KimyaKongreleri.org

Sözlü Sunum 14
Asetilkolinesteraz Enziminin Eritrositlerden Afinite Kromatografisi
Yöntemi ile Saflaştırılması
Habibc BUDAK KAYA1. Melda ŞÎŞECİOĞLU2, Zeynep KÖKSAL5, Haşan ÖZDEMİR1
‘Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, Erzurum,
2Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü, Erzurum
[email protected]
A setilkolinesteraz
(A ChE:
asetilkolin
hidrolaz
E .C .3 ,1,1.7),
K olm erjik
sinapsislerde
bir
nörotransm itter olan asetilkolini hidrolizler. A setilkolinesteraz m em brana bağlı bir enzim dir. Beyinin
gri cevherinde, sinir hücrelerinde, kasta, akciğer, dalak ve eritrositlerde bulunur [ 1,2].
A setilkolinesteraz
enzim i
eritrositlerden
m evcut
yöntem ler
haricinde
yeni
bir
afinite
krom atografisi tekniği iie saflaştırıldı. Bu am açla Sepharose-4B -T irozin-T akrine kolon m aleıyaii
sentezlendi. Taze sağlıklı insan kanından plazm a ve lökosit kısmı uzaklaştırıldı ve eritrosit peleti %
0.9 NaCİ çözeltisi iie yıkandı. E lde edilen hem olizatm 5 m l’si hazırlanan afinite kolonuna tatbik
edildi. Saflaştırm a basam akları sonucunda A ChE; % 23.5 verimle ve 658 kat saflaştırıldı. Enzim in
saflığı SD S-PAG E ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (80 kDa). A setilkolinesteraz asetîlkolinin
tiyokoline hidrolizini katalizler [3]. E nzim aktivitesi, tiyokolinin oluşum oranı, 5-tİyo-2-nitrobenzoik
asitin oluşum undan kaynaklanan bir sarı rengi üreten 5 ,5 ,-ditiyobis(2-nitrobenzoik asit) (D TN B ) ile
tiyokolinin reaksiyonunun takibiyle 412 nm de ölçüldü. Saflaştırılan A C h E ’ın 2Ö°C, pH 6 ’da K m ve
Vmax değerleri belirlendi. Ligand olarak kullanılan takrinin I50 değeri tespit edildi.
Kaynaklar
[1] M.K. Gilson, T.P. Straatsma, JA . McCaramon, D.R. Ripoll, C.H. Faerman, P.H. Axelsen, I. Silman,
J.L. Susman, Science, 263 (1994) 1276.
[2] M. Mesulam, Leaming & Memory (Cold Spring Harbor, New York), 11 (2004) 43.
[3] G.L. Ellman, K.D. Courtney, V. Andres, R.M.A. Featherstone, Biochem. Pharmacol., 7 (1961) 88.
22
KimyaKongreleri.org