plazmit vektörü
advertisement
Bir Plazmid Vektörünün Yapımı Plazmidler neden güçlü bir biyoteknoloji araçlarıdır? Plazmidler genlerin manipülasyonunda son derece yararlıdır, çünkü bunlar esasen küçük, kendi kendine yeten genomlardır. Bir plasmid, hücreden hücreye kolayca taşınabilir. Ayrıca kendi replikasyonunu kontrol eden genleri de içerirler. Dolayısıyla, plasmidler yapılarına katılan herhangi bir geni taşımak ve kopyalamak için kullanılabilirler. Ayrıca Plazmidlerin konukçu hücreleri üzerinde genellikle zararlı etkileri yoktur. Plazmitler iyi vektörleridir, bir klonlama çünkü bir replikasyon orjinine sahiptirler ve bu yüzden hücre içerisinde bağımsız olabilirler. olarak replike Vektör olarak kullanılan çoğu plasmid, aynı zamanda, ampisilin antibiyotiğine direnç geni gibi seçilebilir bir işaretçiyi kodlar. Eğer plazmiti alacak konukçu hücre ampisiline duyarlı ise ampisilin içeren besi yerinde sadece plazmiti alan hücreler gelişecektir. Vektörlerin restriksiyon enzimi denen kesim enzimleri tarafından tanınabilen küçük bir baz dizisi vardır. Dolayısıyla kesim enzimi (Restriksiyon enzimi) vektörü bu nükleotid dizisinden keserek halka şeklindeki plazmitin açılmasını sağlar ve böylece yabancı DNA buraya yerleşir. Plazmit vektör yabancı DNA restriksiyon ve aynı enzimiyle kesilip karıştırıldığında bütün moleküller rekombinant olmayacaktır. Görüldüğü kapanırken gibi bazı diğer plazmitler bazıları yabancı yabancı DNA’yı DNA’yı alarak almadan kapanacaktır. Yabancı DNA’yı almış olan plazmitleri içeren hücrelerle almamış plazmitleri içeren hücreleri ayırdedebilmek için vektör üzerinde ikinci bir işaretçi gene ihtiyaç vardır. İkinci işaretçi de yine kendi nükleotid dizisi içerisinde restriksiyon enzim bölgesi içerir. Eğer yabancı DNA insert olmuşsa yani vektöre yerleşmişse ikinci marker inaktif hale gelir. Bu olaya insersiyondan kaynaklanan inaktivasyon denir. Klonlamada yaygın olarak kullanılan ikinci bir işaretçi ise lacZ genidir ve bu gen betagalatozidaz enzimini kodlar. Betagalatozidaz enzimi ise renksiz bir kimyasal madde olan ve x-gal adı verilen maddeyi maviye dönüştürür. intak (yani yabancı DNA’yı almamış) vektörleri içeren bakteri kolonileri betagalaktosidaz enzimini yapar ve böylece bu enzim de x-gal maddesini maviye dönüştürür. Fakat yeni rekombinant DNA içeren (Yani yabancı DNA’yı bünyesine alan) koloniler betagalaktosidaz üretemez ve böylece X-gal maddesini maviye dönüştüremez ve besi yerinde beyaz koloniler olarak gelişirler.
![With A New Introduction By The Author [Paperback] Howard E](http://s1.studylibtr.com/store/data/001073210_1-52b02b5118f59cdf6cf196226a503f9b-300x300.png)
