KimyaKongreleri.org

IV. Ulusal Afinite Teknikleri Kongresi, 4-7 Mayis 2008, Mugla Üniversitesi, Mugla
Poster-7
GLUKOZ-6-FOSFAT DEUiDROGENAZIN KOYl.JN BEYNL~EN SAFLA~TIRILMASI
Cihangir $engezer, N.Nllray
lJ7IlSU Hacettepe Universitesi, TIp Fakiiltesi,.BiyokimyaAna"bilim Dah, Ankara e-posta: nnulu5u@hacettepe,edu.tr Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G-6-PD) (D-glukoz-6-fosfat; NADP+ oksidoredUktaz, E.C. 1.1.1.49)
pentoz fosfat metabolik yolunun ilk ve kontrol enzimidir. Pentoz fosfat yolu oksidatif ve non-oksidatif
olmak Uzere iki lasma aynhr. HUcrede RNA, DNA ve nUkleotit sentezi i9in gerekli riboz-5-fosfat ve
redUktif biyosentezlerde indirgeyici
~U9
ola;n NADPH'yt sentezlemek gibi
ba~hca
iki fonksiyonu
vardlr. Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz bir 90k mikroorganizma, bitki ve hayvan hUcrelerinde bulunur.
Beyin korteksi cam-teflon homojenizator kullamlarak homojenize edildi. Homojenat cam pamuktan
silzUldU ve daha sonra 105,000 x g de 60 dakika santrifUj edildi. Ultrasantriftij sonrasmda elde edilen
siipematan 2',5'· ADP- Sepharose 4B afinite kolonuna yiiklendi. Enzimin atlnite kolonundan elUsyonu
ise NADP' i(,:eren 10 mM TrislHCL pH 7.6 tamponu ile yaplldl. Enzim DEAE-Sepharose Fast Flow
iyon degi~tirici kolonu kullamlarak NADP+ ve bazl sitozolik proteinlerden anndmlmasl saglandl.
Enzimin kolondan 5 mM potasyum fosfat pH 6.9 tamponu i(,:inde 0-300 mM KCI gradienti
kullamlarak elUe edildi. Enzim 8748 kez
safl~tmldl.
Koyun beyin korteksi G-6-PD'sinin molekUl
aglrhgtm saptayabilmek i9in Sephadex G-200 jel elemesi yontemi kullamldl. Glukoz-6-fosfat
dehidrogenazm optimum pH arahgmm saptanmasl i(,:in pH 5.0 ile pH 9.0 arasmda
degi~en
potasyum
fosfat tamponu He Y:!?Jlan 9ah~ma sonucunda optimum pH 8.0 olarak saptandL
KimyaKongreleri.org
53