helena

helena
www.helena-biosciences.com
BioSciences
Europe
Kullanım Talimatları
SAS-MX İDRAR PROTEİN
Katalog No: 100500
KULLANIM AMACI
SAS-MX İdrar Protein Kiti agaroz jel elektroforez ile konsantre edilmemiş idrar
numunelerinin taraması için tasarlanmıştır.
Üriner proteinler filtre yoluyla böbrekte bulunan plazma proteinlerinden öncelikli
olarak türetilmiştir. İdrarda anormal plazma proteinlerinin görünen büyük değeri renal
fonksiyon değerlendirmesinde bulunur. Proteinüri uygun eğitimi türün ve ektrasyon 14 edilen proteinlerin miktarının kantitatif ve kalitatif değerlendirmesini içermelidir.
Elektroforez, Dysglobulinaemias 1-5 ile ilgili proteinüri-Fizyolojik, Glomerüler (seçici
ve seçici olmayan), Tubuler ve proteinürinin çeşitli türlerinin ayrımını sağlayan bir
tekniktir.
SAS–MX İdrar Protein kiti bir agaroz jelde değişikliğine göre idrarda proteinleri ayırır.
Proteinler daha sonra kantitatif veya kalitatif yorum ve görüntüleme için boyanır. Kitte
kullanılan yüksek duyarlılık boyanması konsantrasyon olmadan test edilecek olan
çoğu idrar numunelerine olanak sağlar ve İdrar Protein İç Standart’ın kullanımı
densitometrisi tarafından belirlenecek olan tek tek bant protein konsantrasyonuna
yada idrar total protein yaklaşımına olanak sağlar.
UYARILAR VE ÖNLEMLER
Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini
ağzınızla pipetlemeyin, ağzınıza sürmeyin.
Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım
bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun.
BİLEŞENLER
1. SAS-1 İdrar Protein Jel
Koruyucu olarak sodyum azid ve tiyomersal ile bir Tris/Barbital buffer içeren
agaroz. Paket içindeki jel kullanım için hazırdır.
2. Konsantre Tris / Barbital Buffer
Koruyucu olarak sodyum azid ile konsantre Tris/barbital buffer içerir. Şişe içeriğini
1 litre saf su ile dilüe edin ve iyice karıştırın. Buffer tuzları biraz crystalize olabilir.
Tamamlanan çözünmeden emin olmak için dilüe edilmiş bufferlı şişesinden alınan
kristalleri yıkayın.
3.İdrar Protein Boyama
Coomassie Mavi toz boya içerir. Toz boya paket üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar stabildir. Suda 50% metanoldan 1 litresini şişe içeriğinde çözün. 20
ml glasial asetik asit ekleyerek asidik yapın. İyice karıştırın ve kullanım öncesi
filtre edin.
4. Diğer Kit Bileşenleri
Her kit kullanım talimatları ve 10 jeli tamamlamak için yeterli miktarda Numune
Aplikasyon Tablası ve kurutma kağıdı A ve C içerir.
SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ
1. SAS-MX İdrar Protein Jel
Jeller 15-30 derecede saklanmalıdır ve paket üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar stabildir. DOLABA KOYMAYIN VEYA DONDURMAYIN. Jelin
bozulması : ,1) jelin dondurulması kristal görünümü belirtir, 2) jelin kuruması,
çatlama ve kuruluğu veya 3) bakteriyal ya da fungal kaynaklı agarozun
kontaminasyonunu belirtir.
2 - Tris / Barbital Buffer
Konsantre buffer 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son
kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe boya solüsyonu 15-30 derecede 2 ay
stabildir. Bufferın bulanık ve zayıf performansı bozulduğunu belirtebilir.
3- İdrar Protein Boyama
Konsantre boya 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son
kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe boya solüsyonu 15-30 derecede 6 ay
stabildir. Zayıf boyama performansı bozulduğunu belirtebilir.
SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER
Katalog No.4063 SAS-MX odası
Katalog No.1525 EPS600 Güç kaynağı
Katalog No.3032 İdrar Protein İç Standart
50-60 derece hava üfleme kapasiteli kurutma fırını
Sabitleme Solüsyonu: 500ml saf su ile 500ml metanol karıştırın. 100 ml glasial asetik
ekleyin. İyi kapatılmış bir şişede saklanır.
Boya arındırıcı solüsyon: 950 ml saf su ve 50 ml glasial asetik asit karıştırın. İyi
kapatılmış bir şişede saklanır.
Saf su
NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI
Tercih edilen numune taze toplanan idrardır. Numuneler 2...6°C de 72 saate kadar
yada -20°C de 2 haftaya kadar buzdolabında saklanmalıdır.
Total protein 1000mg/L’ın üstünde olmazsa numuneler konsantrasyon veya dilüsyon
olmadan başlangıçta kullanılmamalıdır.
Eğer tamamlanmış jel densitometre ile taranırsa, İdrar Toplam Proteinin göstergesi
ya da tek tek protein bölgesinin konsantrasyonu numune hazırlama prosedürü içinde
İdrar Protein İç Standart ‘ın (Kat. No. 3032) birleşmesi ile yapılabilir. Kullanım
talimatları her İdrar Protein İç Standart ile sağlanır.
