ace ı/d polđmorfđzm pcr kđtđ

ACE I/D POLĐMORFĐZM PCR KĐTĐ
Kat. No: SNPACE
GĐRĐŞ
DNA ĐZOLASYONU
Renin-Angiotensin sitemi (RAS) kan basıncı ve böbrek fonksiyonları
Kit genomik DNA ile çalışmaktadır. Kaynak olarak tam kan kullanılmalı,
açısından önemli bir sistemdir. Yapılan çalışmalar, bu sistemdeki olası
kanlar EDTA’lı tüplere alınmalı, alındıktan hemen sonra bir kaç kez tüpü
genetik değişikliklerin damar hastalıklarında önemli olduğunu tespit
çevirmek suretiyle kanın pıhtılaşmadan tüp içeriğindeki EDTA ile
etmiştir. Angiotensin Converting Enzyme-I (ACE), RAS sisteminin en
karışması sağlanmalıdır. Kan tüpleri, bir iki hafta içinde DNA izolasyonu
önemli
yapılacaksa + 4°C ‘de, daha uzun süre bekletilecekse – 20°C de
elemanlarından
birisidir.
Bu
enzimi
kodlayan
gendeki
Insersiyon/Delesyon mutasyonları, plazma ve doku içerisindeki ACE
saklanmalıdır.
miktarını doğrudan etkilemektedir.
Kandan Genomik DNA izolasyonu, herhangi bir spin kolon yöntemiyle
yapılabilir. DNA elde edildikten sonra – 20°C de saklanmalıdır. Y
KĐT PRENSĐBĐ
Mikrodelesyon 8 Bölge Real Time PCR Kiti, MN NucleoSpin®Blood ve
Test prensibi klasik PCR ve Agaroz Jel Elektroforezidir.
Axygen Blood Genomic DNA kitlerine göre optimize edilmiştir.
PCR, nükleik asitlerin in-vitro olarak (canlı organizma dışında), uygun
koşullar altında çoğaltılmasına dayanmaktadır. Çoğaltılmak istenen
TEST PROSEDÜRÜ
bölgenin iki ucuna özgü, bu bölgedeki baz dizilerine tamamlayıcı olan,
•
18-25 baz uzunluğunda bir çift sentetik oligonükleotid primer
Bir örnek için, her 0,2 ml PCR tüpüne, 44,5 µl master miks ve
0,5 µl Hot Start Taq DNA Polimeraz konulur. Daha sonra 5 µl
kullanarak, bu iki primer ile sınırlandırılan bölgenin enzimatik olarak
(~10-100 ng) örnek DNA ‘sı ilave edilir.
sentezlenmesi sağlanır.
•
Hafifçe pipetlenerek karıştırılır.
DNA’nın elektroforetik analizinin temeli, bu molekülün elektriksel bir
•
Aşağıda belirtilen programla çalıştırılır.
alanda, jel üzerinde hareketine dayanmaktadır.
•
Birden fazla örnek için, Master miks ve Hot Start Taq DNA
Polimeraz miktarları, çalışılacak örnek sayısı ile çarpılmalı, oluşan
ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ
karışımdan 45 µl tüplere bölünmeli ve ayrı ayrı örnek DNA’ları
Kit, PCR için gerekli tüm bileşenleri içerisinde bulundurur. Y
konulmalıdır.
kromozomunun ilgili bölgelerine ait spesifik primerler yardımı ile analiz
yapılmaktadır.
PCR PROGRAMI
KĐT ĐÇERĐĞĐ
•
•
•
Bileşen
ACE I/D PCR Master Miks
Hot Start Taq DNA Polymerase
Kontrol DNA
20 Test
950 µl
25 µl
20 µl
SAKLAMA KOŞULLARI
•
Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır.
•
Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar kullanılabilir.
•
Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden
olabilir.
95 °C
10 dk.
94 °C
30 sn.
52 °C
30 sn.
72 °C
30 sn.
72 °C
5 dk.
35 döngü
ANALĐZ
OLASI PROBLEMLER
PCR işlemi bittikten sonra, PCR ürünleri % 1.5 – 2 lik Agaroz jelde,
Eğer bantlar silikse,
tank büyüklüğüne uygun voltaj ve sürede yürütülür. Bu süre 10 cm x
•
Örnek DNA’sı saf değildir veya az miktarda inhibitör içeriyor
tank ebatlarına göre değişebilir. Jel yürütüldükten sonra UV tablası
•
Yeterli miktarda DNA elde edilememiş olabilir.
üzerine alınıp, ilgili bantlar açısından analiz edilir. Bant uzunlukları
•
Hot Start Taq DNA yetersizdir ya da iyi karışmamış olabilir.
olabilir.
10 cm bir jel için ortalama 160 V ve 40 dakikadır. Bu değerler farklı
aşağıdaki tabloda verilmiştir.
UYARILAR
•
Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır.
Polimorfizm
Uzunluk (bp)
•
Oda sıcaklığında unutulmuş PCR master miksleri kullanılmamalıdır.
Insersiyon (II)
490
•
PCR master miksi oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı
Delesyon (DD)
190
edilerek hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir.
Heterozigot (I/D)
490 / 190
•
Master miksler tüplere bölündükten sonra Hot Start Taq DNA
Polimeraz ve DNA eklenerek hemen PCR işlemine geçilmelidir.
•
Belirtilenden fazla Hot Start Taq DNA Polimeraz koyulmamalıdır.
•
Yukarıda belirtilen PCR programı uygulanmalıdır.
•
PCR master miksleri vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece
belirtilen türlerin tespitinde vücut dışı test kiti olarak kullanılır.
•
PCR master mikslerin raf ömrü 6 aydır. Kullanmadan önce üretim
tarihine dikkat edilmelidir.
Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012