Proteinase K Miktarı 50 ml Kullanıma Hazır Katalog No. 10-0024 Kullanım Amacı Vücut Dışı Tanı Bu ürün immünhistokimya (IHC) boyama prosedürünün ön işlem sürecinde formalin fikse parafine gömülü (FFPE) dokuların proteolitik sindirimi için kullanılır. İçindekiler 50 mM Tris Buffer, % 0.09 w/v Sodium Azide, pH 7.5 içinde Proteinase K. Damlalıklı şişede, kullanıma hazır. Özet ve Açıklama Proteinase K geniş spektrumlu bir serine proteazdır ve IHC ön işlemlerinde sıklıkla kullanılan bir enzimdir. FFPE dokuların proteollitik sindiriminden sonra dokudaki hedef antijenler ortaya çıkar ve böylece boyama prosedürü sırasında antikor-antijen bağlanması kolaylaşır. Proteolitik sindirim, fiksasyon sırasında kapatılmış antijenlerin açığa çıkmasını sağlar. Prosedür Lamlar deparafinize ve rehidre edildikten sonra kullanılır. Gerekiyorsa önce endojen peroksidaz aktivitesi bloke edilir. 1. Alkolün veya peroksidaz blok solüsyonunun giderilmesi için lamlar PBS veya saf su ile birkaç kez yıkanır. 2. Doku kesitleri Proteinase K solüsyonu ile kaplanır ve nemli ortamda 37°C’de 5-15 dakika inkübe edilir (optimal inkübasyon süresi doku tipine, fiksasyon derecesine göre değişir ve kullanıcı tarafından belirlenmelidir). Dikkat: Proteinase K solüsyonunun tamamını oda sıcalığına ulaştırmayınız. Soğuk (2-8°C) Proteinase K doğrudan lamlar üzerine uygulanır. Solüsyonu kullandıktan hemen sonra 2-8°C’ye kaldırınız. Proteinase K solüsyonunun ısınması ürünün stabilitesini etkiler ve son kullanma tarihini kısaltabilir. 3. 4. Lamlar 1X PBS solüsyonunda yıkanarak Proteinase K giderilir. Standart IHC prosedürüne devam edilir. Saklama Koşulları 2-8°C’de muhafaza ediniz. Son kullanma tarihi geçtikten sonra tüm performans vaadleri geçersizdir. Gerekli Diğer Malzemeler FFPE doku kesitleri, 1X PBS Önlemler Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Sodium Azide (NaN3) toksik bir kimyasaldır ve Sekonder Antikor Dilüenti içinde antimikrobiyal ajan olarak bulunur. Bu üründe bulunan konsantrasyonu tehlikeli olarak sınıflandırılmamıştır. Ancak gider borularında biriken NaN3 kurşun ve bakır ile reaksiyona girerek patlayıcı metal azidler oluşturabilir. Birikmeyi önlemek için dökülen reaktifin arkasından bol miktarda su dökünüz. FFPE dokuların aşırı derecede enzim ön işlemi doku morfolojisinin bozulmasına veya kesitlerin lam üzerinden dökülmesine sebep olabilir. Yetersiz enzim sindirimi zayıf boyanmalara yol açabilir. Semboller 30221 Rev.01 Sayfa 1/1