- 1 - KI-310UREX 2°C 8°C

Katalog Numarası: 310UR-0025EX 25 mL Kit
Katalog Numarası: 310UR-0100EX 100 mL Kit
Katalog Numarası: 310UR-0500EX 500 mL Kit
2°C
Katalog Numarası: 310UR-0060WEX 60 mL Kit
8°C
TÜM İDRAR ÖRNEKLERİNİ POTANSİYEL BULAŞICI GİBİ KULLANIN.
TEST PROSEDÜRÜ
Sabit sıcaklığı koruma, örnekleri ve reaktifleri pipetleme, reaktifleri karıştırma,
doğru şekilde reaksiyonu zamanlama ve 340nm de enzimatik oranları ölçme
kapasitesine sahip analizörler testi yapmak için kullanılabilir.
Kullanım Amacı:
Bu Immunalysis Barbituratlar testi insan idrarında Barbituratların kalitatif ve
yarıkantitatif testi için amaçlanır.
Kullanım için parametreler içeren analizör-spesifik protokol kağıdına bakın.
Immunalysis Barbitüratlar EIA Kiti sadece bir ön analitik test sonucu
sağlar. Daha spesifik alternatif kimyasal metodu onaylanmış analitik sonuç
elde etmek için kullanılmalıdır. Sıvı kromatografi-tandem kütle
spektrometrisi (LC-MS/MS) tercih edilen doğrulayıcı metoddur(1). Klinik
düşünce ve profesyonel karar, özellikle ön pozitif sonuçlar kullanıllıyorsa
abuse test sonucunun herhangi bir ilacı için uygulanmalıdır.
KALİTE KONTROL VE KALİBRASYON
İyi laboratuar uygulaması test performansı sağlamak kontrol örneklerinin
kullanımını önerir. Cutoff kalibratöre yakın kontrollerin kullanımı kalibrasyonu
doğrular. Kontrol sonuçları laboratuarınız tarafından tanımlanan belirlenen aralıklar
içine düşmelidir. Kalitatif analiz için “pozitif” ve “negatif” örnekleri ayırmak için
cutoff seviyesi olarak 200 ng/mL kalibratör kullanın. Yarı kantitatif analiz için tüm
kalibratörleri kullanın.
TESTİN AÇIKLANMASI
SONUÇLAR VE BEKLENEN DEĞERLER
Kalitatif Sonuçlar
Cutoff kalibratörle elde edilen değerden büyük veya eşit olarak absorbans (∆A)
değerinde bir değişiklik gösteren örnek pozitif düşünülür. Cutoff kalibratörle elde
edilen değerden düşük olarak absorbans (∆A) değerinde bir değişiklik gösteren
örnek negatif düşünülür.
Yarı-kantitatif Sonuçlar
Örneklerde ilaç konsantrasyonunun kabaca bir tahmini tüm kalibratörlerle ve
standart eğri örneklerinin hesaplanmasıyla bir standart eğri çalışılarak elde
edilebilir.
Immunalysis Barbiturat EIA Kiti insan idrar örneklerindeki Barbituratın varlığını
tespit etmek için duyarlı in-vitro testtir.
Barbituratlar, Barbiturik asit türevleri, düşük dozlarda relaksasyona yol açan sedatif
(2)
ilaçlardır ve yüksek dozlarda koma hatta ölüme yol açabilir . Barbituratlar
genellikle oral olarak uygulanır ancak aynı zamanda damar içine veya kas içine
alınabilir ve hızlıca emilir. Barbituratların metabolizması başlıca karaciğerde bulunur;
oksidasyon, desülfürizasyon ve halka bölünmesi içeren birtakım metabolik yollar
tanımlanmıştır. Çeşitli Barbiturat metabolitlerinin sayısı ve oranı her bireyde değiştiği
için sonuçlar standardın eşdeğerleri olarak ifade edilir, sekobarbital/mL.
