dna çalışması

“ULUSAL BİYOÇEŞİTLİLİĞİNİN VE GEN
KAYNAKLARININ KORUNMASI HEDEFLERİ
DOĞRULTUSUNDA BÜYÜK MEMELİ
TÜRLERİNİN ARAŞTIRILMASI, KORUNMASI
VE YÖNETİMİ”
Örnekleme Çalışmaları: Önemli
Noktalar
DNA ÇALIŞMASI
Projenin öncelikli amacı DNA bankası
kurulması olduğu için örnekleme ve miktar
önemlidir.
En iyi, yüksek kalite, temiz ve kırılmamış DNA
pıhtılaşmamış kandan elde edilir.
Heparinli vb tüplere alınmış kanlardan DNA
eldesi proje için iyi değildir.
MUTLAKA EDTA içeren tüplere kan alınmalı
ve kan ters yüz edilerek tüp içindeki EDTA ile
karıştırılmalıdır.
1
DNA ÇALIŞMASI
Canlı yakalanmış hayvanlardan sizlere
sağlanacak 2şer tane 10 ml.lik vakumlu
EDTAlı tüplere veteriner yardımı ile kan
alınmalıdır.
DNA ÇALIŞMASI
Ölü bulunmuş hayvanlardan karaciğer ya da
etinden bir parça sizlere sağlanmış alkol
içeren 50 ml.lik tüplere konmalıdır.
2
DNA ÇALIŞMASI
Örnekler buzdolabında tutulmalı, buzdolabı
yoksa soğuk ortamda muhafaza edilmelidir.
Örnekler buzdolabında durdukça ara ara ters
yüz edilmeli pıhtılaşma durumu kontrol
edilmelidir.
HÜCRE ÇALIŞMASI
Hücre kültürü çalışmaları için ana materyal
hayvanlardan alınan doku parçalarıdır.
Bu doku parçaları kulak ve kas dokusu
olabilir.
Eğer hayvanlar canlı ise kulak makası ile
kulaktan alınan küçük bir parça yeterlidir.
Hayvan ölü olarak ele geçmişse kulak ve kas
dokularından parçalar alınabilir.
3
HÜCRE ÇALIŞMASI
HAZIRLANMASI GEREKEN SOLÜSYONLAR
DPBS (Ca ve Mg Free) : Toz ve sıvı halde satışı
yapılmaktadır. Sigma D8537 katalog numaralı DPBS
hazır sıvı haldedir. Steril edilmiştir. SİGMA D5652 (1
LX10) katalog numaralı DPBS ise toz haldedir. 1 litre
için hazırlanmış olan şişeler, ultra saf su içinde
çözülür. pH ayarlaması yapılarak 7,2-7,3 arasına
sabitlenir. Hazırlanan solüsyon laminar kabin altında
0,22 µm lik filtre ile sterilize edilir. Kullanıma kadar
+4°C’de saklanır.
Antibiyotik Solüsyonu: SİGMA A 5955 katalog
numaralı ürün kullanılmalıdır. -20°C’de saklanan ürün
kullanım öncesi çıkarılarak çözülmesi sağlanır.
Çözülen solüsyon +4°C’de saklanır.
HÜCRE ÇALIŞMASI
Arazi öncesinde; laminar kabin
içerisinde DPBS içerisine %5
Antibiyotik eklenerek 15 ml’lik
tüpler içerisine her birinde 10 ml
olacak şekilde bölünür.
Hazırlanan tüpler buz kalıpları
ile birlikte saklama kabına
yerleştirilmelidir.
4
HÜCRE ÇALIŞMASI
Doku parçaları alınırken en önemli nokta
sterilizasyondur.
Bunun için doku parçaları alınmadan önce bölgenin
%70 alkol ile mutlaka temizlenmesi, dokuyu almaya
yarayan cerrahi setlerin teknik alkolden geçilirlikten
sonra ateş ile sterile edilmelidir.
Alkol yok ise su ile temizlenmelidir.
Doku parçası alındıktan sonra hemen uygun
solüsyonun içine yerleştirilmeli ve +4°C’yi
sağlayabilecek ortama yerleştirilmelidir.
HÜCRE ÇALIŞMASI
Ortam +4°C’yi sağlamalıdır. Dokular
alındıktan sonrada yine buz kalıplarının
yanına yerleştirilmelidir.
Dokuların yer aldığı tüplerin asla
donmaması ve oda ısısında tutulmaması
gerekmektedir.
5
HÜCRE ÇALIŞMASI
! ÖNEMLİ AYRINTILAR !
Doku ve kan örnekleri ile ilgili olarak arazi
kayıt
bilgilerinin
çok
iyi
tutulması
gerekmektedir.
Hangi
gün araziye gidildiği, hangi
bölgeden alındığı, tür adı, bireyin numarası,
cinsiyeti, yaşı ve ilgili bilgileri, GPS
koordinatları mutlaka alınmalıdır.
Örneklerin bulunduğu tüplerin üzerine örnek
ile ilgili bilgi ve tarih yazılmalıdır.
6
ÖRNEKLEME İÇİN KATILIM
Tüm ilgili İl Müdürlüklerine birer koli
gönderilecektir.
Bu kolinin içeriğinde;
•
•
•
DNA için vakumlu kan tüpü ve iğneleri (canlı
bireyler için)
DNA için alkol içeren 50 ml.lik tüp (ölü bireyler
için)
DNA için kalpten kan alınırsa konulacak 50 ml.lik
tüp (ölü bireyler için) ve şırınga
ÖRNEKLEME İÇİN KATILIM
Bu kolinin içeriğinde;
• Hücre için kulak doku parçası konulacak 15 ml lik
tüp (Hayvan canlı veya trofesi önemli değilse)
•
Hücre için kas (et) doku parçası konulacak 15 ml
lik tüp (Hayvanın trofesi önemli ise)
•
Buz aküsü (arazi çalışması öncesi ve örnekler bize
gönderilmeden önce buzlukta dondurulmalı)
•
Defter ve kalem
7
8