High Fidelity DNA Polimeraz Teknik Şartnamesi Termostabil

High Fidelity DNA Polimeraz Teknik Şartnamesi
1. Termostabil Phusion DNA polimeraz enzimi 100 ünite ve 2.000 unit/ml
konsantrasyonda olmalıdır.
2. Enzimin hata oranı (error rate) en fazla 4.4 × 10-7 olmalıdır.
3. Enzim 5´→3´ DNA polimeraz aktivitesine, 3´→5´ exonuclease aktivitesine sahip
olmalıdır. Amplifikasyon ürünlerinde kapalı uçlar (blunt ends) üretebilmelidir. Enzim
aynı zamanda uzun DNA moleküllerini örneğin 7.5 kb genomik DNA ve 20 kb λ
DNA'yı amplifiye edebilme özelliğine sahip olmalıdır.
4. Enzim 2U/l konsantrasyonda olmalıdır.
5. Enzim ile birlikte reaksiyonlarda kullanılacak 5x Phusion HF Buffer (6 × 1.5 mL), 5x
Phusion GC Buffer (2 × 1.5 mL), 50 mM MgCl2 (2 × 1.5 mL), DMSO (500 μL)
verilmelidir.
6. Enzim, 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl,
stabilizers, 200 μg/mL BSA ve 50% glycerol içerisinde muhafaza edilir olmalıdır.
7. DNA polimeraz Biolabs Phusion high fidelity (M0530S) olmalıdır.
8. Ürün kuru buz içerisinde soğuk zincir kurallarına uyularak teslimatı sağlanmalıdır.
dNTP Teknik Şartnamesi
1. Ürün dATP,dCTP, dGTP ve dTTP herbirini içeren önceden sulandırılmış son
konsantrasyon 2mM’lık çözelti olmalıdır.
2. Nükleotidler %99 dan fazla saflığı HPLC ile teyit edilmiş olmalı ve nükleaz aktivitesi,
insan ve E.coli DNA’sı bulunmamalıdır.
3. -20° C'de uzun süre saklanabilmelidir.
4. Birden fazla donma-çözülme döngüsünden sonra kararlılığını korumalıdır.
5. Oda sıcaklığında (7 hafta kadar) dNTP’ ler %95 den daha fazla trifosfat formunu
korumalıdır.
6. PCR da 30 döngü (1 döngü 94°C;1 dak, 72°C; 3 dak. ) sonrasında %90 dan daha fazla
trifosfat formunu korumalıdır.
7. Ürün 1 mL hacminde ve 2mM konsantrasyonda olmalı
8. Ürün High Fidelity ve uzun süreli PCR larda kullanılabilmelidir.
9. Ürün Thermo dNTP R0241 olmalıdır.
10. Ürün kuru buz içerisinde soğuk zincir kurallarına uyularak teslimatı sağlanmalıdır.
DNA Primer (EukA)Teknik Şartnamesi
1. Primerler oligonükleotid olarak sentezlenmelidir.
2.Primerler liyofilize halde sentezlenmelidir.
3.Konsantrasyonu 0.2 umol (200nmol) olmalıdır.
4.HPLC yöntemi ile purifiye edilmiş olmalıdır.
İlgili sentez raporu ile teslim edilmeli. Rapor üzerinde primere ait skala, oligonükleotid
dizilimi, 100pmol için sulandırma miktarı, GC, AT konsantrasyonu belirtilmelidir.
DNA Primer (EukB)Teknik Şartnamesi
1. Primerler oligonükleotid olarak sentezlenmelidir.
2.Primerler liyofilize halde sentezlenmelidir.
3.Konsantrasyonu 0.2 umol (200nmol) olmalıdır.
4.HPLC yöntemi ile purifiye edilmiş olmalıdır.
İlgili sentez raporu ile teslim edilmeli. Rapor üzerinde primere ait skala, oligonükleotid
dizilimi, 100pmol için sulandırma miktarı, GC, AT konsantrasyonu belirtilmelidir.