PROSEDÜR PRENSİPLERİ
SINIRLAMALAR
 Bu test sadece insan idrarı ile kullanım için tasarlanır.
 Borik Asit idrar için koruyucu olarak önerilmez.
 Listelenmeyen diğer maddeler ve faktörler teste müdahale edebilir ve yanlış
sonuçlara sebep olabilir.
 Sonuçların yorumlanması dikkate alınmalıdır, idrar konsantrasyonları sıvı alımı
ve diğer biyolojik değişkenlerle yaygın olarak değişebilir.
İlaç ve metabolitleri varlığında tek bir sonuç üreten Immunoassayler ayrı ayrı
bileşenlerin konsantrasyonunu tam olarak ölçemez.
Bu testler Barbitürat keçi ve koyun antikor kullanır. Bu test Barbitürat etiketli enzim
glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PDH) ve antikor bağlanma yerlerinin sabit miktarı
için idrar örneğinde free drug rekabetine dayanır. Örnekteki free drug yokluğunda
antikor drug enzim konjugata bağlanır ve enzim aktivitesi inhibe edilir. Bu idrardaki
drug konsantrasyonu ve enzim aktivitesi arasında doz yanıt ilişki yaratır. Bu enzim
G6PDH aktivitesi NAD ın NADH ye dönüşmesiyle spektrofotometrik olarak 340 nm
de tanımlanır.
REAKTİFLER
SPESİFİK PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
Olympus AU400 analizöründe elde edilen performans sonuçları aşağıda gösterilir.
Immunalysis Barbitürat EIA Kit
Antikor/Substrat Reaktifi (RA) - Koruyucu olarak Sodyum Azidle Tris buffer içinde
Barbitüratlar için keçi ve koyun antikorları, glukoz-6-fosfat (G6P) ve nikotinamid
adenin dinukleotid (NAD) içerir.
Yarı-kantitatif Hassasiyet iki tekrarda gün başına 2 çalışma şeklinde 20 gün için
kalibratörler ve kontrollerin test edilmesiyle belirlendi, (N=80).
Tablo 1: Yarı-Kantitatif Hassasiyet
Konsantrasyon (ng/mL)
Ortalama Kons. (ng/mL)
50 ng/mL
48.3
100 ng/mL
99.2
150 ng/mL (Kontrol DÜŞÜK)
142.7
200 ng/mL Kalibratör
210.0
250 ng/mL (Kontrol YÜKSEK)
272.4
300 ng/mL
352.1
350 ng/mL
401.3
400 ng/mL
435.2
Günlük kalibrasyon gerektirir.
Enzim Konjugat Reaktifi (RE) Koruyucu olarak Sodyum Azidle Tris buffer içinde
Barbitüratlar ile etiketli glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PDH) içerir.
Gerekli Ek Materyaller(ayrı satılır):
Katalog Numarası:
MAC5-5-1-2EX Çoklu-Analit Kontrolü -5 Kalibratör 2
MAC5-5-2-1EX Çoklu-Analit Kontrolü -5 Kontrol Seti 1
MAC5-5-5-5EX Çoklu-Analit Kontrolü -5 Kalibratör Seti
Kalitatif Hassasiyet iki tekrarda gün başına 2 çalışma şeklinde 20 gün için
kalibratörler ve kontrollerin test edilmesiyle belirlendi, (N=80).
Tablo 2: Kalitatif Hassasiyet
Konsantrasyon (ng/mL)
Ortalama Absorbans (mAbs.)
C.V.%
50 ng/mL
309.1
1
100 ng/mL
345.0
2
150 ng/mL (Kontrol DÜŞÜK)
373.4
2
200 ng/mL Kalibratör
413.7
2
250 ng/mL (Kontrol YÜKSEK)
435.3
2
300 ng/mL
462.4
2
350 ng/mL
477.1
2
400 ng/mL
490.7
2
ÖNLEMLER VE UYARILAR
1)Bu reaktifler yutulduğunda zararlıdır.
