KimyaKongreleri.org

7. Ulusal Afinite Teknikleri Kongresi, Ege Üniversitesi, 13-15 Eylül 2013, Çesme / Izmir
P-56
α-Galaktozidaz Enziminin Konkanavalin A ile Türevlendirilen Kitosan
Taşıyıcıda Biyospesifik İmmobilizasyonu ve Karakterizasyonu
Esin Çalcı,* Seçil Önal**
* Ankara Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi Biyokimya laboratuarı, Ankara
** Ege Üniversitesi Fen Fakültesi Biyokimya Bölümü, Bornova-İzmir
[email protected]
α-D-Galaktozidazlar (α-D-galaktozid galaktohidrolaz, EC 3.2.1.22, Melibiaz) basit ve kompleks
galaktooligo- ve polisakkaritlerin (rafinoz, melibiyöz, stakiyöz, galaktomannan) α-1,6 bağlı Dgalaktoz birimlerinin hidrolizini katalizleyen hidrolaz sınıfı enzimlerdir. Hem hidrolaz hem de
transferaz aktivitesine sahip olan α-D-galaktozidazlar çeşitli biyoteknolojik ve medikal uygulamalarda
kullanılırlar [1]. Enzim immobilizasyonunda yeni trend, biyospesifik etkileşimler aracılığı ile
enzimlerin taşıyıcıda immobilizasyonudur. Taşıyıcı matrikslerin aktivasyonunun ardından enzimleri
spesifik olarak tanıyacak ligandlar taşıyıcıya bağlanır ve taşıyıcıya bağlanan ligandın enzime
afinitesinden yararlanılarak enzimin immmobilizasyonu gerçekleştirilir. [2].
Bu çalışmada, domatesten kısmi olarak saflaştırılan α-galaktozidaz enziminin biyospesifik
etkileşimler kullanılarak konkanavalin-A ile türevlendirilen kitosanda immobilizasyonu ve
karakterizasyonu amaçlandı. Kitosanın amino grubu glutaraldehit ile aktive edildikten sonra taşıyıcı
konkanavalin A (ConA) ile türevlendirildi. Domatesten izole edilerek hazırlanan glikoprotein
karakterdeki α-galaktozidaz enzimi bu taşıyıcıda immobilize edildi. İmmobilizasyon ortamının
optimizasyonu için glutaraldehit konsantrasyonunun, Con A miktarının, protein miktarının, ortam pH’
sı ve iyon şiddetinin enzimin immobilizasyonuna etkisi incelendi. Optimize edilen koşullar altında
(% 2, v/v, glutaraldehid, 7,5 mg konkanavalin A, 0,5 mg protein, pH 6,5 ve 20 mM sitrat-fosfat
tamponu) enzim % 25 aktivite ve % 93 spesifik aktivite verimleri ile kitosan taşıyıcıda immobilize
edildi. Serbest ve immobilize enzimlerin karakterizasyonu için enzim aktivitesi ve kararlılığına etki
eden parametreler incelendi. İmmobilize enzimin tekrar kullanılabilirliği test edildi. İmmobilize enzim
kullanılarak enzimin sentetik substratı olan p-nitrofenil-α-D-galaktopiranozid ve doğal substratı olan
rafinoz batch sistemde hidrolizlenerek enzimatik hidroliz dereceleri belirlendi. Biyospesifik
etkileşimler kullanılarak konkanavalin-A ile türevlendirilen kitosan taşıyıcıda ilk kez immobilize
edilen α-galaktozidaz enzimi çeşitli biyoteknolojik uygulamaları için oldukça iyi katalitik özelliklere
ve kararlılığa sahip bir enzim preparatıdır.
Anahtar Kelimeler: α-Galaktozidaz, Konkanavalin A, Kitosan, Biyoafinite immobilizasyonu
Kaynaklar
[1] Singh, N. and Kayastha, A.M. , Carbohydrate Research, 2012, 358, 61.
[2] Gupta, M.N. and Roy, I, Indian Journal of Biochemistry and Biophysics, 2002, 39, 220.
92
KimyaKongreleri.org