108 BS-008 - KimyaKongreleri.org

108 BS-008
Antiapoptotik Bcl-2 Ailesi Proteinlerinin Yapay Membranlara
İnsersiyonu
İsa Gökçea, Fatma Gediklib, Yakup Ulusuc, Sema Bilginb
a) Gaziosmanpaşa Üniversitesi Mühendislik Fakültesi Biyomühendislik Bölümü 60240 TOKAT
b) Gaziosmanpaşa Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi Kimya Bölümü 60240 TOKAT
c) Gaziosmanpaşa Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi Biyoloji Bölümü 60240 TOKAT
[email protected]
Bcl-2 ailesi proteinleri programlı hücre ölümü olarak adlandırılan ve gelişim
biyolojisinden kansere kadar her alanda öneme sahip apoptosis mekanizmasının ilk basamağı
olan düzenlenme (regülasyon) kısmında yer alırlar. Bu ailenin apoptotik proteinleri (Bax, Bad
ve Bid gibi ) hücrenin ölümü için çalışırken antiapoptotik olan proteinler (Bcl-2, Bcl-xl) ise
hücrenin yaşaması için çalışırlar. Hücrenin stoplazmasında hangi grup proteinler fazla miktarda
üretilirse hücre de o proteinlere bağlı olarak o yönde ya yaşar ya da ölür [1].
Grubumuz Bcl-xl ve Bcl-2 proteinleri tam boyutlu bir şekilde Maltoz bağlanma
proteinine füzyon yapılarak rekombinant olarak E. coli’ de üretmiş bulunmaktadır. Daha
önceden ürettiğimiz Bcl-xl-'C (proteinin karboksi ucundaki hidrofobik kısmı olmaksızın) ve
tam boy proteinlerin saflaştırmaları yapıldıktan sonra fonksiyonel olup olmadıklarına SPR
(surface plasmon resonance)adı verilen yüzey plazma rezonans spektroskopisi ile test edilmiştir
[2].
Bcl-2 ailesi proteinlerinin fonksiyonellik çalışması olarak yapılan bu deneyde
proteinlerimizin yapay olarak yapılan membran üzerine bağlanıp bağlanmadığı (insertion)
incelendi. Önce “General Electric Biocore SPR” spektroskopisi üzerinde takılı olan ve yine
Biocore firması tarafından yapılan L1 çipi üzerine DOPC/DOPG ( %90 / %10 v/v) fosfolipidleri
ile hazırlanmış olan lipozom verilerek önce stabil bir membran oluşumu sağlandı. Elde edilen
bu yapay membran birkaç defa kısa süreli 50 mM NaOH ile yıkanarak oluşturulan yapınının
stabil olup olmadığı incelenerek stabilitesinden emin olundu. Daha sonra 200 μl 0.5 mg/ml Bcl2 ailesi proteinlerinden her birinin protein çözeltisi kullanılarak anti-apoptotik Bcl-2 ailesi
proteinlerinin oluşturulan yapay membrana bağlanması (insertion) sağlandı [3].
Proteinlerin her birisi için alınan SPR spektrumunda oldukça stabil yapının L1 çipi
üzerinde oluşturulmasının akabinde verilen tam boy Bcl-xl ve Bcl-2
proteinlerinin
oluşturduğumuz yapay membrana bağlandığını spektrumlardan görmekteyiz. Bu yapılan bu
çalışmalardan tam boy Bcl-xl ve Bcl-2 proteininin Biocore L1 çipi üzerine immobilize edilen
lipozom temeli yapay membrana bağlandığını ve bu şekilde ürettiğimiz Bcl-xl ve Bcl-2
proteinlerinin fonksiyonel olarak çalıştığını göstermekteyiz.
KAYNAKLAR
[1] Adams, J.M., Cory, S., Trends Biochem. Sci., 26 (1), 61-66, 2001.
[2] Nedelkina S., Gokce, I., Ridley, H., Weckerle, C., Magnin, T., Vallette F., Pattus, F.,
Bechinger, B. and Lakey, J.H., Protein Expression and Purification, 60 (2), 214-220, 2008.
[3] Anderluh, G., Beseničar, M., Kladnik, A., Lakey, J.H., Maček, P., Anal Biochem. 344(1),
43-52, 2005.