KimyaKongreleri.org

6. Ulusal Afinite Teknikleri Kongresi, Aksaray Üniversitesi, 26-29 Mayis 2010, Aksaray
P-23
HİTrap_r PROTEİN A KOLONU İLE IGG ALT FRAGMANLARININ HIZLI PROTEİN
SIVI KROMATOGRAFİSİ İLE AYRILMASI
1,2
2
2
1
Gizem Ertürk , Nilay Bereli , Lokman Uzun , M. Aşkın Tümer , Adil Denizli
1
2
Hacettepe Üniversitesi, Biyoloji Bölümü, Ankara
2
Hacettepe Üniversitesi, Kimya Bölümü, Ankara
Antibadiler (immunoglobulinler), antijenin organizmaya girmesi ve bağışıklık sistemini uyarması
sonucunda sentezlenen glikoprotein yapısındaki moleküllerdir. İki adet ağır zincir ve iki adet hafif
zincirden oluşmakta olan immunoglobulinler iki adet antijen bağlama bölgesine sahiptir. Bir IgG
molekülü “Y” harfi şeklindedir ve molekülde “Y” harfinin iki kolunun uç kısımları amino terminal uçlardır,
antijenler bu kısımlara bağlanır. IgG molekülünün ağır zincirleri arasında moleküle esneklik veren
“menteşe bölgesi” bulunur. Menteşe bölgesi oldukça esnek olduğu için, enzim ve kimyasal maddelerle
muameleye duyarlıdır. Bir IgG molekülü, proteolitik enzimlerle muamele edildiğinde menteşe
bölgesinin üst veya alt kısmından parçalanır. Proteolitik bir enzim olan papain enzimi menteşe
bölgesinin üst kısmından etki ederek, IgG molekülünü birbirine eş iki kol parçası (Fab) ve bir gövde
parçası (Fc) olmak üzere üç parçaya ayırır. Fc bölgesi hemen hemen tüm IgG moleküllerinde aynı
olup, IgG seçiciliği Fab bölgesindeki değişimlere bağlıdır.
Protein A, Staphylococcus aureus tarafından üretilen oldukça kararlı bir yüzey reseptörüdür.
İmmunoglobulinleri özellikle de IgG’leri Fc kısımlarından bağlama özelliğine sahip olduğundan, IgG
sınıfı antibadilerin alt fragmanlarının ayrılması için kullanılan bir proteindir.
Sunulan çalışma kapsamında, IgG moleküllerinin enzimatik hidrolizi için papain enzimi kullanılmıştır.
Hidroliz karışımı 37°C’de 24 saat tutulduktan sonra, enzimatik aktivite iyodoasetamit ile
durdurulmuştur. IgG fragmantları hızlı protein sıvı kromatografisi (FPLC) ile ayrılmıştır. Bu amaçla, GE
Healthcare Protein A kolonu (HiTrap_rProtein A FF) kullanılmış ve IgG molekülünün Fab ve Fc bölgeleri
cihazın Frac920 fraksiyon ünitesiyle ayrı ayrı toplanmıştır. Ayrıca kolonun seçicilik özellikleri
incelenmiştir.
KimyaKongreleri.org