2)Reaktifler Koruyucu olarak Sodyum Azid içerir. Reaktiflerin atımında potansiyel
olarak patlayıcı metal azidler oluşturmak için bakır ve kurşun ile reaksiyona
girebilecek azid birikimini önlemek için bol su ile akıtın.
3)Son kullanma tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayın.
Hazırlama ve Saklama
Immunalysis Barbitürat EIA Kit reaktifleri kullanıma hazır sağlanır ve direkt olarak
buzdolabından kullanılabilir.
Kullanımda olmadığında şişeleri vidalı kapaklarda sıkıca kapatın.
Kitin son kullanma tarihi etikette belirtilir. Bu kitten 2 – 8° C de buzdolabında
saklanırsa son kullanma tarihine kadar tatmin edici performans beklenebilir.
ÖRNEK TOPLAMA - Saklama ve Kullanma Talimatları
İdrar örnekleri plastik veya cam kaplarda toplanmalıdır. Taze idrar örnekleri
kullanılmalıdır. Örneklerin gross döküntüsünden korunmasını sağlayın.
Yüksek derecede bulanık örnekler analiz öncesi santrifüj edilmelidir. İdrar
örneklerinin seyreltilmesi hatalı sonuçlara sebep olabilir. Örnekler testten önce iyi
karıştırılmalıdır. Tekrarlanan dondurma ve çözdürmeden kaçınılmalıdır.
-1KI-310UREX
C.V.%
7.
6.
5.
8.
7.
4.
4.
4.
Doğruluk
Toplam 101 idrar örneği dış laboratuarlar tarafından önceden onaylandı, Immunalysis
Barbitüratlar HEIA testi ve ticari EIA Barbitüratlar Testi ile analiz edildi. Negatif
sonuçlardan pozitif sonuçları ayırmak için her platform için HEIA cutoff 200 ng/mL
Barbitürattı.
Yarı-Kantitatif
65 örnek her iki yöntemde de negatif sonuç gösterdi. 32 örnek her iki yöntemde de
pozitif sonuç gösterdi. 3 örnek ticari kit ile pozitif ve Immunalysis Kiti ile negatifti. 1
örnek ticari kit ile negatif ve Immunalysis Kiti ile pozitifti. LC-MS/MS doğrulamaları
Tablo 5'de özetlenmiştir. Duyarlılık, özgüllük ve doğruluk sırasıyla %91, %98 ve %96
di.
Tablo 3: Yarı-Kantitatif Karşılaştırma Tablosu
Ticari EIA Barbitürat
(+)
(-)
(+)
32
1
Immunalysis
Barbitürat EIA
(-)
3
65
Kalitatif
64 örnek her iki yöntemde de negatif sonuç gösterdi. 34 örnek her iki yöntemde de
pozitif sonuç gösterdi. 2 örnek ticari kit ile pozitif ve Immunalysis Kiti ile negatifti. 1
örnek ticari kit ile negatif ve Immunalysis Kiti ile pozitifti. LC-MS/MS doğrulamaları
Tablo 5'de özetlenmiştir. Duyarlılık, özgüllük ve doğruluk sırasıyla %94, %98 ve %97
di.
Tablo 4: Kalitatif Karşılaştırma Tablosu
Ticari EIA Barbitürat
(+)
(-)
(+)
34
1
Immunalysis
Barbitürat EIA
(-)
2
64
Tablo 5: Uyumsuz Sonuç Özeti
Ticari EIA Sonuç Yarı‐ Kal.
Kant.
NEG
POZ
NEG
POZ
POZ
Immunalysis EIA Doğrulama (LC‐MS/MS) Konsantrasyon (ng/mL)
Sonuç
Yarı‐ Butalbital
Butabarbital Pentabarbital Phenobarbital Secobarbital
Kal.
Kant.
