490 XIX. Ulusal Kimya Kongresi, Kuşadası, 2005 BKP63
advertisement
XIX. Ulusal Kimya Kongresi, Kuşadası, 2005 BKP63 KATALAZIN FLORİSİL ÜZERİNE ASPARTİK ASİT, GLUTAMİK ASİT VE 6-AMİNO HEKZANOİK ASİT ARA KOLLARI ÜZERİNDEN KOVALENT İMMOBİLİZASYONU VE KARAKTERİZASYONU Özlem Alptekin, Deniz Yıldırım, S. Seyhan Tükel Çukurova Üniversitesi Fen-Edebiyat Fakültesi Kimya Bölümü,BiyokimyaAnabilim Dalı, 01330 Balcalı, Yüreğir-Adana Katalaz (H2O2:H2O2 oksidoredüktaz EC 1.11.1.6) H2O2’nin su ve moleküler oksijene parçalanmasını katalizleyen bir enzimdir. Katalazın bu özelliğinden oksitleyici, ağartıcı veya sterilize edici olarak kullanılan H2O2’nin fazlasının uzaklaştırılması için endüstride, glukoz veya H2O2 biosensörlerinin bileşeni olarak analitik uygulamalarda faydalanmak mümkündür. Bu çalışmada sığır karaciğer katalazı florisil üzerine aspartik asit, glutamik asit ve 6-amino hekzanoik asit ara kolları üzerinden kovalent olarak immobilize edilmiştir. İmmobilizasyon işlemlerinde Costa ve ark. [1] ve Cho ve ark. [2] tarafından bildirilen yöntemlerden faydalanılmıştır. Enzim aktivitesi literatürde Lartillot ve ark.[3] önerdiği yönteme göre spektrofotometrik olarak ölçülmüştür. Serbest ve immobilize katalaz örneklerinin hepsi için optimum pH 7,5, optimum sıcaklık ise serbest katalaz için 25 ºC immobilize katalaz örnekleri için 30 ºC olarak belirlenmiştir. Serbest katalaz, aspartik asit, glutamik asit ve 6amino hekzanoik asit ara kolları üzerinden immobilize edilmiş katalaz örneklerinin denature olmaya başladığı sıcaklıklar sırasıyla 31,3 °C, 30,8 ºC, 31,4 ºC ve 32,5 ºC, aktivasyon enerjileri ise sırasıyla 14,4 kJ/mol, 14,8 kJ/mol, 13,0 kJ/mol, 6,1 kJ/mol, 6,7 kJ/mol olarak bulunmuştur. Serbest katalaz için katalitik etkinlik (kcat/KM) 3,5(±0,2)x106 s-1M-1, aspartik asit ara kolu üzerinden immobilize katalaz için katalitik etkinlik 4,9(±0,8)x104 s-1M-1, glutamik asit ara kolu üzerinden immobilize katalaz için katalitik etkinlik 3,1(±0,3)x104 s-1M-1 ve 6-amino hekzanoik asit ara kolu üzerinden immobilize katalaz için katalitik etkinlik 4,7(±0,4)x104 s-1M-1 olarak belirlenmiştir. Ayrıca, enzim preparatlarının termal kararlılıkları, depolama kararlılıkları incelenmiş ve immobilize katalaz örneklerinin tekrar kullanılabilirlikleri kesikli tip reaktör sisteminde araştırılmıştır. Kaynaklar 1. S.A. Costa, T. Tzanov, F. Carneiro, G.M. Gübitz, A.C. Paulu, Biotechnology Letters, 24 (2002) 173-176. 2. S.W. Cho, J.S. Rhee, Biotechnol. Bioeng., 41 (1993) 204-210 3. S. Lartillot, P. Kadziora, A. Athios, Preparative Biochemistry, 18 (3) (1988) 490
