Hypocrea jecorina`dan Pullulanazın Kısmi Saflaştırılması ve

24. Ulusal Kimya Kongresi, Zonguldak Karaelmas Üniversitesi, 29 Haziran-2 Temmuz 2010, Zonguldak
Hypocrea jecorina’dan Pullulanazın Kısmi Saflaştırılması ve
Karakterizasyonu
Ayşegül Peksel, Nurdagül Orhan, Nilay Altaş Kıymaz
Yıldız Teknik Üniversitesi, Fen-Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, 34220 İstanbul
[email protected]
Pullulanaz (EC 3.2.1.41), pullulan, amilopektin ve β-limit dekstrindeki α-1,6 glikozidik
bağlarını hidrolizleyen bir enzimdir. Pullulanazın en önemli endüstriyel uygulaması,
nişastadan glukoz ve maltoz şuruplarının üretimidir [1]. Şeker şuruplarının üretimi için nişasta
işleme endüstrisinde diğer amilolitik enzimlerle
α ( -amilaz, β-amilaz, glukoamilaz) birlikte
kullanılır. Nişastanın enzimatik hidrolizi iki basamakta gerçekleşir. Başlangıç hidrolizi,
sıvılaştırma adını alır. Bu aşamada uzun zincirli nişasta molekülü, lineer ya da dallanmış
daha kısa ünitelere ayrılır. İkinci aşama sakarifikasyon olarak adlandırılır ve dallanmış
üniteler enzimatik olarak parçalanarak yüksek saflıkta glukoz, fruktoz ve maltoz şurubu elde
edilir. Pullulanazlar daha etkin ve daha hızlı dönüşüm reaksiyonlarına izin verdiği için tercih
edilmektedir [2-3]. Trichoderma reesei’nin anamorfu olan Hypocrea jecorina endüstriyel
öneme sahip bir küftür. Bu küf hem doğal ekstrasellüler enzimlerin fermentatif üretiminde
hem de heterolog protein üretiminde kullanılır. Endüstride özellikle selülolitik ve
hemiselülolitik enzimlerin üretiminde kullanılan bir küftür [4-5]. Bu çalışmada, pullulanaz
H. jecorina’dan kısmi olarak saflaştırıldı ve enzimin bazı biyokimyasal özellikleri incelendi.
Substrat spesifikliği pullulan, nişasta, amilopektin ve dekstrin kullanılarak tayin edildi. K m ve
V max değerleri, substrat olarak dekstrin kullanılarak hesaplandı. Enzim aktivitesi üzerine pH,
sıcaklık etkisi ve enzimin termal kararlılığı ölçüldü. Bazı iyon ve bileşiklerin enzim aktivitesine
etkileri çalışıldı. Elde edilen sonuçlara göre H. jecorina’dan saflaştırılan pullulanaz,
endüstriyel amaçlar için kullanılabilir ve H. jecorina bu enzim için geliştirilebilecek iyi bir
indükleyicidir.
KAYNAKLAR
1. Kunamneni, A., Singh, S., Enzyme and Microbial Technology, 39,1399-1404, 2006.
2. Zhang, L., Zhu, X., Zheng, S., Sun, H., Biochemical Engineering Journal, 46, 83-87,
2009.
3. Lazaridou, A., Roukas, T., Biliaderis, C.G., Vaikousi, H., Enzyme and Microbial
Technology, 31, 122-132, 2002.
4. Gamauf, C., Marchetti, M., Kallio, J., Puranen, T., Vehmaanpera, J., Allmaier, G.,
Kubicek, C.P., Seiboth, B., FEBS Journal 274, 1691-1700, 2007.
5. Seiboth, B., Hofmann, G., Kubicek, C.P., Molecular Genetics and Genomics, 267,
124-132, 2002.