ADIM-ADIM PROSEDÜR
1.Jeli paketinden çıkarın ve kağıt havlu üstüne koyun. Ambalajını çıkarın ve kurutucu
C ile jel yüzeyini kurutun ve kurutucuyu atın.
2.Jel köşesindeki oklarla numune aplikasyon kalıbını hizalayın ve kalıbın başına
kurutucu A’yı koyun ve iyi temas sağlaması için yarığın içine parmağınızı sürtün.
Kurutucuları alın ve adım 5'te kullanmak için saklayın.
3.Her yarığa 5μl numune uygulayın ve 20 dakika absorb olması için bırakın.
4. Numune emiliyorken, SAS-MX odasının her iç bölümüne 25ml buffer dökün.
5.Numune emilimi ardından, adım 2 den kalan kurutucu A ile kalıbı kurutun ve hem
kurutucuyu hem de kalıbı alın.
6. Jeli oda içine agoraz tarafı aşağı olacak şekilde yerleştirin. Odanın başına karşılık
gelen pozisyonlar ile pozitif (+) ve negatif (-) tarafları hizalayın.
7.Elektroforez jel: 80 volt, 25 dakika
8.Elektroforezin ardından, fiksatif solüsyonunda 5 dakika boyunca jeli sabitleyin.
9. 60...70°C’de jeli kurutun. Not: Eğer jel 60°C’den yukarıda kurursa, jelin
bulanıklaşması gibi bazı problemlere neden olabilir.
10. Kuru jeli boya solüsyonu içine 10 dakika daldırın.
11. Arka plan temizlenene ya da boya arındırıcı solüsyon 2 x 1 dakika yıkanana
kadar jeli boyadan arındırın.
12.Saf suda kısa süre jeli yıkayın ve kurutun.
KALİTE KONTROL
Normal bir serum numunesi (saf suda 1:100 oranında dilüe edilmiş) her bandın
konumunu belirlemek için kullanılabilir.
SONUÇLARIN YORUMLANMASI
1.Kalitatif Değerlendirme:
Jelde mevcut bantların görünür yorumu:
Proteinuria’ nın tipi
Normal ürin
Glomerular
Jelde görülen bantlar
küçük albümin bant
albümin, alfa-1, beta,
gama
Mevcut proteinler
albümin
albümin,
alfa-1,
antitripsin,
transferrin, gama globulinler
Tubüler
alfa-1, alfa-2, beta
Taşan
gama veya çeşitli
Retinol
bağlayıcı
Protein,
beta2-mikroglobulin,
alfa-2
mikroglobulin
immunoglobulins,Serbest ışık
zincirleri
2.Kantitatif Değerlendirme: 595nm de, oturtulan jeller taranır.
Diğer bir durumda, genel olmayan idrar bileşenlerinin tespiti ileri araştırmaları
gerektirir. Tamamlanan SAS-MX idrar Protein jeli süresiz bir zaman için stabildir.
İdrarda protein tanımlanması immunofixation tarafından Helena Biyoteknoloji SASMX İdrar IFE kiti kullanılarak elde edilebilir (Kat.no.100600)
SINIRLAMALAR
Bariz kristal çökeltisi bulunan numuneler kullanmadan önce santrifüj edilmelidir.
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
a) Tekrarlanabilirlik
400mg/L ve 20mg/L içeren protein numunesi dansitometre ile düşük protein
konsantrasyonu ve jel içi ve jel arası tekrarlanabilirliği belirlemek için üç jel üzerinde 5
kez test edilmelidir.
400mg/L
20mg/L
Jel İçi
Ortalama (%)
62.8
10.8
CV(%)
1.3
7.0
Jel Arası
Ortalama (%)
CV(%)
62.4
1.6
11.9
12.1
b) Hassasiyet
Tamamlanan jelde bir ayrık bant gibi görünen proteinin en düşük konsantrasyonu
olarak band başına 25ng (numunede 5mg/L’ye eştir) belirlenmiştir.
c)Doğrusallık
Metodun doğrusallığı, jel performansı gibi densitometre özelliğinin bir fonksiyonudur.
Laboratuarda kullanılan densitometreye dayalı metodun doğrusallığının belirlenmesi
her müşteriye tavsiye edilir.
d) Total Proteinin kantifikasyon korelasyonu
İdrar numunelerinin değeri densitometre tarafından toplam proteini belirlemek için
İdrar Protein İç Standart (Kat. No. 3032) kullanılarak SAS-MX İdrar Protein Jelde test
edildi. Elde edilen değerler (mg/L) değerler, Pyrogallol bir kırmızı- molybdate
komplekse dayalı piyasada bulunan test sistemi kullanılarak idrar toplam protein için
elde edilen değerler ile karşılaştırıldı6.
BİBLİYOGRAFİ
1. Fauchier, P. and Catalan, F. ‘Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis’ Alfred Fournier
Institute, Paris, France, 1988.
2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. ‘Finding Clues to Disease in Urine’
Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75.
3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A
Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein
Concentrations’ Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-172.
4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination of Urinary Protein Fractions by Different
Electrophoretic Methods’, Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262.
5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S.
‘A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin.
Biochem., 1997, 34 : 371-374.
6. Microprotein-PRTM (Procedure No. 611) Sigma Diagnostics, September 1995.