İndirekt Antiglobulin Testi (İAT) ve Antikoru Tanımlama

Prof Dr Davut Albayrak
Ondokuz mayıs üniversitesi
Tıp Fakültesi Kan merkezi
Ve çocuk hematoloji BD -Samsun
İNDİREKT COOMBS TESTİ
ANTİKOR ARANAN
PLAZMA
+
%5 LİK YIKANMIŞ
KIRMIZI KAN
HÜCRESİ EKLE
FAB UÇLARI ANTİJENE BAĞLI,
KÜMELENME YOK
AHG EKLE
ALT
GRUPLARI
BİLİNEN
KKH
AHG
PLAZMADAKİ
ANTİKOR
AHG KKH ÜZERİNDEKİ ANTİKORLARA
BAĞLANDI, KÖPRÜ YAPTI
KÜMELENME
+
Ig M ile Hemagglutination
ANTİ-HUMAN GLOBULİN ÜRETİMİ
 POLİKLONAL:Tavşan, keçi veya koyuna saflaştırılmış
Ig G ve veya kompleman iv verilir.
 Antikor cevabı yeterli titreye gelince plazma toplanır.
 MONOKLONAL:1-Antikor cevabı oluşan tavşanının
dalak B hücreleri myeloma ile hibridize edilir.
Antikora özgül ve güçlü bağlanan hibridoma klonu
genişletilir. Bu hücrelerin kültür ortamına salgıladığı
antikor saflaştırılır.
 2-Bu klonun Ig geni bakteriye recombinasyon yöntemi
ile nakledilir. Recombinant teknoloji ile monoklonal
antikor elde edilir.
İNDİREKT ANTİGLOBULİN TESTİ
 Plazmada kırmızı kan hücresi antijenlerine
bağlanabilen antikor varlığını araştırır.
 Elüsyon ile kırmızı kan hücresi yüzeyinden sökülen ve
süpernatana geçen antikorun varlığını araştırır
AHG TÜRLERİ
 1-Polispesifik –çoklu özgül Ig G +C3d
 2.Monospesifik-birine özgül Ig G veya C3d, C3b
İNDİREKT ANTİGLOBULİN
TESTİNİN YAPILIŞI
1. TÜPE 2-3 DAMLA PLAZMA KOY (EDTA LI)
2. 1 DAMLA %3-5 LİK ERİTROSİT SÜSPANYİONU
KOY, KARIŞTIR: KAN GRUBU O VE ALT GRUBU
BİLİNEN
3. 37°C DE 30-40 DAKİKA BEKLET.
4. 1000 DEVİR/DAKİ KADA 1 DAKİKA SANTRİFÜJ
ET
5. KÜMELEŞMEYİ GÖZLE: TAM ANTİKOR Ig M
 6.KÜMELEŞME YOK İSE : İZOTONİK NaCL İLE ÜÇ
DEFA YIKA-SANTRİFÜJ ET
 7.ÜSTTEKİ SIVIYI AT
 8. YIKANMIZ ERİTROSİTE 2 DAMLA AHG DAMLAT
 1000 DEVİRDE 1 DAKİKA SANTRİFÜJ ET
 KÜMELEŞMEYİ GÖZLE
 POZİTİF KONTROL:NEGATİF TESTE IgG
BAĞLANMIŞ HÜCRE SÜSPANSİYONU (COOMBS
HÜCRESİ) İLE KÜMELEŞME
ANTİKOR VE EPİTOP NEDİR?
 Antikor, B lenfositler ve plazma hücreleri tarafından
üretilen immunglobulin (AGME) yapısındaki
proteinlerdir.
 Her antikor kendisinin üretilmesine yol açan antijen
epitopu ile seçici ve güçlü olarak bağlanır.
EPİTOP
 Epitop antijen molekülünün antikor üretimini
uyarabilen her bir parçasının adıdır.
 Bir antijen birden çok epitopu olabilir.
 Epitoplar genellikle peptit parçalardır.
 Bunun anlamı her Anti D antikorunun aynı
olmayacağıdır.
 Monoklonal antikorlar tek epitopa karşıdır.
Ig G PARÇALARI
 Ig G ANTİKORUN İKİ FAB VE BİR FC BACAĞI
VARDIR. Ig G “Y” ŞEKLİNDEDİR.
 ANTİKOR ANTİJENE FAB (FRAGMENT ANTİBODY)
UCU İLE ÖZGÜL OLARAK BAĞLANIR
YANLIŞ NEGATİF
SERUM VEYA KIRMIZI KAN HÜCRELERİ ETKİNLİĞİNİ KAYBETMİŞ
ANTİ (anti-Jka, -Jkb) TESBİTİ İÇİN AKTİF KOMPLEMAN
GEREKİR. EDTA lı kan ile tesbit edilemeyebilir.
SICAKLIK VE BEKLETME SÜRESİ ANTİKOR-KOMPLEMAN
BAĞLANMA SÜRELERİNİ ETKİLEYEBİLİR.
