EVA GREEN® ONE-RUN RT PCR KĐT

EVA GREEN® ONE-RUN RT PCR KĐT - 1X
RNA VE DNA ĐÇĐN TAVSĐYE EDĐLEN PCR PROGRAMLARI
KATALOG NUMARALARI
RNA için;
SNPRTQ-SE (10 TEST), SNPRTQ1-E (100 TEST)
50 °C
30 dk.
95 °C
10 dk.
GĐRĐŞ
95 °C
15 sn.
One-run RT PCR kiti, RNA ve DNA ile ilgili PCR çalışmalarına uygun olarak
60 °C
1 dk.
SNPRTQ5-E (500 TEST) , SNPRTQ10-E (1000 TEST)
35-45 döngü
hazırlanmıştır. RNA için Revers transkripsiyon aşamasında, RNaz H
DNA için;
aktivitesini düşürmek amacı ile tasarlanmış M-MLV revers transkriptaz
o
kullanılmaktadır. cDNA sentezlendikten sonra 95 C’de 10 dk bekletilerek
95 °C
10 dk.
Hotstart Taq DNA polimeraz aktive edilmektedir.
95 °C
15 sn.
Kit, DNA ile ilgili PCR çalışmalarına doğrudan cDNA sentez basamağı
60 °C
1 dk.
35-45 döngü
atlanarak kullanılmalıdır.
TEST PROSEDÜRÜ
SĐSTEMĐN PRENSĐBĐ
RNA
molekülü
ile
1 TEST ĐÇĐN;
gerçekleştirilen
PCR
çalışmalarında,
öncelikle
•
19.0 µl qPCR Reaksiyon miks
komplementer DNA (cDNA) sentezine ihtiyaç duyulmaktadır. Bunun için ters
•
Primerler (Forward ve revers primerin her birinden 10 pmol) (*)
transkriptaz (Revers Transcriptase) enzimi ile RNA’nın kalıbı oluşturulmakta
•
RT/Hot Start Taq miks 0,3 µl
ve elde edilen cDNA direk PCR işleminde kullanılabilmektedir.
•
Toplam RNA 1 – 5 µl DNA (1 – 100 ng) (*)
•
Toplam Hacim 25 µl olacak şekilde PCR Grade su ilave edilir.
ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ
•
Hafifçe pipetlenerek karıştırılır.
Kit içerisinde bulunan Reverse Transcripase (M-MLV) 42-50°C’de, azaltılmış
•
Tavsiye edilen PCR programı ile çalıştırılır.
RNaz H aktivitesi ve 220 dakika yarılanma ömrü ile aktivite göstermektedir.
(*) Kit içeriğine dahil değildir. Konsantrasyonlar kullanıcıya ya da çalışmaya göre
değişebilir.
HotStart Taq DNA Polimeraz enzimi, ısıya dayanıklılığı ve spesifikliği
sağlayan
Anti-Taq
monoklonal
antibodiler
ve
enzim
bileşiminden
oluşmaktadır. qPCR Reaction Miks her birinden 0.2 mM olmak üzere dNTP
UYARILAR
ve 2.5 mM MgCl2 içermektedir. Kit PCR inhibisyon özelliği düşük, kararlı yeni
•
Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır.
nesil bir DNA boyası olan EvaGreen® içermektedir. Bağlanmamış olan boya
•
Oda sıcaklığında unutulmuş PCR master miksleri kullanılmamalıdır.
•
PCR master miksi oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı edilerek
fluoresans olmamakla birlikte, çift iplikçikli DNA ile bağlandıktan sonra
yüksek miktarda fluoresans yaymaktadır.
Zehirli değildir ve mutajenik
özellik göstermemektedir. Çalışma sonrası çoğaltılmış hedef DNA’ya
bağlanan EvaGreen® boyası ile elde edilen erime eğrisi sayesinde spesifik
hedef DNA’nın olup olmadığı analiz edilmektedir.
SĐSTEM ĐÇERĐĞĐ
Bileşen
• RT PCR Reaksiyon Miks (1X)
• RT/Hotstart Taq Miks
• 25 mM MgCl2 (*)
• PCR Grade Su
100 Test
2 x 1000 µl
30 µl
500 µl
500 µl
(*)Optimizasyon esnasında ihtiyaç duyulabilir.
SAKLAMA KOŞULLARI
•
Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır.
•
Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar kullanılabilir.
•
Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden
olabilir.
hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir.
•
Master miksler tüplere bölündükten sonra Hot Start Taq DNA Polimeraz
ve DNA eklenerek hemen PCR işlemine geçilmelidir.
•
Belirtilenden fazla Hot Start Taq DNA Polimeraz koyulmamalıdır.
•
Yukarıda belirtilen PCR programı uygulanmalıdır.
•
PCR master miksleri vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece
belirtilen türlerin tespitinde vücut dışı test kiti olarak kullanılır.
•
PCR master mikslerin raf ömrü 6 aydır. Kullanmadan önce üretim
tarihine dikkat edilmelidir.
Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012