M.; Blomerus, L. M. Evaluation of Ornithogalum genebank accessions for some characteristics of importance for breeding cut flowers or pot plants Genetic Resources and Crop Evolution 44 (3) : 227-234 (1997) LURIA, G.; Watad, A. A.; Cohen-Zhedek, Y.; Borochov, A.2002. Growth and flowering of Ornithogalum dubium. Acta Horticulturae (No.570) : 113-119 (2002) MİRİCİ S, Parmaksız I, Özcan S, Sancak C, Uranbey S, Sarıhan EO, Gümüşcü A, Gürbüz B, Arslan N Efficient in vitro bulblet regeneration from immature embryos of endangred Sternbergia fischeriana. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 80:239-246. (2005) MİRİCİ S, Baktır, İ., Nasırcılar, A.,Eren, Ö.,Karagüzel, Ö.2008. Ekonomik Potansiyele Sahip Bazı Endemik Soğanlı Bitkilerin İn-Vitro Koşullarda Hızlı Çoğaltımı. Tübitak Projesi. Proje No: 105O246. MORİ, G., Kawabata, H., Imanishi, H., Sakanishi, Y. Growth and flowering of Leucojum aestivum L. and L. autumnale L. grown outdoors. 591,Japan. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science (2006.) NAYAK, S.; Sen, S. Propagation of Ornithogalum umbellatum L. through tissue culture. Nucleus (Calcutta) 35 (4) : 74-77 (1992) 89 NAYAK, S.; Sen, S. In vitro propagation of Ornithogalum umbellatum through direct organogenesis. Indian Journal of Experimental Biology 33 (2) : 144-146 (1995) NEL, D. D. Rapid propagation of Ornithogalum hybrid in vitro. Agroplantae 13 (3) : 83-84 1981 ÖZHATAY, N. Diversity of bulbous monocots in Turkey with special reference. Chromosome numbers*Pure Appl. Chem., Vol. 74, No. 4, pp. 547–555, (2002). PETANIDOU, T and Vujic A. Genetic diversity & mutual dependence of Ornithogalum plants and Merodon hoverflies across a climatic gradient within the Mediterranean. (2007). PTAK, A. and Cierniak, O. 2003. Regeneration of summer snowflakes (L.aestivum) in in vitro cultures. Biotechnologia, 4/63, 139-245. RENSBURG, J. G. J. VAN; Vcelar, B. M.; Landby, P. A.Micropropagation of Ornithogalum maculatum. South African Journal of Botany 55 (1) : 137-139 1989 SAKANISHI, Y.; Yanagawa, T.Bulblet formation on scale pieces of various bulbous ornamentals. Studies from the Institute of Horticulture, Kyoto University 9 : 100-107 (1979) SHILLO, R.; Ding Mu; Pasternak, D.; Zaccai, M. : Cultivation of cut flower and bulb species with saline water. Scientia Horticulturae 92 (1) : 41-54 (2002) SHIMADA, Y.; Mori, G.; Imanishi, H. Effect of temperature on the flowering of Ornithogalum arabicum L.. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science 64 (3) : 617-623 (1995) STANILOVA, M., Bogdanova, Y., Berkov, S., Bosseva, Y., Gussev, Ch. In Vıtro Clonal Propagatıon Of Leucojum aestıvum L. 3rd Conference on Medicinal and Aromatic Plants of Southeast European Countries,. Abstract Book, p:45, (2004) SUH, J.-K. ; Lee A.K; Lee JS; Flowering response of Ornithogalum as influenced by temperature and plant growth regulators treatment. Acta Horticulturae (No. 541) : 335-341 (2000) SUH, J.-K. Lee, W.-H. Lee, A.-K. New Plantlet Proliferation and Bulbing Promotion In In Vitro Culture Of Ornithogalum Hybrid. ISHS Acta Horticulturae 683: V International Symposium on New Floricultural Crops (2005) 90 ŞABUDAK,T. Trakya bölgesinde yetişen Ornithogalum umbellatum (Hyacinthaceae) L. bitkisinin kimyasal bakımdan incelenmesi. Yüksek lisans tezi. Edirne. (1999). UYSAL, T.,Ertuğrul K. and Dural, H. A new species of Ornithogalum (Liliaceae) from South Anatolia, Turkey. Botanical Journal of the Linnean Society 148,501–504. , (2005). YANAGAWA, T.; Ito, I. Differences in the capacity for bulblet regeneration between bulb-scale explants excised from different parts of Hymenocallis and Ornithogalum bulbs. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science 57 (3) : 454-461 (1988) ZAIDI N, Khan NH, Zafar F, Zafar SI (2000) Bulbous and cormous monocotyledonus ornamental plants in vitro. Quaterly Science Vision, 6(1): 58- 91 TÜBİTAK PROJE ÖZET BİLGİ FORMU Proje No: 104 O 327 Proje Başlığı: Batı Akdeniz Bölgesindeki Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. Türlerinin Kültüre Alınması, Süs Bitkileri Sektörüne Kazandırılması ve Moleküler Karakterizasyonu Proje Yürütücüsü ve Araştırmacılar: Dr. Özgül KARAGÜZEL,Ayşe Serpil KAYA, Köksal AYDINŞAKİR, Dr. Nedim MUTLU, Prof. Dr. İbrahim BAKTIR, Prof. Dr. Osman KARAGÜZEL, Yrd. Doç. Dr. Ramazan GÖKTÜRK, Yrd. Doç .Dr. Soner KAZAZ Projenin Yürütüldüğü Kuruluş ve Adresi: Batı Akdeniz Tarımsal Araştırma Enstitüsü ANTALYA Destekleyen Kuruluş(ların) Adı ve Adresi: Projenin Başlangıç ve Bitiş Tarihleri: 1.6.2005 -1.2.2009 Öz (en çok 70 kelime) Bu çalışmada Batı Akdeniz Bölgesinde doğal olarak yetişen Leucojum aestivum ve Ornithogalum spp. türlerinin doğal ve kültürel koşullardaki morfolojik ve moleküler karakterizasyonları yapılmış, ıslah çalışmalarına yönelik ön çalışmalar yürütülmüştür. Araştırma sonucunda türlerin kültürel koşullara adapte oldukları görülmüş, süs bitkileri sektöründe kullanımlarının tekniklerinin kullanılması ise elde edilen bu sonuçların ışığında geliştirilmiş yetiştirme ile ve ıslah çalışmalarının yapılmasıyla mümkün belirlenmiştir. Anahtar Kelimeler: Ornithogalum, Leucojum, Kültüre Alma, Moleküler Karakterizasyon Yapılan Yayınlar: Yok olabileceği