V8 İdrar Analiz Kolon SPE Kit REF: 800408 KULLANIM AMACI V8 Serum Protein SPE Kit ile birlikte V8 İdrar Analiz Kolon SPE Kit Kapiler Elektroforez (CE) tarafından idrar proteinin kantifikasyonu ve ayrıştırılması için tasarlanmıştır. İdrar proteinleri öncelikle böbrek yoluyla filtre edilen plazma proteinlerinden elde edilmiştir. İdrarda anormal plazma proteinlerinin görünümü renal fonksiyon değerlendirmesinde büyük değerdir. Proteinürinin uygun çalışması ekstre edilmiş proteinlerin miktarının ve tipinin kantitatif ve kalitatif değerlendirmesini içermelidir. UYARILAR VE ÖNLEMLER Kitte bulunan reaktifler sadece in-vitro diagnostik kullanımı içindir. Yutmayın veya ağızla pipetleme yapmayın. Çalışma yaparken eldiven giyin. Atık bilgisi, risk ve güvenlik fazları için ürün güvenliği veri sayfasına bakın. BİLEŞENLER 1. V8 İdrar Protein Buffer SPE. REF HL-3-2200SA (3 x 100ml) Her kit 20 testin tamamlanması için yeterli İdrar Protein Buffer içerir. Buffer kullanıma hazırdır. 2. İdrar Protein Desalting (Tuz ayıran) Kolonlar REF HL-3-2167SA (x 20). Kolon kullanıma hazırdır. 3. Kullanım manueli. Her bir kit kullanım kılavuzu içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ V8 İdrar Protein Buffer SPE. Urine Protein Buffer 15…30°C’de saklanmalıdır ve şişe üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Açılmış şişeler 15…30°C’ de 4 hafta stabildir. GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAYAN ÖĞELER REF 800500 V8 Serum Protein SPE Kit REF 830100 V8 Storage Buffer REF 830200 V8 Maintenance Buffer REF 830400 V8 Clinical Waste Drawer Pack İSTEĞE BAĞLI ÖĞELER REF 800300 V8 Immunodisplacement Kit (if conducting serum or urine immunodisplacement) REF 820500 V8 Free Kappa / Free Lambda Kit (if conducting serum or urine immunodisplacement) REF 821400 V8 Anti IgD / Anti IgE Kit (if conducting serum or urine immunodisplacement) NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI Tercih edilen örnek taze toplanmış idrardır (24 saatlik toplama). Örnekler 7 güne kadar 2-6 derecede saklanabilir. Uzun süreli saklamalar için, örnek -70°C’de 1 aya kadar saklanabilir. Örnekleri -20°C’de saklamayın. ADIM-ADIM PROSEDÜR 1. Tuz ayırma (desalting) kolonundan alt ve üst kapaklar çıkarın ve kolon boyunca fazla sıvıyı akıtın. Buffer akış yönünü yakalamak için uygun bir atık kapı üzerinde kolonu tutun. Not: Kolon boyunca fazla sıvıyı akıtmamak düşük akış oranına neden olacaktır. 2. 10ml Urine Protein Buffer ile kolonu dengeleyin. Not: Bu hacim 3 tam doldurulmasına karşılık gelir. 3. Yerçekimi akışı ile jel yatağına tamamen girmesi için İdrar Protein Buffer ekleyin. Pozitif basınç uygulamayın. 4. Bufferın kolon boyunca damlaması durduğunda, 0.5 ml max. hacim için kolona idrar örneği ekleyin. Örnek jel yatağına tamamen girmesi için bırakılır. 5. Kolonun üstüne 0.35ml İdrar Protein Buffer ekleyin. Buffer jel yatağına tamamen girmesi için bırakılır. 6. Kolonun altına uygun bir boyut toplama tüpü yerleştirin. 0.5ml Urine Protein Buffer ile idrar örneği ayrıştırın. Final örnek hacmi 0.5ml olmalıdır. 7. Kullanımdan sonra tuz ayırma kolonunu atın. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Monoklonal proteinlerin çoğunluğu protein paterni alanında katodik gama bölgesine göç eder fakat onların anormal doğasından dolayı, protein elektroforezinde globulin bölgesinde herhangi bir yere göç edebilirler. Anormal proteinin düşük konsantrasyonları bulunduğunda, anormal bant normal poliklonal immünoglobulin içinde bir bant gibi görülebilir. Ayrıca bir bant, bir büyük poliklonal immünoglobulin bulunduğunda bir poliklonal içinde görülebilir. SINIRLAMALAR 1. Kappa veya Lambda hafif zincir antiserumu ile reaksiyon gösterir fakat IgG, IgA veya IgM ağır zincir antiserumu ile reaksiyon göstermez. Bu paterni gösteren örnekler ya serbest hafif zinciri monoklonal gammopati ya da bir IgD yada IgE monoklonal proteinine sahiptir. Bu durumda ID diğer ağır zincir antiserumların ikisi için IgD ve IgE antiserum yer değiştirerek tekrarlanmalıdır. IgD veya IgE antiserumları ile bir reaksiyon eldesin deki başarısızlık serbest hafif zincir hastalığını belirtebilir. 2. ID antiserum ile reaksiyon göstermeyen gamma bölgesi bant. C reaktif protein (CRP), akut inflamasyon yanıtı olan hastalarda tespit edilebilir1-2. CRP için destekleyici kanıt, yükseltilmiş alfa-1 antitripsin ve haptoglobulindir. 3. Kappa ve Lambda antiserumları ile reaksiyon göstermez. Genellikle bir örnek, ağır zincir antiserumu ile reaksiyon verir fakat hafif zincir reaksiyonu vermez. Bu durumda, aşağıdakiler kabul edilmeza)ağır zincir hastalığı, b)hafif zincirlerinin çok yüksek konsantrasyonlarını izleyen antijen fazlalığı, c)hafif zincirinin düşük konsantrasyonları, d)antiserum ile reaksiyon vermeyen atipik hafif zincir molekülü, e)‘hidden’ hafif zincir determinantlarına sahip hafif zincirler (IgA ve IgD). Kesin sonuçlar elde etmek için, test: a) Antijen/antikor denkliğini optimize etmek için örneğin daha yüksek veya daha alçak dilüsyonu içerebilir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Numune serileri test edildi ve diğer ticari test kiti ile karşılaştırıldı-her iki kit de eşit sonuçlar verdi. Duyarlılığı: V8 İdrar Analiz yöntemi 20μg/ml (0.020g/L) seviyesinde tek bir banda eşdeğer idrar proteinlerini tespit edebilir. BİBLİYOGRAFYA 1. Jeppsson, J.O., Laurell, C.B. and Franzen, B., ‘Agarose Gel Electrophoresis’, Clin. Chem., 1979; 25 (4) : 629-638. 2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., ‘Protein Analysis’, Diagnostic Medicine, 1980; Jan/Feb : 3-15.