peptid bağlarına su katılması yoluyla proteinleri

Proteazlar (EC 3.4.21-24 ve 99; peptidil- peptid hidrolazlar) peptid bağlarına su
katılması yoluyla proteinleri hidrolizleyen enzimlerdir. Proteazlar temel olarak
yalnızca selüler metabolik proseslerde önemli rol oynaması ile değil aynı
zamanda endüstri alanında da kullanılan dikkat çekici enzimlerdir. Bundan
dolayı proteolitik enzim çalışmalarına giderek artan bir ilgi vardır. Enzimolojinin
ortaya çıkmasından beri mikrobiyal proteazlar en önemli hidrolitik enzimler
arasındadır ve oldukça çok çalışma yapılmıştır.
Bu çalışmanın amacı, proteazların üretilip saflaştırıldıktan sonra etkili bir
şekilde kullanılabilmesi için faz inversiyon metoduna göre hazırlanmış olan
polisülfon membranına immobilizasyonunun sağlanmasıdır. Çalışmada, uygun bir besi ortamının hazırlanmasından sonra Bacillus subtilis
’in ekimi yapıldı. Külvitasyonun ardından kültür sıvısından hücrelerin santrifüj
ile uzaklaştırılması sağlandı. Süpernatantta amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz
ve ardından jel filtrasyon kromotografisi ile enzim saflaştırıldı. Enzim
çalışmaları sürecinde enzimin protein miktarı, spesifik aktivitesi ve saflaştırma
katsayısı hesaplandı. Saf enzim adsorbsiyon yolu ile polisülfon membran
üzerine immobilize edildikten sonra enzimin kullanım sayısı araştırıldı.
Sonuç olarak, 15 kat saflıkta elde edilen enzimin immobilizasyonu sonunda
yapılan denemelerde immobilize enzimin 11 kez kullanılabildiği belirlendi.
Kaynaklar:
GENÇKAL H. (2004) , Studies on Alkaline Protease Production from Bacillus sp.,
Yüksek lisans (İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü).
Gupta R., Beg Q.K, Lorenz P.,Appl Microbiol Biotechnol, (2002), 59, 15–32