NEG
POZ
POZ
POZ
POZ
POZ POZ
NEG POZ
NEG NEG
NEG POZ
NEG NEG
480
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
Negatif
502
480
625
164
Negatif
Negatif
Negatif
Analitik Kurtarma
Negatif insan idrarı yüksek konsantrasyonda barbitüratlar ile tutturuldu ve aşağıdaki
konsantrasyonlar için seri olarak seyreltildi. Her seviye için ilaç konsantrasyonu
hesaplandı ve Immunalysis barbitüratlar EIA ile elde edilen ortalama konsantrasyon
aşağıda Tablo 6 da gösterilir.
Tablo 6: Analitik Kurtarma
Beklenen Konsantrasyon
Ortalama Konsantrasyon
Kurtarma (%)
(ng/mL)
(ng/mL)
100
103.5
1
200
200.6
1
300
328.2
1
400
418.4
1
500
577.2
1
600
525.0
8
700
783.8
1
800
863.2
1
900
966.1
1
1000
1072.2
1
1100
1103.1
1
Analit
200
200
100.0
Alphenal
350
196
56.0
Amobarbital
600
192
32.0
Aprobarbital
225
200
88.9
Barbital
1,300
202
15.5
Butabarbital
400
210
52.5
Butalbital
285
191
67.0
Pentobarbital
350
212
60.6
Phenobarbital
900
192
21.3
% ÇaprazReaktivite
Phenytoin
100,000
215
0.2
Talbutal
200
213
106.5
Thiopental
4,000
210
5.3
İlgisi Olmayan İlaçlar
Aşağıdaki potansiyel müdahale edici maddelerin 100,000 ng/mL sine kadar
konsantrasyonların eklenmesiyle müdahale gözlenmedi. Asetaminofen,
Asetilsalisilik Asit, Benzoilekgonin, Kafein, Difenhidramin ve Metadon 500,000
ng/mL ye kadar eklendi.
4-Bromo-2,5,Dimethoxyphenethylamine,
6-Acetylcodeine,
6-Acetylmorphine,
Acetaminophen, Acetylsalicyclic Acid, Alprazolam, 7-Aminoclonazepam, 7Aminoflurnitrazepam,
7-Aminonitrazepam,
Amitriptyline,
S-(+)
Amphetamine,
Benzoylecgonine, Benzylpiperazine, Bromazepam, Buprenorphine, Bupropion,
Caffeine, Carbamazepine, Chlorpromazine, cis-Tramadol, Clobazam, Clomipramine,
Clonazepam, Cannabidiol, Cannabinol, Carisoprodol, Chlordiazepoxide, Cocaine,
Codeine, Cotinine, Cyclobenzaprine, Desalkyflurazepam, Demoxepam, Delta-9-THC,
Desipramine, N-desmethyltapentadol, Dextromethorphan, Dihydrocodeine, Diazepam,
Diphenhydramine, Doxepin, Ecgonine, Ecgonine methyl ester, EDDP, 1R,2S(-)Ephedrine, 1S,2R(+)-Ephedrine, Ethyl β-D-glucuronide, Ethylmorphine, Fenfluramine,
Fentanyl,
Flunitrazepam,
Fluoxetine,
Flurazepam,
Heroin,
Hydrocodone,
Hydromorphone,
11-hydroxy-delta-9-THC,
Ibuprofen,
Imipramine,
Ketamine,
Lamotrignine, Levorphanol Tartrate, Lidocaine, Lorazepam, Lorazepam Glucuronide,
Lormetazepam, LSD, Maprotiline, (+)-MDA, MDEA, MDMA, Meperidine, Meprobamate,
Methadone, S(+)-Methamphetamine, Methaquolone, Methylphenidate, Midazolam,
Morphine, Morphine-3 β –glucuronide, Morphine-6 β –glucuronide, Nalorphine,
Naloxone, Naltrexone, Nitrazepam, Norbuprenorphine, Norcodeine, Nordiazepam,
Normorphine, Norpropoxyphene, Norpseudoephedrine, Nortriptyline, Oxazepam,
Oxazepam Glucuronide, Oxycodone, Oxymorphone, PCP, Pentazocine, Phentermine,
Phenylephedrine,
Phenylpropanolamine,
PMA,
Prazepam,
Proproxyphene,
Propranolol,
Protriptyline,
R,R(-)-Pseudoephedrine,
S,S(+)-Pseudoephedrine,
Ranitidine, Ritalinic Acid, Salicylic Acid, Sertaraline, Sufentanil Citrate, 11-nor-9
carboxy
THC,
Temazepam,
Theophylline,
Thioridazine,
Triazolam,
Trifluoromethylphenyl-piperazine, Trimipramine, Trazodone, Venlafaxine, Zolpidem
Tartrate
Endojen Maddeler, pH ve Spesifik Yerçekimi
Aşağıda listelenen konsantrasyonlara kadar aşağıdaki bileşenlerin eklenmesiyle
müdahale gözlenmedi.
