Y Delesyon 15 Bölge PCR Kiti
advertisement
Y MĐKRODELESYON 15 BÖLGE PCR KĐTĐ Kat. No: SNPYD-15 GĐRĐŞ SAKLAMA KOŞULLARI Y Kromozomu üzerindeki mikrodelesyonlar Klinefelter sendromundan • Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır. sonra • Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma en sık görülen spermatogenesis eksikliği sebebidir. Y kromozomundaki Ydq11.23 bölgelerinin (AZFa, AZFb, AZFc ve AZFd) tarihine kadar kullanılabilir. V ve VI tekrarlanan bölgeleri spermatogenesis sorumlu genlerini • içermektedir. Bu bölgelerdeki mikrodelesyonlar azospermia’ ya neden olabilir. Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden olmaktadır. DNA ĐZOLASYONU KĐT PRENSĐBĐ Kit genomik DNA ile çalışmaktadır. Kaynak olarak tam kan kullanılmalı, Test prensibi klasik PCR ve Agaroz Jel Elektroforezidir. kanlar EDTA’lı tüplere alınmalı, alındıktan hemen sonra bir kaç kez tüpü PCR, nükleik asitlerin in-vitro olarak (canlı organizma dışında), uygun çevirmek suretiyle kanın pıhtılaşmadan tüp içeriğindeki EDTA ile koşullar altında çoğaltılmasına dayanmaktadır. Çoğaltılmak istenen karışması sağlanmalıdır. Kan tüpleri, bir iki hafta içinde DNA izolasyonu bölgenin iki ucuna özgü, bu bölgedeki baz dizilerine tamamlayıcı olan, yapılacaksa + 4°C ‘de, daha uzun süre bekletilecekse – 20°C de 18-25 baz uzunluğunda bir çift sentetik oligonükleotid primer saklanmalıdır. kullanarak, bu iki primer ile sınırlandırılan bölgenin enzimatik olarak Kandan Genomik DNA izolasyonu, herhangi bir spin kolon yöntemiyle sentezlenmesi sağlanır. yapılabilir. DNA elde edildikten sonra – 20°C de saklanmalıdır. Y DNA’nın elektroforetik analizinin temeli, bu molekülün elektriksel bir Mikrodelesyon 8 Bölge Real Time PCR Kiti, MN NucleoSpin®Blood ve alanda, jel üzerinde hareketine dayanmaktadır. Axygen Blood Genomic DNA kitlerine göre optimize edilmiştir. ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ TEST PROSEDÜRÜ Kit, PCR için gerekli tüm bileşenleri içerisinde bulundurur. Y • Her miks ayrı ayrı tüplerde çalışılmalıdır. kromozomunun ilgili bölgelerine ait spesifik primerler yardımı ile analiz • Bir örnek için, her 0,2 ml PCR tüpüne, 44,5 µl master miks ve yapılmaktadır. 0,5 µl Hot Start Taq DNA Polimeraz konulur. Daha sonra 5 µl (~10-100 ng) örnek DNA ‘sı ilave edilir. KĐT ĐÇERĐĞĐ • • • • • • • • • • • • • • • • • Bileşen CDY PCR Master miks BPY2 PCR Master miks SY81 PCR Master miks SY82 PCR Master miks SY84 PCR Master miks SY127 PCR Master miks SY142 PCR Master miks SY145 PCR Master miks SY152 PCR Master miks SY153 PCR Master miks SY164 PCR Master miks SY255 PCR Master miks SY254 PCR Master miks RBM1 PCR Master miks SY277 PCR Master miks HotStart Taq DNA Polimeraz Kontrol DNA 10 Test 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 495 µl 90 µl 100 µl • Hafifçe pipetlenerek karıştırılır. • Aşağıda belirtilen programla çalıştırılır. • Birden fazla örnek için, Master miks ve Hot Start Taq DNA Polimeraz miktarları, çalışılacak örnek sayısı ile çarpılmalı, oluşan karışımdan 45 µl tüplere bölünmeli ve ayrı ayrı örnek DNA’ları konulmalıdır. PCR PROGRAMI 95 °C 10 Dk. 95 °C 15 Saniye 58 °C 1 Dk. 35 Döngü ANALĐZ OLASI PROBLEMLER PCR işlemi bittikten sonra, PCR ürünleri % 2.5 lik Agaroz jelde, tank Eğer bantlar silikse, büyüklüğüne uygun voltaj ve sürede yürütülür. Bu süre 10 cm x 10 cm • Örnek DNA’sı saf değildir veya az miktarda inhibitör içeriyor ebatlarına göre değişebilir. Jel yürütüldükten sonra UV tablası üzerine • Yeterli miktarda DNA elde edilememiş olabilir. alınıp, ilgili bantlar açısından analiz edilir. Eğer bant yoksa “delesyon • Hot Start Taq DNA yetersizdir ya da iyi karışmamış olabilir. bir jel için ortalama 160 V ve 40 dakikadır. Bu değerler farklı tank olabilir. vardır” sonucu verilir. Her bölgeye ait AZF bölgesi ve bant uzunlukları aşağıdaki tabloda verilmiştir. UYARILAR • Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır. • Oda sıcaklığında unutulmuş PCR master miksleri kullanılmamalıdır. • PCR master miksi oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı Bölge AZF Uzunluk (bp) CDY AZF b 132 edilerek hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir. BPY2 AZF c 142 • Master miksler tüplere bölündükten sonra Hot Start Taq DNA Polimeraz ve DNA eklenerek hemen PCR işlemine geçilmelidir. SY81 AZF a 209 SY82 AZF a 264 SY84 AZF a 420 SY127 AZF b 274 belirtilen türlerin tespitinde vücut dışı test kiti olarak kullanılır. SY142 AZF b 196 • SY145 AZF c/d 143 SY152 AZF c/d 125 SY153 AZF c/d 139 SY164 AZF b 577 SY255 AZF c (DAZ) 124 SY254 AZF c (DAZ) 380 RBM1 AZF b 853 SY277 AZF c (DAZ) 312 • Belirtilenden fazla Hot Start Taq DNA Polimeraz koyulmamalıdır. • Yukarıda belirtilen PCR programı uygulanmalıdır. • PCR master miksleri vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece PCR master mikslerin raf ömrü 6 aydır. Kullanmadan önce üretim tarihine dikkat edilmelidir. Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012