ORAN OPTİMAL OLMAYABİLİR.
OPTİMAL SERUM/HÜCRE 2-3 DAMLA PLAZMA/1 DAMLA %5
KKH DİR.
AŞIRI ÇALKALAMA
Anti JKa ve JKb antikorları, polispesifik AHG ve komplemanı
korun muş kan ile daha iyi tespit edilir.
İNDİRET ANTİGLOBULİN NEGATİF
TRANSFÜZYON ETKİSİ AZALMIŞ
 AMNESTİK REAKSİYON
 UNUTULMUŞ CEVAPLAR 3. GÜNDE HIZLI ANTİKOR
ARTIŞI YAPAR
 İAT + LEŞİR
YANLIŞ POZİTİF
 KULLANILAN HÜCRE DAT + DIR
 SOĞUK AGLUTİNİN AHG ÖNCESİ POZİTİF VERİR.
 AŞIRI SANTRİFÜJ POZİTİF SONUÇ VEREBİLİR.
 KİRLİ CAM YÜZEYİ KKH KÜMELENDİREBİLİR.
KLİNİK ÖRNEKLER
 BEBEK PLAZMASI ANNE PLAZMASINDAN GEÇEN
ANTİKORLARIN SEROLOJİSİNİ GÖSTERİR.
 BEBEKTE D COOMBS + İSE ANNE PLAZMASINDA
ANTİKOR TARAMA YAPILIR.
 AKUT HEMOLİTİK REAKSİYON
 OTO-ALLO İMMUN HEMOLİZ.
ANNEDE ANTİ D VE KELL ÖNEMLİ
Anti D ANTİKOR POZİTİFLİĞİ
D+ KAN VERİLMESİ
D+ GEBELİK
D+ DÜŞÜK
GEBE ANNEDE 1:32 ANTİ D ÖNEMLİ. BEYİN ORTA ARTER
KAN AKIMI—İNTRA UTERİN TRANSFÜZYON
K POZİTİFLİĞİ
GEBE ANNEDE 1:8 ANTİ KELL ÖNEMLİ.
İNDİREKT AHG KULLANIMI
 İMMUN HEMOLİTİK ANEMİ
 D+ VEYA K+ KOCASI OLAN GEBE
 TRANSFÜZYON ÖNCESİ UYGUNLUK TESTİ
MODELİ-SONRA İMMEDİATE
 ELÜSYONLA ANTİKOR ARANMASI
SUB GRUP SUTÜNLARINDAN
BAZILARI
 D,C,E,c,e,
 K,k,
 M,N,S,s,
 Lea, Leb,
 Fya, Fyb,
 Jka, Jkb ,
 Xg
 P1,
37 °C’de invitro saptanan klinik
olarak anlamlı antikorlar
 Her zaman klinik olarak potansiyel anlamlı kabul edilen antikorlar
 ABO
 Duffy
 Rh














Kidd
Kell
SsU
Bazen anlamlı reaksiyona yol acabilen antikorlar
Lewis
Lutheran
MNS
Cartwright
P
Cok nadiren klinik olarak anlamlı reaksiyona neden olan antikorlar
Leb
Xga
Chido/Rodgers Bg
York HTLA
sık karşılaşılan antikorlar
 anti-D, anti-E, anti-K, anti- Fya
 Antikoru bulduysan onun klinik bilgi tablosuna bak
 Tarama hücresinde bakılmış olması zorunlu en az
antijenler
 C;Cw;c;D;E;e;K;k;Kpa;Fya;Fyb;Jka;Jkb;S;s;Lea;Leb;M;N;P1
ve Lua.
ANTİKOR TANIMLAMA ÖRNEĞİ
5 VERİCİ
TABLOLARIN DEĞERLENDİRİLMESİNDE
DİKKAT EDİLMESİ GEREKENLER
 1.ADIM +3 VE +4 VE NEGATİF VERİCİLERİ
DEĞERLENDİR. ŞÜPHEDEN UZAK
 2. ADIM +2 VE +1 LERİ AL, KALAN İŞARETLİ
SÜTÜNLARLA DEVAM ET
 3. ADIM. ENZİM Lİ HÜCRE İLE TESTİ TEKRARLA.
ENZİMLE POZİTİFLİĞİ KAYBOLANLARA BAK
 DOĞRULAMA:BULUNAN SUBGRUP NEGATİF KAN
İLE UYGUN ÇAPRAZ SONUCU
Antikor bulundu
 Antikorun Antijenini taşımayan kan torbası taraması-
Sub grup tayinleri
 Çapraz tam uygun torba taraması (antijen sıklıklarının
çarpımı kadar torba)
 Çapraz en az reaksiyon veren torba
 AHG siz çapraz uygun kan
 ABO ve D uygun uyumsuz kan
 Tüpte hemolizle bitmeyen çapraz uygunsuzluğu
 Biyolojik uyum testi :10-15 ml yetersiz uyumlu kan ver,
bekle, damar içi hemoliz için kan örneği al.