Tablo 8: Endojen Maddeler, pH ve Spesifik Yerçekimi
Analit
Konsantrasyon
Aseton
1.0 (g/dL)
Askorbik Asit
1.5 (g/dL)
Bilirubin
0.002(g/dL)
Kreatinin
0.5(g/dL)
Etanol
1.0(g/dL)
Galaktoz
0.01(g/dL)
γ-Globulin
0.5(g/dL)
Glukoz
2.0(g/dL)
Hemoglobulin
0.115(g/dL)
İnsan Serum Albumin
0.5(g/dL)
Oksalik Asit
0.1(g/dL)
Riboflavin
0.0075(g/dL)
Sodyum Azid
1% w/v
Sodyum Klorid
6.0(g/dL)
Sodyum Florür
1% w/v
6.0(g/dL)
Üre
pH
3, 4, 5, 9, 10 ve 11
Spesifik Yerçekimi
1.002, 1.01, 1.02 ve 1.03
REFERANSLAR
1 ) Urine Testing for Drugs of Abuse, National Institute on Drug Abuse
Research Monograph, 73,1986
2) S.C. Harvey, In : The Pharmacological Basis of Therapeutics, 5th Ed., L.S.
Goodman and A. Gilman edd. (New York, Macmillan, 1975) ( pp102-23)
3) R.C. Baselt. In : Advances in Analytical Technology, Vol.1. Randall C.
Baselt ed. (Biomedical Publications, Foster City, CA. 93-97)
Avrupa Yetkili Temsilcisi:
CEpartner4U , Esdoornlaan 13, 3951DB Maarn.
Hollanda. Tel.: +31 (0)6.516.536.26
IMMUNALYSIS CORPORATION
829 Towne Center Drive
Pomona, CA 91767
(909) 482-0840
-2KI-310UREX
Barbitürat
Benzerlikleri
(ng/mL)
Müdahale
İlgisi olmayan ilaçlar, endojen maddeler, pH ve Barbitüratları kurtarma üzerine
spesifik yerçekiminin potansiyel müdahalesi Immunalysis Barbitüratlar Testi
kullanılarak, DÜŞÜK (150 ng/mL) ve YÜKSEK (250 ng/mL) kontroller içine
potansiyel müdahale edici maddelerin her birinden bilinen miktarlar tutturularak
değerlendirildi.
Özgüllük
Barbituratlar için Immunalysis EIA özgüllüğü aşağıda listelenen bileşenlerin her biri
için inhibisyon eğrileri oluşturulmasıyla belirlendi. Antiserum çapraz-reaktiviteler
Tablo 7 de listelenir.
Tablo 7: İlgili ilaçlarla çapraz reaktivite
Barbitürat
% ÇaprazAnalit
Kons (ng/mL)
Benzerleri
Reaktivite
(ng/mL)
Secobarbital
Kons (ng/mL)
Revizyon: B
Revizyon Tarihi:01/2014