MYCOPLASMA PCR KĐTĐ

MYCOPLASMA PCR KĐTĐ
Kat. No: SNP-MYC
GĐRĐŞ
SAKLAMA KOŞULLARI
SNP Mycoplasma PCR Kiti, hücre kültürü gibi biyolojik materyallerde mycoplasma
•
Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır.
türlerini tespit eder.
•
Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine
kadar kullanılabilir.
KĐT PRENSĐBĐ
•
Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden olabilir.
Test prensibi klasik PCR ve Agaroz Jel Elektroforezidir.
PCR, nükleik asitlerin in-vitro olarak (canlı organizma dışında), uygun koşullar
DNA ĐZOLASYONU
altında çoğaltılmasına dayanmaktadır. Çoğaltılmak istenen bölgenin iki ucuna
Besiyerinden Bakteriyel DNA izolasyonunun yapılması gerekmektedir. Kitimiz,
özgü, bu bölgedeki baz dizilerine tamamlayıcı olan, 18-25 baz uzunluğunda bir
SNP DNA Đzolasyon Sistemine göre optimize edilmiştir.
çift sentetik oligonükleotid primer kullanarak, bu iki primer ile sınırlandırılan
bölgenin enzimatik olarak sentezlenmesi sağlanır.
TEST PROSEDÜRÜ
DNA’nın elektroforetik analizinin temeli, bu molekülün elektriksel bir alanda, jel
•
üzerinde hareketine dayanmaktadır.
Bir örnek için, her 0,2 ml’lik PCR tüpüne, 45 µl master miks ve 0,5 µl Hot
Start Taq DNA Polimeraz konulur. Sonra 5 µl (~10-100 ng) örnek
DNA ‘sı ilave edilir.
ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ
•
Hafifçe pipetlenerek karıştırılır.
Kit, PCR için gerekli tüm bileşenleri içerisinde bulundurur. Tüm mycoplasma
•
Aşağıda belirtilen programla çalıştırılır.
türlerine spesifik primer yardımı ile örnekteki mycoplasma türlerinin varlığı tespit
•
Birden fazla örnek için, Master miks ve Hot Start Taq DNA Polimeraz
edilir.
miktarları, çalışılacak örnek sayısı ile çarpılmalı, oluşan karışımdan 45 µl
tüplere bölünmeli ve ayrı ayrı örnek DNA’ları konulmalıdır.
TESPĐT EDĐLEBĐLEN MYCOPLASMA TÜRLERĐ
M. fermentans
M. gallisepticum
M. ovipneumoniae
M. hyorhinis
M. pulmonis
M. pirum
M. arginini
M. arthritidis
M. capricolu
M. orale
M. bovis
Ayrıca Acholeplasma
M. salivarium
M. pneumoniae
Ayrıca Spiroplasma
M. hominis
M. haemofelis
M. genitalium
M. hyopneumoniae
Kit ayrıca internal kontrol içeriği ile PCR reaksiyonunuzun çalışmasını da kontrol
etmektedir.
KĐT ĐÇERĐĞĐ
•
•
•
Bileşen
Mycoplasma Master Miks
Hot Start Taq DNA Polymerase
Pozitif Kontrol DNA
20 Test
945 µl
15 µl
20 µl
PCR PROGRAMI
95 °C
10 Dk.
95 °C
15 Saniye
60 °C
1 Dk.
35 Döngü
ANALĐZ
OLASI PROBLEMLER
PCR işlemi bittikten sonra, PCR ürünleri % 1’ lik Agaroz jelde, tank büyüklüğüne
Eğer internal kontrol çalışmıyorsa,
uygun voltaj ve sürede yürütülür. Bu süre 10 cm x 10 cm bir jel için ortalama 160
•
V ve 40 dakikadır. Bu değerler farklı tank ebatlarına göre değişebilir. Jel
•
Hot start Taq DNA Polimeraz eksikliği veya yetersizliği,
yürütüldükten sonra UV tablası üzerine alınıp, ilgili bantlar açısından analiz edilir.
•
Test’te inhibitör varlığı ,
Eğer bant yoksa “negatif” sonucu verilir. Her bölgeye ait AZF bölgesi ve bant
söz konusudur.
uzunlukları aşağıdaki tabloda verilmiştir.
DNA eksikliği,
Eğer pikler geç başlıyorsa,
Öncelikle örneklerinizin piklerini pozitif kontrol DNA pikleri ile karşılaştırın. Eğer
Bölge
Uzunluk (bp)
Mycoplasma
250
Đnt. Kont
122
pozitif kontrol DNA da bir sorun yoksa,
•
Örneğinizin DNA’sı saf değildir veya az miktarda inhibitör içeriyor olabilir.
•
Yeterli miktarda DNA elde edememiş olabilirsiniz.
Böyle durumlarda çalışma tekrar edilmeli eğer aynı problem devam ediyorsa
yeniden DNA izolasyonu yapılmalıdır.
Daha fazla soru ve problem için, lütfen Ar - Ge bölümü ile temasa geçiniz.
[email protected].
UYARILAR
•
Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır.
•
Oda sıcaklığında unutulmuş PCR master miksleri kullanılmamalıdır.
•
PCR master miksi oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı edilerek
hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir.
•
Master miksler tüplere bölündükten sonra Hot Start Taq DNA Polimeraz ve
DNA eklenerek hemen PCR işlemine geçilmelidir.
•
Belirtilenden fazla Hot Start Taq DNA Polimeraz koyulmamalıdır.
•
Yukarıda belirtilen PCR programı uygulanmalıdır.
•
PCR master miksleri vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece belirtilen
türlerin tespitinde vücut dışı test kiti olarak kullanılır.
•
PCR master mikslerin raf ömrü 6 aydır. Kullanmadan önce üretim tarihine
dikkat edilmelidir.
Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012
Jel fotoğrafındaki örnekler;
1.
100 bp marker – Aşağıdan yukarıya doğru 100-200-300 …. Şeklinde bant
veren bu marker sayesinde diğer bantlarımızın uzunluklarını tespit edebiliriz.
2.
Negatif örnek
3.
Negatif örnek
4.
Negatif örnek
5.
Negatif örnek
6.
Negatif örnek
7.
Negatif örnek
8.
Negatif örnek
9.
Pozitif örnek
Alt tarafta 100 bp civarında gördüğümüz bantlar internal kontrole ait. En altta
gördüğümüz parlaklıklar ise “primer dimeri” dediğimiz ışıltılar. Primer dimerleri
değerlendirmeye alınmaz.