KimyaKongreleri.org

BK
XVIII. Ulusal Kimya Kongresi, Kars, 2004
SIĞIR KARACİĞERİNDEN SAFLAŞTIRILAN KATALAZ ENZİMİNİN ÜZERİNDE
BAZI İLAÇLARIN İNHİBİSYON KİNETİĞİNİN İNCELENMESİ
Halit Demir, Salih Aklan, Ali Savran
Yüzüncü Yıl Üniversitesi, Fen-Edebiyat Fakültesi, Kimya Bölümü, 65080, Van
Katalaz enzimi (Hidrojen peroksit, Hidrojen peroksit oksidoredüktaz, E.C.1.11.1.6),
birçok hayvansal ve bitkisel dokuların yapısında bulunan katalaz enzimi (CAT) biyokimyasal
olarak önemli bir fonksiyona sahiptir. Katalaz enzimi, hayvan hücrelerinin peroksizom
organellerinde de bulunur. Birçok enzim gibi katalaz enzimide aynı zamanda bir antioksidant
enzimdir. Katalaz (CAT) aktivitesi, Lück (1963) metodu vasıtasıyla tayin metodu yapılmıştır.
Bizde aynı metodu kullanarak enzim aktivite tayinini yaptık. Bu metod aktivite ölçüm
ortamındaki H2O2 ‘nin CAT vasıtasıyla H2O’ya dönüşümünü sağlarken meydana gelen
absorbans azalmasının 240 nm’ de ölçülmesi esasına dayanmaktadır. Enzim aktivitesi, 1,5 ml
H2O2 çözeltisi 1,45 ml K-Fosfat tamponu (pH: 7,5) çözeltisine ilave edildi. Üzerine 0,05 ml
enzim çözeltisi ilave edildikten 3 dakika sonra 240 nm dalga boyundaki absorbansı okundu.
Protein tayini, standart sığır serum albumin yardımıyla Bradford yöntemine göre 595
nm’de yapıldı(1). İn vitro çalışma için çeşitli ilaçlar kullanıldı ve bu ilaçların inhibisyon
kinetikleri incelendi. Linewear-Burk yöntemi ile Vmax ve Km değerleri bulundu. SDS poliakril
amid jel elektroforezi ile enzimin saflığı kontrol edildi(2). Ayrıca enzimin stabil olduğu pH,
optimum pH değerleri bulundu. Söz konusu saflaştırılan bu enzim üzerinde bazı ilaçların
inhibitör etkilerinin olduğu gözlendi.
Kaynaklar
1. M.M, Bradford Anal. Biochem, 72(1976) 248-51.
2. D.K, Laemmeli. Nature 227(1970) 680-3.
500
KimyaKongreleri.org