KimyaKongreleri.org

BS-TR-001
Katalazın Phanerochaete Chrysosporium’dan Kısmi Saflaştırılması ve Karakterizasyonu
Berna Kavakçıoğlu 1 , Leman Tarhan 1
1
Dokuz Eylül Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü
Katalaz (EC 1.11.1.6) hidrojen peroksiti (H 2O2 ) su ve dioksijene ayrıştırma yeteneği ile iyi bilinen bir enzimdir
[1]. Katalaz doğada yaygın bir şekilde dağılmış olup tüm aerobik ve belirli anaerobik canlılarda hücreyi
hidrojen peroksitin toksik etkilerinden korur. Katalaz medikal öneminin yanı sıra endüstriyel uygulamalar
açısından da son derece önemlidir.
Çalışmada, %60 amonyum sülfat çöktürmesi, %60 etanol çöktürmesi, DEAE sellüloz anyon değiştirici ve
Sephacryl-S-200 jel filtrasyon kromatografileri uygulanarak beyaz çürükçül fungus Phanerochaete
chrysosporium (DSM-1547) katalazı 129,10 kat saflaştırılmıştır. Doğal saf katalazın moleküler ağırlığı jel
filtrasyon kromatografisi ile yaklaşık 290 kDa olarak bulunmuştur. SDS -jel elektroforezi sonuçları P.
chrysosporium katalazının moleküler ağırlıkları yaklaşık 70 kDa olan eş dört subunitten oluştuğunu
göstermiştir. Saflaştırılmış katalaz için optümum pH ve sıcaklık değerleri sırasıyla 7.5 ve 30 0 C olarak
bulunmuştur. Saf katalazın bazik bölgede daha stabil olduğu ve 60 0 C da aktivitesinin yaklaşık %25 ini
kaybettiği görülmüştür. Saflaştırılmış katalaz için K m ve Vmax değerleri sırasıyla 289.86 mM ve 250000 U/mg
olarak bulunmuştur. P. chrysosporium katalazı; dithiothreitol (DTT), 2-mercaptoetanol, iodoasetamid, EDTA
ve sodyum dodesil sulfat (SDS) ile inhibe olmuştur. Araştırılan antibiyotiklerin katalaz üzerinde inhibe edici
etkisi görülmemişken, benomil, captan ve chlorothalonil fungusitlerinin inhibe edici etkisi olduğu
belirlenmiştir. Benomil fungusitinin inhibisyon kinetiği yarışmasız inhibisyona uyma kta olup K i değeri 1.158
mM olarak verilmiştir.
Yapılan literatür araştırmasına göre daha önce P. chrysosporium fungusundan katalaz enziminin
saflaştırılması ve karakterizasyonu çalışması yapılmamıştır.
KAYNAKLAR
[1] Ran J., Jia S., Liu Y., Zhang W., Wu S. and Pan X. A facile method for improving the covalent 431
crosslinking adsorption process of catalase immobilization. Bioresource Technology 101, 6285-6290,
2010.
12
KimyaKongreleri.org
BS-EN-001
Partial Purification and Characterization of Catalase from Phanerochaete Chrysosporium
Berna Kavakçıoğlu 1 , Leman Tarhan 1
1
Dokuz Eylül University, Science Faculty, Chemistry Department
Catalase (EC 1.11.1.6) is an enzyme well known for its ability to decompose hydrogen peroxide (H 2 O2 ) to
water and dioxygen [1]. Catalase is widely distributed in nature and it is key enzyme that protects cells from
the toxic effects of hydrogen peroxide in all aerobic and certain anaerobic organisms. Catalase has many
industrial applications instead of its medical importance.
In this study, 129.10-fold catalase purification was obtained from white rot fungus Phanerochaete
chrysosporium (DSM-1547) by applying 60% ammonium sulphate precipitation, 60% ethanol precipitation,
DEAE-cellulose anion exchange and Sephacryl-S-200 gel filtration chromatographies. The molecular weight
of native purified catalase was found about 290 kDa with gel filtration chromatography. SDS -gel
electrophoresis results indicated that P. chrysosporium catalase consists of four appa rently identical
subunits, with a molecular weight of around 70 kDa. Optimum pH and the temperature values of the purified
catalase was found as 7.5 and 30 0 C, respectively. It was found that purified catalase was more stable in the
basic region and it lost its catalytic acitivity about 25% at 60 0 C. The K m and Vmax values were found as 289.86
mM and 250000 U/mg respectively for the purified catalase. The activity of purified catalase from P.
chrysosporium was inhibited by dithiothreitol (DTT ), 2-mercaptoethanol, iodoacetamide, EDTA and sodium
dodecyl sulfate (SDS ). Among the investigated fungucides and antibiotics, it was found that while antibiotics
had no inhibition effects on purified enzyme; benomyl, captan and chlorothalonil fungucides inhibited
activity. The inhibition kinetic of benomyl was compatible with non-competitive inhibition with the K i value
of 1.158 mM.
According to our literature survey, there is no another paper involved in the purification and characterization
of catalase from white rot fungus P. chrysosporium.
REFERENCES
[1] Ran J., Jia S., Liu Y., Zhang W., Wu S. and Pan X. A facile method for improv ing the covalent 431
crosslinking adsorption process of catalase immobilization. Bioresource Technology 101, 6285-6290,
2010.
13
KimyaKongreleri.org