FAST-ID Genetic Identification Kit Kimerizm Analiz Paneli

FAST-ID® Genetic Identification Kit
Kimerizm Analiz Paneli
Kişi Tanımlama Amaçlı Kullanım İçin
KULLANIM KILAVUZU
İÇİNDEKİLER
1
GİRİŞ .................................................................................................................................. 3
2
KİT İÇERİĞİ ...................................................................................................................... 3
3
SAKLAMA ......................................................................................................................... 3
4
GEREKLİ MATERYAL VE CİHAZLAR ......................................................................... 3
5
ÖNEMLİ NOTLAR VE GÜVENLİKLE İLGİLİ UYARILAR ........................................ 3
6
YÖNTEM ........................................................................................................................... 4
6.1
REAKSİYON MİX HAZIRLANMASI ...................................................................... 4
6.2
PCR AŞAMASI ........................................................................................................... 4
7 ABI PRISM® 3130/3130xl GENETIC ANALYZER KULLANILARAK
ELEKTOFOREZ AŞAMASI ..................................................................................................... 5
8
KULLANIM KISITLAMALARI ....................................................................................... 6
9
OLUMSUZ ETKILI MADDELER .................................................................................... 6
SEMBOLLER ............................................................................................................................ 6
1
GİRİŞ
FAST-ID Genetic Idetification Kit, kan ve kemik iliği kök hücre naklinden sonra kimerizm izleme için özel olarak geliştirilen
multipleks PCR uygulamalarına uygun bir paneldir. Rutin kullanımda FAST-ID Genetic Idetification Kit paneli tarafından ele alınan genetik
belirteçler yüksek oranda heterozigotluk ve dengeli bir alel dağılımı ile yüksek polimorfik kısa tandem tekrarlarını (STR'leri) temsil
etmektedir.
Bir PCR reaksiyonu aynı anda, D3S1358, D7S820, CSF1PO, D13S317, D16S539, D18S51, FGA otozomal lokusları ve cinsiyete
ilişkin Amelogenin (eşey belirteci) bölgerini çoğaltır.
Her lokus için primerler 6-FAM, VIC, NED veya PET floresan etiketlidir.
2
KİT İÇERİĞİ
FAST-ID Genetic Idetification Kit Multipleks PCR Paneli (50 Reaksiyon)
3
Fast-ID Mix1
500 µl
Fast-ID Mix2
100 µl
SAKLAMA
Tüm bileşenler -20°C’de saklanmalıdır. Bileşenler PCR hazırlanırken oda sıcaklığında 10-15 dakikadan fazla bırakılmamalıdır.
Bileşenler uygun koşullarda saklanmaları halinde, etiketlerin üzerindeki son kullanma tarihlerine dek stabilitelerini korurlar.
4
5
GEREKLİ MATERYAL VE CİHAZLAR

Agarose jel görüntüleme sistemi

DNA izolasyon Kiti

ABI Dizileme Cihazı ve aksesuarları

Sequencing Buffer

Spektrofotometre

0.2 ml ince çeperli PCR tüpleri ya da stripler

Derin dondurucu (-20°C)

Vortex karıştırıcı

PCR Cihazı

2 ml. Mikrosantrifüj tüpleri için rotoru bulunan tezgah üstü santrifüj

Ayarlanabilir mikropipetler

Steril, filtreli mikropipet uçları

Steril 1.5 veya 2 ml. mikrosantrifüj tüpleri

Atılabilir eldiven
ÖNEMLİ NOTLAR VE GÜVENLİKLE İLGİLİ UYARILAR
Dikkat!:

Ürün soğuk zincir altında teslim edilmelidir. Teslim alırken ambalajın soğuk zincir kurallarına uygun olup olmadığını kontrol
ediniz ve size bu şekilde ulaştırılmayan ürünleri kullanmayınız.

Ürünü teslim alırken kutu etiketlerinin üzerindeki son kullanma tarihlerini kontrol ediniz. Son kullanma tarihi geçmiş ürün veya
bileşenleri kullanmayınız.
Ürünün kullanımı esnasında aşağıda belirtilen noktalara dikkat edilmelidir:

Steril, filtreli mikropipet uçları ve steril mikrosantrifüj tüpleri kullanılmalıdır.

Çalışmaya başlanmadan önce tüm bileşenler oda sıcaklığına getirilmelidir. Kullanılmadan önce içeriklerinin homojen hale
gelmesini sağlamak için, tüm bileşenler çözdürüldükten sonra karıştırılmalı ve kısaca santrifüjlenmelidir.

Kit bileşenleri reaksiyon hazırlanana dek buz ya da soğutucu blok üzerinde tutulmalı, ve kullanımın ardından hemen -20ºC’ye
kaldırılmalıdır.

PCR ve nükleik asit izolasyonu farklı kompartmanlarda/yerlerde/bölümlerde yapılmalıdır. Örnekler, kit bileşenleriyle temas
etmemeleri için ayrı bir yerde muhafaza edilmelidir.
Herhangi bir risk durumu oluşturmaması içinaşağıda belirtilen güvenlik talimatlarına uyulmalıdır:

Klinik örneklerle çalışılırken çok dikkatli olunmalıdır: Örneklerle fiziksel temastan kaçınılmalıdır; laboratuvar önlüğü ve eldiven
giyilmeli, çalışma alanında yeme ve içmeye izin verilmemeli, görevli olmayan kimselerin çalışma alanına girişi engellenmelidir.

Nükleik asit izolasyonu aşamasında oluşan atıklar, tıbbi atığa atılmalı ve güvenli bir biçimde uzaklaştırılmalıdır.

