Y Delesyon 8 Bölge PCR Kiti

Y MĐKRODELESYON 8 BÖLGE PCR KĐTĐ
Kat. No: SNPYD-8
GĐRĐŞ
DNA ĐZOLASYONU
Y Kromozomu üzerindeki mikrodelesyonlar Klinefelter sendromundan
Kit genomik DNA ile çalışmaktadır. Kaynak olarak tam kan kullanılmalı,
sonra
Y
kanlar EDTA’lı tüplere alınmalı, alındıktan hemen sonra bir kaç kez tüpü
kromozomundaki Ydq11.23 bölgelerinin (AZFa, AZFb, ve AZFc) V ve
en
sık
çevirmek suretiyle kanın pıhtılaşmadan tüp içeriğindeki EDTA ile
VI
genlerini
karışması sağlanmalıdır. Kan tüpleri, bir iki hafta içinde DNA izolasyonu
içermektedir. Bu bölgelerdeki mikrodelesyonlar azospermia’ ya neden
yapılacaksa + 4°C ‘de, daha uzun süre bekletilecekse – 20°C de
olmaktadır.
saklanmalıdır.
tekrarlanan
görülen
spermatogenesis
bölgeleri
eksikliği
spermatogenesis
sebebidir.
sorumlu
Kandan Genomik DNA izolasyonu, herhangi bir spin kolon yöntemiyle
KĐT PRENSĐBĐ
yapılabilir. DNA elde edildikten sonra – 20°C de saklanmalıdır. Y
Test prensibi klasik PCR ve Agaroz Jel Elektroforezidir.
Mikrodelesyon 8 Bölge Real Time PCR Kiti, MN NucleoSpin®Blood ve
PCR, nükleik asitlerin in-vitro olarak (canlı organizma dışında), uygun
Axygen Blood Genomic DNA kitlerine göre optimize edilmiştir.
koşullar altında çoğaltılmasına dayanmaktadır. Çoğaltılmak istenen
bölgenin iki ucuna özgü, bu bölgedeki baz dizilerine tamamlayıcı olan,
TEST PROSEDÜRÜ
18-25 baz uzunluğunda bir çift sentetik oligonükleotid primer
•
Her miks ayrı ayrı tüplerde çalışılmalıdır.
kullanarak, bu iki primer ile sınırlandırılan bölgenin enzimatik olarak
•
Bir örnek için, her 0,2 ml PCR tüpüne, 44,5 µl master miks ve
sentezlenmesi sağlanır.
0,5 µl Hot Start Taq DNA Polimeraz konulur. Daha sonra 5 µl
DNA’nın elektroforetik analizinin temeli, bu molekülün elektriksel bir
(~10-100 ng) örnek DNA ‘sı ilave edilir.
alanda, jel üzerinde hareketine dayanmaktadır.
ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ
•
Hafifçe pipetlenerek karıştırılır.
•
Aşağıda belirtilen programla çalıştırılır.
•
Birden fazla örnek için, Master miks ve Hot Start Taq DNA
Kit, PCR için gerekli tüm bileşenleri içerisinde bulundurur. Y
Polimeraz miktarları, çalışılacak örnek sayısı ile çarpılmalı, oluşan
kromozomunun ilgili bölgelerine ait spesifik primerler yardımı ile analiz
karışımdan 45 µl tüplere bölünmeli ve ayrı ayrı örnek DNA’ları
yapılmaktadır.
konulmalıdır.
Kit
ayrıca
internal
kontrol
içeriği
ile
PCR
reaksiyonunuzun çalışmasını da kontrol etmektedir.
PCR PROGRAMI
KĐT ĐÇERĐĞĐ
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Bileşen
SY14 (Kontrol) PCR Master Miks
ZFY (Kontrol) PCR Master Miks
SY84 (AZF-a) PCR Master Miks
SY86 (AZF-a) PCR Master Miks
SY127 (AZF-b) PCR Master Miks
SY134 (AZF-b) PCR Master Miks
SY254 (AZF-c/DAZ) PCR Master Miks
SY255 (AZF-c/DAZ) PCR Master Miks
Hot Start Taq DNA Polymerase
Kontrol DNA
10 Test
495 µl
495 µl
495 µl
495 µl
495 µl
495 µl
495 µl
495 µl
55 µl
50 µl
SAKLAMA KOŞULLARI
•
Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır.
•
Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar kullanılabilir.
•
Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden
olabilir.
95 °C
10 Dk.
95 °C
15 Saniye
60 °C
1 Dk.
35 Döngü
ANALĐZ
OLASI PROBLEMLER
PCR işlemi bittikten sonra, PCR ürünleri % 2.5 lik Agaroz jelde, tank
Eğer bantlar silikse,
büyüklüğüne uygun voltaj ve sürede yürütülür. Bu süre 10 cm x 10 cm
•
Örnek DNA’sı saf değildir veya az miktarda inhibitör içeriyor
ebatlarına göre değişebilir. Jel yürütüldükten sonra UV tablası üzerine
•
Yeterli miktarda DNA elde edilememiş olabilir.
alınıp, ilgili bantlar açısından analiz edilir. Eğer bant yoksa “delesyon
•
Hot Start Taq DNA yetersizdir ya da iyi karışmamış olabilir.
bir jel için ortalama 160 V ve 40 dakikadır. Bu değerler farklı tank
olabilir.
vardır” sonucu verilir. Her bölgeye ait AZF bölgesi ve bant uzunlukları
aşağıdaki tabloda verilmiştir.
UYARILAR
•
Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır.
•
Oda sıcaklığında unutulmuş PCR master miksleri kullanılmamalıdır.
•
PCR master miksi oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı
Bölge
Uzunluk (bp)
ZFY
495
edilerek hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir.
SY14
470
•
Master miksler tüplere bölündükten sonra Hot Start Taq DNA
Polimeraz ve DNA eklenerek hemen PCR işlemine geçilmelidir.
SY84
420
SY86
318
SY127
274
SY134
298
belirtilen türlerin tespitinde vücut dışı test kiti olarak kullanılır.
SY254
380
•
SY255
124
Đnt. Kont.(SY255 için)
312
Đnt. Kont. (Diğer bölgeler için)
122
•
Belirtilenden fazla Hot Start Taq DNA Polimeraz koyulmamalıdır.
•
Yukarıda belirtilen PCR programı uygulanmalıdır.
•
PCR master miksleri vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece
PCR master mikslerin raf ömrü 6 aydır. Kullanmadan önce üretim
tarihine dikkat edilmelidir.
Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012
M
1
2
3
4
5
6
7
8
M
M: Marker, En alt banttan, başlayarak yukarıya doğru, 100 bp, 200 bp,
300 bp…