Tekrarlayan implantasyon başarısızlığında sperm faktörünün yeri

Tekrarlayan implantasyon
başarısızlığında sperm
faktörünün yeri
Dr. Engin Enginsu, Ph.D.
III. ÜREME TIBBI DERNEĞİ KONGRESİ 2011
Sperm Seçimi Neden Gerekli
IVF uygulamalarının ilk yıllarında sperm ayrıştırma
yapılmıyordu
Sperm seçimi
Motil sperm
Normal morfolojik sperm
Testiküler dokudan sperm ekstraksiyonu
Kromatin yapısı normal sperm…
Fertilizasyon’dan sağlıklı çocuk doğumuna
kadar etkili
Tüm ART uygulamalarında fizyolojik
inseminasyon hedeflenmeli
Semen Analizi


En az iki spermiogram
◦ Ejakülat hacmi
◦ Sperm sayısı
◦ Hareket
◦ Progresif hareket
◦ Morfoloji
Ve:
◦ Aglütinasyon yok
◦ Piyospermi yok
◦ Viskosite normal
1.5’ten 5.0 mL’ye
>15 milyon/mL WHO 2010
>%30
>%30
>%4 normal (MEUSC)
Sperm Anomali Oranı
Hipovolemi; 15
Normal; 44
Oligo; 10
Asteno; 4
Azo; 4
OAT; 2
n=1776
AT; 5
OT; 7
OA; 6
Terato; 4
SPERMED Laboratuvarı 2006
Morfoloji




Baş
◦ Düzgün kontür oval
◦ Akrozom %40-%70
◦ Ekvatorial segment
konturlara uygun
Boyun
Kuyruk
Değerlendirme 10x100
büyütmede
Morfoloji
Semen analizi ile OPU günü arasındaki
zaman morfolojiyi etkilemiyor
(Sukcharoen N. Hum Rep’96)
 Strict Kriterler ile değerlendirildiğinde
◦ Fertil popülasyon cut-off %12
(Günalp S. Hum Rep’2001)

İzole Teratozoospermi
Total globozoospermi
 Makrosefal sperm
 Total pinhead
◦ IUI-D
 Uzun baş
◦ Varikosel
 İzole teratozoospermi IUI a engel değil

Makrosefal Sperm ve PGD
(Kahraman et al.RBM Online, 2004)
Makrosefal Sperm
70
60
46,7
50
40
14,3
30
25
20
10
Abortion Rate
Imp. Rate
12,3
0
Before PGD
After PGD
(Kahraman et al.RBM Online, 2004)
Globozoospermi
Globozoospermi





Globozoospermi kromatinlerin sferik
yapılanması ve akrozomal yapının tümüyle
olmaması ile karakterize bir sendromdur.
DNA yapısı bilinmiyor
Sperm anöploidi oranında artış (vaka sunumu)
(Carrell et al. 1999 - 2001)
Anormal kromatin yapısı DNA zincir kırıkları
(Calogero et al. 2002)
Morfolojik değerlendirme ile tanı konur
Sperm Sentriol Bozuklukları
Sperm sentriolü fertilizasyon ile oosite girer,
duplike olur ve sperm asterini oluşturur
 Sentriol bozuklukları
◦ Embryonik gelişme bozuklukları
◦ İmplantasyon başarısızlıkları
◦ Abortus(Van Blerkom, 1996) (Rawe et al., 2002)

Yüksek magnifikasyonda sperm
seçimi IMSI
Gebelik
52.6 versus 18.4%
İmplantasyon 25.0±25.9 versus 5.9±12.9%
Berkovitz et al. 2003, Hum Rep
Tekrarlayan IVF Başarısızlıklarında
IMSI
Hazout a. 2006, RBM Online
Sperm DNA Hasarı
Spermatogenez sırasında oluşan
kromatin kondanzasyon
bozuklukları
 Spermatogenez ya da üreme
sistemindeki yollarda
meydanagelebilecek apopitozis
 ROS nedeniyle oluşabilecek
oksidatif stres

Sperm DNA Hasarı
Fetal mutasyonlar ve doğacak
bebekte kanser riski
 Kötü embryo gelişimi
 İmplantasyonu azaltır
 Düşük gebelik oranları
 Tekrarlayan gebelik kayıpları
◦ Reviewed in Chohan, et al., J
Androl 27: 53-59, 2006

Sperm DNA Hasarı

Tanısal Testler
 COMET Assay
 Halosperm
 TUNEL
 Chromomycin A3 Test
 DNA Breakage Detection-FISH
 Sperm Chromatin Structure Assay
(SCSA)
Comet Assay
Agaroz üzerine yayılan spermlerde
hücre elektroforezi
DNA migrasyonu değerlendirilir
ANORMAL
NORMAL
Halosperm
◦ DNA kırıklarının saptanması- FISH
◦ Asit ile denatürasyon ve nüklear
proteinlerin çıkmasından sonra halo
değerlendirilmesi
TUNEL Test
DNA kırıklarındaki tek ve çift
sarmal kırıkların saptanması
 TdT-mediated dUTP nick end
labeling (TUNEL)
◦ DNA kırıklarını araştırmaları için
kullanılan en yaygın yöntem

TUNEL: Terminal deoxynucleotidyl
transferase mediated dUTP-biotin Nick
End Labelling
NORMAL KROMATİN
APOPTOTİK KROMATİN
Sperm Chromatin Structure
Assay (SCSA)
◦ Acridine Orange Test
◦ Floresan mikroskop
◦ Flow cytometry
 Yeşil normal, kırmızı DNA kırıkları
◦ DNA Kırıkları = Kırmızı/Kırmızı + Yeşil
 İleri teknoloji malzeme gerekmekte
DFI, HDS
Lin et.al. Fert. Ster. 2008
DFI, HDS
Kennedy et. al. RBM Online 2011
Hyalüronik Asit (HA):
Fizyolojik Sperm Seçimi
PH-20 proteini Hyalüronidaz dan farklı bir
bağlanma bölgesine sahiptir
(Gmaachl & Kreil, 93, Gacesa et al., 94)
• Sperm – Oosit Bağlanmasının Değerlendirilmesi
• Matür Sperm
• Normal Morfolojik Sperm (Kruger)
• Kromatin Yapısı Normal Sperm
• HBA ile IUI veya ICSI seçimi

Gmaachl & Kreil, 93, Gacesa et al., 94
Hyaluron Binding Assay - HBA
Olgun Sperm
•Anöploidi düşük
•Yüksek Fertilizasyon OranıO
Hyaluron Binding Assay - HBA
HBA Sonuçlarının Değerlendirilmesi
>65% bound = good quality sperm
◦Traditional IUI or IVF
<65% bound = “low binders”
◦ 20% of infertile couples
◦ ICSI using PICSI or SpermSlow
Hyalüronik Asit (HA):
Fizyolojik Sperm Seçimi
Parmegianni L et al. 2009 JARG
Sperm Seçimi: Teknikler
Yıkama
 Swim – up
 Swim – out
 Testiküler spermin hazırlanması
 Gradient
 IMSI
 HA bağlı sperm

Sonuçlar




İnseminasyon türü ne olursa olsun sperm
seçimi ART başarısını etkileyen en önemli
faktördür
Sperm morfolojisi ve DNA bütünlüğü
sağlıklı canlı doğumlarda önemli etkendir
Sperm yıkama teknikleri standardize
edilmelidir
IMSI ve HA kullanımı ile fizyolojik ICSI
hedeflenmelidir