Daha detaylı bilgi için www.multigen.com.tr adresindeki güvenlik bilgi formuna bakabilirsiniz.
6
YÖNTEM
6.1 REAKSİYON MİX HAZIRLANMASI
Aşağıdaki tabloda verilen hacimlerde PCR bileşenleri her 25 µl PCR reaksiyonunda 5µl DNA örneği olacak şekilde hesaplanmıştır.
Pipetleme hatalarına karşı hazırlanan PCR mix bir ya da iki reaksiyon fazladan hazırlanabilir. Bütün bileşenler kullanılmadan önce
vortekslenmelidir.
Tablo 6.1 Reaksiyon Mix İçeriği
Bileşen
Miktar
Fast-ID Mix1
10 µl
Fast-ID Mix2
2 µl
DNA Örneği
3 µl
Reaksiyon
Toplamı
Master
Mix 15 µl
6.2 PCR AŞAMASI
Tablo 6.2 PCR Termal Profili.
Sıcaklık
Süre
94 ˚C
2 dk
94 ˚C
15 sn
60 ˚C
30 sn
72 ˚C
30 sn
72 ˚C
15 dk
4 ˚C
∞
Başlangıç denatürasyonu
27 döngü
7
ABI PRISM® 3130/3130xl GENETIC ANALYZER KULLANILARAK
ELEKTOFOREZ AŞAMASI
Floresan primerlerle yapılan PCR işleminden sonra örneklerin genetik analizörde yürütülerek sonuçların görülebilir. Bu basamakta
Applied Biosystems ABI 3130/3130XL cihazı kullanılabilir. Bu sistem ile yapılacak yürütme için aşağıda belirtilen miktarlarla bir karışım
hazırlanmalıdır.
•GeneScan™ 500 LIZ® Size Standard
: 0,3 mikrolitre
•HiDi Formamide
: 8,7 mikrolitre
Hazırlanan bu karışım için önerilen standart yürütme prokolü aşağıdaki gibidir:
•Yürütme Modülü: FragmentAnalysis36_POP7_1
•Injeksiyon: 3 kV/10 sec
•Dye Set: G5
Tablo 7.1 Yürütme Modül Ayarları
İŞLEM
Oven Temperature (°C)
DEĞER
60
İŞLEM
Injection Time (saniye)
DEĞER
15
Voltage Number of Steps
(nk)
Voltage Step Interval
(saniye)
20
60
Poly_Fill_Vol (basamak)
4840
Current Stability (mAmp)
5
PreRun Voltage (kVolt)
15
Data Delay Time (saniye)
Pre_Run_time (saniye)
180
Run Voltage (kVolt)
15
Injection Voltage (kVolt)
3
Run Time (saniye)
1000
15
Genetik analizörde yürütme işlemi için:
1. Analiz edilecek örnekler için belirtilen oranlarda karışımlar örnek sayısı hesaplanır.
2. Hesaplanan hacimlerde bileşenler polipropilen tüpe aktarılır.
3. Tüp vortekslenir ve kısaca santrifüjlenir.
4. MicroAmp® Optical 96-Well Reaction Plate içinde yer alan her bir kuyucuğa;
• 9 µL formamide:size standard karışımı
• 1 µL PCR ürünü ya da allelic ladder
Not: Boş kalan kuyucuklar için 10 µL formomide ekleyiniz.
5. Daha sonar plate üzerini uygun bir septa ile kapatın ve her bir kuyucukta bulunan bileşenlerin kuyucuğun
dibinde toplanması için kısa bir santrifüj işlemi yapın.
6. Plate inkübasyon için 3 dakika 95°C’de ısıtılmalıdır.
7. Daha sonra plate derhal buz ya da soğutucu blok üzerine alınıp 3 dakika bekletilmelidir.
8. Plate, plate aparatları ile uygun bir şekilde genetik analizöre yerleştirilir.
9. Analiz için plate tasarımının tamamlandığından emin olun ve plate ile tasarım arası bağlantıyı sağlayın.
10. Tüm bu işlemleri yaptıktan sonra örnekleriniz analiz için hazırdır. Elektroforez aşamasına başlayabilirsiniz.
8
KULLANIM KISITLAMALARI



9
Tüm bileşenler vücut dışında tanı amaçlı olarak kullanılabilir.
Bu ürün, bu kullanım kılavuzu uyarınca kullanılmalıdır.
Bu ürün özel olarak vücut dışında tanı amaçlı prosedürleri uygulama konusunda eğitim almış personel tarafından kullanılmalıdır .
OLUMSUZ ETKILI MADDELER

Heparin ya da EDTA gibi antikoagülanlar içeren tüplere toplanmış örnekler,

Hemolitik örnekler,

Heparinize olmuş hasta örnekleri,

Yüksek düzeyde safra tuzları, bilirubin ya da kan yağları içeren hastaların örnekleri
kullanılmamalıdır.
SEMBOLLER
SEMBOL
AÇIKLAMA
Son Kullanma Tarihi
Lot Numarası
Katalog Numarası
Sıcaklık Sınırlaması
Üretici
Üretim Yılı
Vücut Dışında Kullanılan Tıbbi Tanı Cihazı
Avrupaya Uygunluk
Test Sayısı
MULTİGEN Sağlık Hizmetleri Ltd. Şti.
ideEGE Teknoloji Geliştirme Bölgesi TGB-2 Alanı, Mercan Konteyner Park, No:172/70 D (Ofis No: 7) Erzene Mahallesi, Ankara Caddesi,
Ege Üniversitesi Kampüsü, 35100, Bornova / İZMİR
Tel: +90 232 373 73 38
Web: www.multigen.com.tr