sığır karaciğerinden dıhıdropırımıdın dehidrogenaz enzimininin

SIĞIR KARACİĞERİNDEN DIHIDROPIRIMIDIN
DEHİDROGENAZ ENZİMİNİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE BAZI
ANTİBİYOTİKLERİN ENZİM AKTİ\İTESİ ÜZERİNE
ETKİLERİNİN İNCELENMESİ
İmdat AYGÜL, Mehmet ÇİFTÇİ, Murat ŞENTÜRK, Hasan ÖZDEMİR
Atatürk Üniversitesi, Fen-Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, 25240-ERZURUM
Dihidropirimidin
dehidrogenaz
(5,6-dihidroursil:
NADP+oksidoredüktaz E.C.1.3.1.2; DPD). DPD pirimidin katabolizmasının hız
sınırlayıcı başlangıç enzimidir. NADPH kullanarak pirimidin halkasınm 5
ve 6 nolu karbonlar arasındaki çift bağı indirgeyerek dihidropirimidin
oluşumunu katalizler. DPD enzimi nörotransmitter olarak görev yapan (îalanin sentezinde önemli fonksiyona sahiptir ve ayrıca urasilin p-alanine, 5florourasilin a-fluoro-|3-alanine ve timinin P-amino izobutirata
dönüşümünde görev alan kilit enzimdir. Sitozolik enzim olan DPD, çeşitli
memeli dokularında ve özellikle karaciğerde bol miktarda aktif iken, çok az
miktarda böbrek, pankreas, akciğerde de bulunur.
DPD enzimi insan, domuz ve sığır karaciğerinden izole edilerek
saflaştırılmış, aktif enzimin mol kütlesinin 220 kDa civarında bir
homodimer olduğu ve her bir monemeri bir FAD, bir FMN ve dört FeS
grubu içerdiği tespit edilmiştir. Bu çalışmada dihidropirimidin dehidrogenaz
enziminin sığır karaciğerinden saflaştırılması ve bazı antibiyotiklerin enzim
aktivitesı üzerine etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla önce taze sığır
karaciğerinden homojenat hazırlandı ve bu homojenatta amonyum sülfat
çöktürmesi yapıldı. Elde edilen çökelti uygun tamponda çözülüp diyaliz
edildikten sonra, enzim 2',5'-ADP Sepharose-4B afınite kromatografisi
yöntemi ile saflaştınldı. Enzim aktivitesi Podschun ve arkadaşlanmn
metoduna göre 340 nm'de spektrofotometrik olarak belirlendi.
Sonuç olarak enzim, %12,5 verimle ve 1660 kat saflaştınldı. İn vitro
çalışmalar sonucunda antibiyotikler için %Aktivite-[I] grafikleri çizildi ve
bu grafiklerden IC50 değerleri hesaplandı. Çalışmada kullanılan tetrasiklin,
ciprofloxacin, seftazidim, gentamisin sülfat, arnikasın sülfat, sefuroksim,
sefapim, amoksisillin ve cefazolin antibiyotiklerinin IC50 değerleri sırasıyla
0,032, 0,046, 0,136, 1,26, 1,77, 4,33, 4,33, 6,30 ve 13,90 mM olarak
bulundu.
7